Приготування: інгредієнти змішують, розливають у флакони з поплавками по 50 cм3. Стерилізують автоклавуванням при (112??1) ºС 20 хв.
6,5%, 10% сольовий та 1% цукровий бульйони
Склад: |
М’ясо-пептонний бульйон |
– 100 cм3 |
|
Натрію хлорид або (глюкоза) |
– 6,5 (10)г або |
Приготування: сіль або глюкозу розчиняють у м’ясо-пептонному бульйоні, встановлюють рН таким чином щоб після стерилізації рН становило 6,9??0,1. Бульйон розливають у колби або пробірки і стерилізують при (121??1) ºС протягом 15 хв.
1% пептонна вода з 3% NaCl
Склад: |
Пептон |
– |
|
Хлористий натрій |
– |
|
Азотнокислий калій |
– |
|
Вуглекислий натрій |
– |
|
Дистильована вода |
– 1000 см3 |
|
рН 8,4-8,6 |
|
1% пептонна вода з 7% та 10% NaCl має ідентичний склад, але вміст NaCl збільшується до та відповідно.
1% пептонна вода без NaCl повинна вміщувати тільки воду та пептон. При її виготовленні підлужування проводять дуже обережно, так як у випадку додавання надлишкової кількості їдкого натру нейтралізація його соляною кислотою приведе до утворення NaCl і середовище буде непридатним для визначення галофільності.
Пептонну воду без NaCl не готують з основного розчину пептону, так як в ньому вже є хлористий натрій.
Сухий лужний агар
Склад: |
Пептон ферментативний |
– |
|
Екстракт дріжджів |
– |
|
Натрію хлорид |
– |
|
Натрію метабісульфіт |
– |
|
Натрію карбонат |
– |
|
Натрію фосфат двозаміщений |
– |
|
Агар |
– |
|
Дистильована вода |
– 1000 см3 |
|
рН 7,8??0,2 |
|
Приготування: наважку сухого препарату ретельно розмішують при нагріванні в 1000 см3 дистильованої води, кип’ятять протягом 2 – 3 хвилин до повного розплавлення агару, відстоюють протягом 30 хвилин, при необхідності фільтрують через ватно-марлевий фільтр, розливають у стерильні флакони, стерилізують насиченою парою при (121??1) º С протягом 20 хвилин у паровому стерилізаторі.
Середовище Вагатцума
Склад: |
Пептон |
– |
|
Дріжджовий екстракт сухий |
– |
|
Хлористий натрій |
– |
|
Двозаміщений фосфорнокислий калій |
– |
|
Агар-агар |
– |
|
Дистильована вода |
– 1000 см3 |
Приготування: перераховані інгредієнти розчинюють при нагріванні, але не стерилізують. Потім додають маніту, 0,1 см3 0,1% спиртового розчину кристалвіолету та 5,0 см3 дефібринованої крові людини. Середовище розливають в чашки, після застигання підсушують і використовують за призначенням.
Середовище Нікодемуса
Склад: |
Стерильній 2% поживний агар |
– 1000 см3 |
|
Етанол |
– 80 см3 |
|
Емульсія двох жовтків |
|
Приготування: до розплавленого і охолодженого до 45-50 ºС агару додають етиловий спирт і ,після перемішування, емульсію яєчних жовтків. Ретельно перемішують і розливають у чашки Петрі, які можна зберігати у холодильнику не більше 3 діб.
Емульсію яєчних жовтків готують шляхом емульгування відділених від білка 2 жовтків в 10 см3 стерильного фізіологічного розчину.
Сольовий-поліміксиновий агар з 2,3,5-трифеніл-тетразолій хлоридом (ТТХ)
Склад: |
Стерильний 2% поживний агар |
– 1000 см3 |
|
Хлорид натрію (NaCl) |
– |
|
Поліміксин «М» |
– 200000 – 400000 од |
|
2,3,5-трифеніл-тетразолій хлорид |
– 0,1 – |
|
Емульсія двох жовтків |
Приготування: в агар після розплавлення і охолодження до 45-50 ºС додають поліміксин, 2,3,5-ТТХ та емульсію жовтків, ретельно перемішують і розливають в чашки Петрі, які можна зберігати у холодильнику не більше 7 – 10 діб.
