Статус Проект Порядок розслідування, обліку і проведення лабораторних досліджень у випадках харчових отруєнь. Інструкція

74

4,12, 18,32, 34

55

59

1,2,4,6,7,8,10,11,12,19,21,25,27,32,33,34,39

86а

61

2, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 18, 21, 26, 27, 34, 47

111а, 111b

58

2,4,6,7,11,12,16,20,21,25,27,30,32,34,40,”635”

112а, 112с

66

Н-

114

90

4.10.21.32

119

69

1, 2, 4, 5, 6, 8, 9, 11, 18, 25,27, 32, 39, 40

124

72

2,16, 19, 30, 32, 38,12

125

70

2,4,6,7,10,11,12,15,19, 21,25,30,32, 40

126

71

2,5,7,9,10,11,12,19,20,21,27,29,30,33,34,45

127

63

1, 4, 5, 6, 9, 11, 19, 21, 26, 27, 33, 40

128аbc

67

2, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 16,19,21, 27, 35

142

86

6,18,38

143

12

144

4,Н-

151

-

10,11

“408”

10,12

Примітка: Н- – нерухомі, можуть бути в кожній серогрупі і являються самостійним сероваром. Крім перелічених у таблиці різновидів, у різних країнах окремими дослідниками описані як збудники гострих кишкових захворювань ешеріхії інших серологічних груп. До їх числа відносяться ешеріхії О-груп: 04, 06, 08, 022, 027, 028, 042, 073, 075, 086а, 091, 091, 0112, 0114, 0127а, 0136, «561» -015 К62, «10244»-0117: К62, «21706»-077:К62, 197, та ін.

Серологічна ідентифікація ешеріхій проводиться за допомогою ОК-сироваток. В окремих випадках обов'язково, а в інших бажано застосування О-сироваток.

Для визначення Н-антигена використовують Н-сироватки.

11.2. Бактеріологічні дослідження

Другий день Вибирають характерні колонії і пересівають їх на поверхню скошеного МПА та на середовище Олькеніцького (Кліглера). Посіви інкубують 18 – 24 години при (37±1) ºС.

Вибір колоній для дослідження із середовища Ендо роблять після ретельного перегляду морфології і кольору колоній. При наявності тільки однотипних колоній для подальшого дослідження відбирають 10 колоній. При виявленні кількох видів колоній відбирають 3-5 колоній кожного виду як лактозопозитивні так і лактозонегативні.

З чашок із середовищем Плоскірева відбирають тільки блідо-рожеві і безбарвні колонії, схожі на колонії шигел, тому що деякі ешеріхії, що викликають дизентерієподібні захворювання, уповільнено ферментують лактозу, а ріст їх на середовищі Плоскірева не пригнічується.

Відібрані колонії засівають на середовище Олькеніцького (Кліглера) і скошений МПА

Якщо на другий день дослідження на середовищі Ендо відсутній ріст підозрілих на ешеріхії колоній або виявляються поодинокі колонії при посіві нерозведеного матеріалу, роблять пересів петлею, на середовище Ендо з пробірок з первинними посівами на середовищі Кесслер.

Третій день Проводять облік результатів посіву на середовище Кесслер, враховуючи помутніння та газоутворення та висівають на середовище Ендо.

При наявності росту бактерій на середовищі Ендо з посівів із середовища Кеслер, подальшу роботу проводять так як описано у відношенні колоній, що виросли на середовищі Ендо з первинним посівом матеріалу.

Культури, відсіяні в попередній день на середовище Олькеніцького (Кліглера) і скошений МПА, вивчають у такий спосіб:

на середовищі Олькеніцького (Кліглера) враховують газоутворення при ферментації глюкози, розщеплення лактози, сечовини і продукцію сірководню.

Подальшому дослідженню піддають культури штамів, що не продують сірководню і не розщеплюють сечовину;

пересівають культури грамнегативних паличок на напіврідкий (0,3%) поживний агар для визначення рухливості і на середовища мінімального диференційного ряду (таблиця 1) для визначення біохімічних властивостей бактерій. Для прискорення досліджень, отримання відтворюваних результатів доцільно для біохімічної ідентифікації використовувати діагностичні системи та набори, що зареєстровані в Україні, типу ЕНТЕРОтест (PLIVA-Lachema), АРІ (bioMereux).

