Группа Н09
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
КОНСЕРВЫ
Приготовление растворов реактивов, красок, индикаторов и питательных сред,
применяемых в микробиологическом анализе
Canned food. Preparation of reagent solutions, dyes, indicators and culture media
for microbiological analysis
ОКСТУ 9109
Дата введения 1985-07-01
ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 17.01.84
Ограничение срока действия снято по протоколу N 4-93 Межгосударственного Совета по стандартизации, метрологии и сертификации (ИУС 4-94)
ВЗАМЕН ГОСТ 10444.1-75
ИЗДАНИЕ с Изменением N 1, утвержденным в июле 1990 г. (ИУС 11-90)
Настоящий стандарт распространяется на методы приготовления растворов реактивов, красок, индикаторов и питательных сред, применяемых в микробиологическом анализе.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
1. ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ
1.1. Для приготовления растворов реактивов, красок, индикаторов и питательных сред (если нет специальных указаний) применяют:
воду дистиллированную по ГОСТ 6709-72;
реактивы квалификации х. ч. и ч. д. а. по ГОСТ 13867-68;
вспомогательные реактивы и растворы по ГОСТ 4517-87;
растворы индикаторов по ГОСТ 4919.1-77.
1.2. Растворы реактивов, красок, индикаторов приготовляют, используя стеклянную, лабораторную, мерную посуду, вымеренную для слива, класса А; для приготовления питательных сред (если нет специальных указаний) используют стеклянную лабораторную мерную посуду, вымеренную для слива, класса Б.
1.3. Питательные среды приготовляют в эмалированной или стеклянной посуде. Новую стеклянную посуду, в том числе колбы, пробирки, пипетки, бактериологические чашки Петри, перед употреблением выдерживают в течение 12-24 ч в растворе соляной кислоты (HCl)=0,25-0,50 моль/дм , промывают водопроводной, а затем дистиллированной водой и автоклавируют при температуре (121±1) °С в течение 1 ч.
1.4. Если в технологии приготовления питательных сред не указаны условия растворения питательных сред или компонентов, то их растворяют при перемешивании в воде комнатной температуры до полного растворения не менее 15 мин и затем, при необходимости, нагревают до растворения среды или ее компонентов.
1.5. Необходимое значение рН питательных сред устанавливают с помощью раствора гидроокиси натрия концентрации 100 г/дм или раствора лимонной кислоты концентрации 200 г/дм , или раствора соляной кислоты концентрации 36,5 г/дм , по каплям прибавляя при перемешивании раствор к питательной среде и определяя значение рН в периодически отбираемой пробе потенциометрически или с помощью индикатора. Значение рН питательных сред при стерилизации может изменяться. При подщелачивании среды щелочью рН после кипячения и стерилизации снижается примерно на 0,2, а при приготовлении сред с настоем печени - на 0,3-0,4. Поэтому при приготовлении сред устанавливают рН на 0,2-0,4 выше заданного, кипятят, пока рН не понизится на 0,2-0,3, снова проверяют рН, исправляют, при необходимости, и стерилизуют в автоклаве. Обязательно проверяют рН после стерилизации.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
1.6. Питательные среды, если нет специальных указаний, стерилизуют по ГОСТ 26668-85.
1.7. Готовые питательные среды хранят, если нет специальных указаний, при комнатной температуре не более 3 сут и при температуре около 4 °С не более одного месяца.
2. АППАРАТУРА
Для приготовления растворов реактивов, красок, индикаторов и питательных сред применяются:
автоклав для стерилизации питательных сред;
стерилизатор паровой медицинский по ГОСТ 19569-89;
пластины асбестовые фильтрующие и стерилизующие по ГОСТ 480-78;
баня водяная с терморегулятором, позволяющая поддерживать температуру от 20 до 100 °С с отклонением до 1 °С от заданной;
весы лабораторные по ГОСТ 24104-88*;
____________
* С 01.07.2002 г. вводится в действие ГОСТ 24104-2001.
воронки для горячего фильтрования;
воронки стеклянные по ГОСТ 25336-82;
гомогенизатор или смеситель лабораторный;
горелка газовая или спиртовка по ГОСТ 25336-82;
дистиллятор электрический марки Д N 9;
капельницы;
кастрюли разные;
колбы плоскодонные конические или круглые разной вместимости по ГОСТ 25336-82;
кюветы разные для окрашивания препаратов;
марля медицинская по ГОСТ 9412-93;
мясорубка по ГОСТ 4025-95;
ножи;
ножницы;
палочки стеклянные по ГОСТ 25336-82;
пинцеты по ГОСТ 21241-89;
пипетки Мора;
пипетки разной вместимости;
плитка электрическая по ГОСТ 14919-83;
рН-метр;
пробирки разной вместимости по ГОСТ 25336-82;
промывалка;
рефрактометр;
ареометр по ГОСТ 18481-81;
сетки асбестовые;
стекла часовые;
ступки фарфоровые по ГОСТ 9147-80;
термометры химические от 0 до 50 °С и от 50 до 100 °С по ГОСТ 28498-90;
термостаты, позволяющие поддерживать температуру в пределах от 28 до 55 °С с отклонением до 0,5 °С от заданной;
фильтры Зейтца;
фильтры мембранные N 2;
флаконы вместимостью 100-200 см ;
холодильник по ГОСТ 16317-87;
центрифуга, обеспечивающая частоту вращения 50 с (3000 об/мин);
цилиндры разной вместимости по ГОСТ 1770-74;
часы песочные ОСТ 25-11-38-84;
чашки Петри бактериологические по ГОСТ 25336-82;
шкаф сушильный;
шпатели металлические;
шпатели стеклянные;
шприцы по ГОСТ 22967-90.
3. РЕАКТИВЫ, РАСТВОРЫ И МАТЕРИАЛЫ
Для приготовления растворов реактивов, красок, индикаторов и питательных сред применяются:
агар микробиологический по ГОСТ 17206-96;
агар сухой питательный;
аммоний лимоннокислый;
аммоний щавелевокислый 1-водный по ГОСТ 5712-78;
ацетон по ГОСТ 2603-79;
бром по ГОСТ 4109-79;
бромкрезолпурпур;
бромтимоловый синий;
водорода пероксид по ГОСТ 10929-76;
бумага фильтровальная по ГОСТ 12026-76;
вата гигроскопическая медицинская по ГОСТ 5556-81;
вода дистиллированная по ГОСТ 6709-72;
глицин;
глицерин по ГОСТ 6824-96;
глюкоза по ГОСТ 6038-79;
дрожжи хлебопекарные прессованные по ГОСТ 171-81;
желатин пищевой по ГОСТ 11293-89;
железоаммонийные квасцы;
железо (II) сернокислое 7-водное по ГОСТ 4148-78;
железо треххлористое 6-водное по ГОСТ 4147-74;
инфузорная земля;
йод по ГОСТ 4159-79;
калий азотнокислый по ГОСТ 4217-77;
калий двухромово-кислый по ГОСТ 4220-75;
калий сернокислый по ГОСТ 4145-74;
калий йодистый по ГОСТ 4232-74;
калий углекислый по ГОСТ 10690-73;
калия теллурит;
калий фосфорнокислый однозамещенный по ГОСТ 4198-75 или двузамещенный 3-водный по ГОСТ 2493-75;
кальций углекислый по ГОСТ 4530-76;
капуста по ГОСТ 1724-85;
картофель по ГОСТ 7176-85;
кислота аскорбиновая;
кислота лимонная пищевая по ГОСТ 908-79;
кислота молочная пищевая по ГОСТ 490-79;
кислота серная по ГОСТ 4204-77;
кислота соляная по ГОСТ 3118-77;
кислота уксусная по ГОСТ 61-75;
крахмал растворимый по ГОСТ 10163-76;
кристаллический фиолетовый;
кровь кролика;
кровь крупного рогатого скота, лошади или барана;
лакмус или лакмоид;
лактоза;
литий хлористый 6-водный;
маннит;
масло вазелиновое медицинское по ГОСТ 3164-78;
медь (II) сернокислая 5-водная по ГОСТ 4165-78;
молоко коровье пастеризованное по ГОСТ 13277-79;
мясо говядина по ГОСТ 779-55, мясо баранина по ГОСТ 1935-55;
мясо-телятина по ГОСТ 779-55;
мясо-конина по ГОСТ 27095-86;
мука кукурузная по ГОСТ 14176-69;
натрия гидроокись по ГОСТ 4328-77;
натрий лимоннокислый трехзамещенный по ГОСТ 22280-76;
натрия пируват;
натрий сернистокислый;
натрий углекислый по ГОСТ 83-79;
натрий фосфорнокислый двузамещенный по ГОСТ 11773-76 и однозамещенный 2-водный по ГОСТ 245-76;
натрий уксуснокислый 3-х водный по ГОСТ 199-78;
натрий хлористый по ГОСТ 4233-77;
натрия азид;
1-нафтол;
парадиметиламинобензальдегид;
парафин по ГОСТ 23683-89;
панкреатин (порошок, в 1 г - 25 ед.);
поджелудочная железа убойного скота;
пирогаллол;
плазма крови кроличья или человеческая;
пепсин;
пептон сухой ферментативный для бактериологических целей по ГОСТ 13805-76;
печень говяжья, телячья, кроличья, не содержащая ингибиторов, роста микроорганизмов;
рыба треска или пикша, судак, щука по ГОСТ 814-96;
сахароза по ГОСТ 5833-75;
сафранин: О или Т;
солод ячменный;
соль закиси железа и аммония двойная сернокислая - соль Мора по ГОСТ 4208-72;
спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962-67*;
____________
* На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 51652-2000.