культури грамнегативних паличок зі скошеного агару випробовують у реакції аглютинації на склі з полівалентною ОКА-сироваткою, у випадку позитивного результату продовжують з ОК- сироватками більш вузького спектру дії – ОКВ, ОКС, ОКД, ОКЕ. При позитивній реакції з однією з цих сироваток продовжують з моновалентними ОК-сироватками або з ОК-імуноглобулінами, що входять до тієї полівалентної, котра викликає аглютинацію бактерій;

у штамів, що аглютинувалися на склі з якою-небудь моновалентною ОК-сироваткою або ОК-імуноглобуліном, визначають у реакції аглютинації на склі О-антиген з адсорбованими груповими і факторними О-сироватками з грітою культурою (30 хв. при 100 ºС).

перша попередня відповідь може бути видана на третій день після одержання результатів реакції аглютинації бактерій на склі з моновалентними ОК-сироватками.

У випадку позитивної реакції аглютинації з однієї з моновалентних сироваток відповідь формулюють у такий спосіб: “В... (вказати матеріал дослідження) виявлені бактерії підозрілі як ентеропатогенні ешеріхії вказати ОК-групу, наприклад, 055:К5 або 026:К6 і т. ін.), дослідження продовжується”.

При негативних результатах аглютинації на склі відповідь формулюють: “В... (вказати матеріал дослідження) ентеропатогенних ешеріхій не виявлено, дослідження продовжується”.

В певних випадках для окремих серологічних варіантів ешеріхій необхідно встановлення епідеміологічних маркерів. В таблицях 17, 18, 19, 20, 21 представлені схеми біохімічного типування деяких сероварів ешеріхій.

Таблиця 17

Схема визначення біоварів E.coli O75:K95

(Голубева І.В., Андронова Н.І.1982)

Серовар

Біовар

Глюкоза (газ)

Дульцит

Рамноза

Саліцин

О75:К95:Н5

1

+

+

+

+

О75:К95:Н5

2

+

+

+

-

О75:К95:Н5

3

+

(+)

+

+

О75:К95:Н5

4

+

(+)

+

(+)

О75:К95:Н5

5

+

-

-

(+)

О75:К95:Н19

+

(+)

+

-

О75:К95:Н19

+

+

+

(+)

О75:К-:Н7

+

+

+

+

О75:К95:Н10

О75:К95:Н16

+

+

+

-

Таблиця 18

Схема визначення біоварів EPEC O142:K86 (Гедзе Г.І., 1982)

Серовар

Біовар

Глюкоза (газ)

Дульцит

Сорбіт

Сахароза

О142:К86:Н6

1

-

(+)

-

+

О142:К86:Н6

2

+

(+)

-

+

О142:К86:Н18

3

+

+

+

+

О142:К86:Н38

4

+

(+)

+

-

Таблиця 19

Схема визначення біоварів EPEC О151:К-

(Кисельова Б.С. та ін. 1976)

Серовар

Біовар

Глюкоза (газ)

Дульцит

Сорбіт

Арабіноза

Лізинде-карбокси-лаза

О151:К-Н10

1

+

+

+(1-2)

+

+

О151:К-Н10

2

-

+

+(1-2)

-

+

О151:К-Н10

3

-

+

-

-

-

О151:К-Н10

4

-

+

+(1-2)

+

+

О151:К-Н11

5

-

-

(+)

+

(+)

Таблиця 20

Схема визначення біоварів ЕРЕС О144:К

(Кисельова Б.С. та ін. 1975)

Серовар

Біовар

Глюкоза (газ)

Дульцит

Сорбіт

Арабі-ноза

Лізинде-карбокси-лаза

О144:К:Н-

1

-

(+)

-

-

-

О144:К:Н4

2

+

+

-

+,(+)

(+)

О144:К:Н18

3

+

-

(+)

(+)

-,(+)

О144:К:Н25

Таблиця 21

Схема визначення біоварів ЕРЕС О124:К72

(Голубєва І.В., Кісельова Б.С. та ін. 1982)

Серовар

Біовар

Глюкоза (газ)

Лакто-за

Дуль-цит

Рамно-за

Салі-цин

О124:К72:Н-

О124:К72:Н30

1

+,-

(+)

-

(+)

-

О124:К72:Н30

2

+,-

(+)

(+)

-

-

О124:К72:Н2

3

+

+

(+)

+

+

О124:К72:Н12

Четвертий день Враховують результати визначення рухливості бактерій та біохімічних властивостей. На підставі цих тестів встановлюють належність виділених бактерій до роду Escherichia. Проводять облік результатів біохімічного типування

Для визначення Н-антигену використовують метод, заснований на принципі іммобілізації у напіврідкому агарі рухливих бактерій у присутності Н-сироватки, що відповідає їх Н-антигену. Для цього пересівають уколом з напіврідкого агару рухливі штами ешеріхій, віднесені за результатами реакції аглютинації на склі до ентеропатогенних різновидів, на ряд пробірок з напіврідким 0,3% агаром, кожна з яких містить одну з Н-сироваток і інкубують18 – 20 годин при (22-27) ºС.