спирт этиловый сырец по ГОСТ 131-67;
сок томатный по ГОСТ 937-91;
трипсин;
триптон;
триптический гидролизат казеина;
триптофан;
2, 3, 5-трифенилтетразолиум хлорид;
уголь активный по ГОСТ 4453-74;
фенолфталеин (индикатор);
фуксин (основной и кислый);
хлороформ по ГОСТ 20015-88;
цистеина гидрохлорид;
экстракт дрожжевой сухой;
экстракт мясной;
яйца куриные по ГОСТ 27583-88.
4. ПРИГОТОВЛЕНИЕ РАСТВОРОВ РЕАКТИВОВ, КРАСОК, ИНДИКАТОРОВ И КОМПОНЕНТОВ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ
4.1. Агар голодный
2,0 г агара растворяют в 98 см дистиллированной воды, стерилизуют при температур (121±1) °С в течение 20 мин.
Применяют для наслаивания на посевы с целью предотвращения соприкосновения посевов с кислородом воздуха.
4.2. Взвесь (эмульсия) яично-желточная в физиологическом растворе.
Из яйца, протертого с поверхности спиртом с объемной долей 70%, извлекают пипеткой желток и смешивают его со 100 см физиологического раствора. Желточную эмульсию приготовляют аналогично, но берут два желтка и смешивают их с 10 см физиологического раствора.
Добавляют к питательным средам для определения лецитиназной активности микроорганизмов.
Допускается яично-желточную эмульсию приготовлять следующим образом: свежие куриные яйца моют, ополаскивают холодной водой, опускают в раствор этилового спирта с объемной долей 70% и высушивают. Соблюдая правила асептики, разбивают каждое яйцо в стерильную чашку Петри и отделяют желток от белка. Помещают желток в стерильную колбу или флакон с четырьмя объемами стерильной воды и энергично перемешивают. Нагревают смесь на водяной бане при температуре (45±1) °С в течение 2 ч, оставляют на 18-24 ч при температуре от 0 до плюс 5 °С для формирования осадка.
Соблюдая правила асептики, собирают эмульсию над осадком. Эмульсию хранят при температуре от 0 до плюс 5 °С не более 72 ч.
4.3. Вода бромная
3-3,5 см брома растворяют в 100 см дистиллированной воды. Приготовляют бромную воду в вытяжном шкафу. Хранят в темной склянке с притертой пробкой в защищенном от света месте.
Применяют в качестве индикатора при определении содержания триптофана в питательных средах. При наличии триптофана в присутствии 3-4 капель бромной воды жидкость принимает розово-фиолетовую окраску.
4.2, 4.3. (Измененная редакция, Изм. N 1).
4.4. Вода пептонная
1 г пептона растворяют в 1 дм дистиллированной воды, разливают по 10 см в пробирки и по 100 см в колбы. Затем стерилизуют 20 мин при температуре (121±1) °С.
4.5. Глюкоза концентрации 5, 10, 100 и 200 г/дм , водные растворы
0,5; 1; 10; 20 г глюкозы переносят, смывая стерильной дистиллированной водой, в мерную колбу вместимостью 100 см и доводят объем до метки. Разливают приготовленный раствор глюкозы в стерильные пробирки и стерилизуют при температуре (112±1) °С в течение 15 мин или при температуре (100±1) °С в течение 3 сут по 30 мин, или фильтрованием через мембранный фильтр.
Применяют в качестве источника углеводов в питательных средах и восстанавливающего вещества в питательных средах для анаэробных микроорганизмов.
4.6. Индикатор Андреде
0,5 г кислого фуксина растворяют в 100 см дистиллированной воды, прибавляют 16,4 см раствора гидроокиси натрия (NaOH)=1 моль/дм и стерилизуют при температуре (100±1) °С в течение 5 мин. Индикатор должен иметь соломенно-желтый цвет. Хранят во флаконе из темного стекла (с притертой пробкой).
Применяют для приготовления среды Гисса.
4.7. Индикатор бромкрезолпурпур - щелочной раствор, готовят по ГОСТ 4919.1-77.
Применяют для определения кислотообразующей способности микроорганизмов.
4.8. Индикатор бромтимоловый синий - щелочной раствор, готовят по ГОСТ 4919.1-77.
Применяют для контроля рН питательных сред.