У пробірці, у якій сироватка відповідає Н-антигену засіяного штаму, бактерії ростуть уздовж лінії уколу. В інших пробірках, що містять сироватки, не відповідні Н-антигену досліджуваного штаму, бактерії при вирощуванні вільно поширюються і викликають дифузне помутніння всього середовища.

Н-антиген в антигенній формулі штаму позначають по найменуванню Н-сироватки, у присутності якої відбулася іммобілізація бактерій. Наприклад, рухливий штам ешерихій 055:К5 іммобілізувався в присутності сироватки Н6. Його повна антигенна формула позначається 055:К5:Н6.

Приготування діагностичного середовища (напіврідкого агару, що містить Н-сироватку) здійснюють з дотриманням всіх правил асептики.

Ампулу із сухою сироваткою розкривають і розчиняють вміст ізотонічним розчином NaCl. Вміст ампули змішують з попередньо розтопленим і охолодженим до (45-50) ºС напіврідким 0,3% поживним агаром і, не допускаючи застигання середовища, розливають по 2,5 см³ у стерильні бактеріологічні пробірки. Для контролю стерильності пробірки з застиглим діагностичним середовищем поміщають у термостат на 48 годин при (37 ±1) ºС.

Пересів ешеріхій на диференційний ряд із сахарозою, дульцитом, саліцином, сорбітом, рафінозою і рамнозою для одержання додаткових ферментативних “міток” штаму. Ці дослідження не проводять з різновидами ешеріхій, виділеними із середовища Кесслер, які не відносяться до ентеропатогенних.

П'ятий день Облік результатів визначення Н-антигену.

В остаточній відповіді вказують кількість виявлених ентеропатогенних різновидів ешеріхій у 1 г/см³ досліджуваного продукту з вказівкою їх антигенної формули, результати дослідження виділень потерпілих і реакції аглютинації з кров'ю потерпілих на наявність аглютинінів до гемокультури в динаміці.

Крім вище згаданих сероварів ешеріхій з 1982 року у світі реєструються харчові отруєння, викликані ентерогеморагічними кишковими паличками О157:Н7. Біохімічною ознакою, що відрізняє їх від інших кишкових паличок, є відсутність здатності ферментувати сорбітол і продукувати фермент -D-глюкуронідазу. За іншими біохімічними властивостями E.coli О157:Н7 практично не відрізняється від інших E.coli, крім того вона лактозопозитивна, що ускладнює її пошук. Тому для виділення E.coli О157:Н7 використовують поживне середовище яке має такий самий механізм дії як і середовище Ендо, але замість лактози воно містить сорбітол (“Сорбітол Е соІі 157: Н7 агар”). Середовище виробляє Державний науковий центр прикладної мікробіології (Росія, м.Оболенськ). Колонії E.coli О157:Н7 на цьому середовищі середньої величини, випуклі, круглі, безбарвні, прозорі в той час як колонії інших кишкових паличок забарвлюються в червоний колір. В усьому іншому схема дослідження не міняється.

Серологічна ідентифікація передбачає виявлення О- та Н-антигенів у E.coli О157:Н7. Визначення цих антигенів проводиться в реакції аглютинації на склі з ешеріхіозними сироватками до E.coli О157:Н7, що випускаються АТОВ “Біомед” ім.Мечнікова (Росія) або латексним антитільним діагностикумом виробництва ДНЦПМ (Росія, м. Оболенськ).

Для бактеріологічної діагностики гастроентероколітів, подібних до холери, в разі відсутності відповідних бактеріологічних знахідок, доцільно залучати методи визначення ентеротоксигенності виділених культур Е соІі. З цією метою можуть бути використані методи серологічної ідентифікації термолабільного ентеротоксину (Імуноферментний аналіз або Ко-агглютинація з антисироватками до термолабільного ентеротоксину). Опосередковану інформацію щодо ентеротоксигенності виділених штамів Е соІі, а також ентеробактерій інших родів наприклад: клебсіел, ентеробактерів, цітробактерів тощо ) можна отримати за рахунок реакції манітрезістентної гемаглютинації (Методичні рекомендації “Выявление патогенності ешерихий на питательных средах”, МОЗ України, 1991).