Кров’яний агар
Склад: |
Стерильний 2% поживний агар |
– 1000 см3 |
|
Кров дефібринована |
– 5 см3 |
Приготування: до розплавленого і охолодженого поживного агару додають кров, ретельно перемішують і розливають у стерильні чашки Петрі.
Середовища для попередньої диференціації
Трицукровий агар з сечовиною (Олькеніцького)
Склад: |
Дистильована вода |
– 1000 cм3 |
|
Сухій поживний агар |
– |
|
Лактоза |
– |
|
Сахароза |
– |
|
Глюкоза |
– |
|
Сечовина |
– |
|
Амоній-залізо (ІІ) сульфат (FeSO4·(NH4)2 ??·6Н2О) |
– |
|
Натрій тіосульфат(Na2S2O3·5Н2О) |
– |
|
0,4% водній розчин фенол-рот |
– 4 см3 |
Приготування: солі попередньо розчиняють в невеликій кількості дистильованої води. Вуглеводи і сечовину розчиняють так само, але підігріваючи на водяній бані. Сухий поживний агар розплавляють в решті води підігріваючи на вогні та помішуючи. Усі інгредієнти ретельно з’єднують, змішують з розплавленим агаром, фільтрують через марлевий фільтр, встановлюють рН 7,2–7,4. Додають індикатор, добре перемішують, розливають у пробірки по 6-7 см3. Стерилізують при (112??1) ºС 15 хв. Після стерилізації середовище скошують. При скошуванні залишають в нижній частині пробірки нескошений стовпчик висотою біля 2 – . Готове середовище має блідо-рожевий колір.
Агар Кліглера
Склад: |
Бульйон м’ясний |
– 1000 см3 |
|
Пептон |
– |
|
Лактоза |
– |
|
Глюкоза |
– |
|
Натрію хлорид (NaCl) |
– |
|
Натрію сульфіт (Na2SO3) |
– |
|
Натрію тіосульфат (Na2S2O3·??5Н2О) |
– |
|
Заліза (ІІ) сульфат (FeSO4·?? 7H2O) |
– |
|
Агар |
– |
|
Феноловий червоний (0,2% розчин в 50% етанолі) |
– 12 см3 |
Приготування: до м’ясної води додають послідовно пептон, солі натрію, агар і кип’ятять до повного розплавлення агару; встановлюють рН 7,8, знову кип’ятять, фільтрують через вату і додають інші інгредієнти; сульфат заліза попередньо розчиняють у невеликої кількості води. Готове середовище розливають у пробірки по 6-7 см3 і стерилізують при (112??1) ºС 30 хв. Скошують залишаючи в ніжній частині пробірки стовпчики висотою 2-.
Середовища для подальшої ідентифікації
Середовище Сімонса
Склад: |
Натрію цитрат (Na3C6Н5О7·5Н2О) |
– |
|
Натрію хлорид (NaCl) |
– |
|
Магнію сульфат (MgSO4·7Н2О) |
– |
|
Амонію дигідрофосфат ((NН4)2HPO4) |
– |
|
Калію гідрофосфат (КH2PO4) |
– |
|
Бромтимоловий синій |
– |
|
Агар-агар |
– |
|
Вода дистильована |
– 1000 см3 |
Приготування: Попередньо добре відмитий агар розплавляють при підігріванні у свіжо виготовленій дистильованій воді. Всі солі спочатку розчиняють у невеликій кількості води, потім розчин додають до розплавленого агару і доводять до 1000 см3. Встановлюють рН 6,9, додають індикатор у вигляді 0,2% водного розчину в об’ємі 40 мл, добре перемішують, розливають у стерильні пробірки по 5-7 см3, стерилізують при (121??1) ºС 15 хв. або при (112??1) ºС 30 хв. Охолоджують у скошеному положенні.
Середовище Крістенсена
Склад: |
Дистильована вода |
– 1000 см3 |
|
Натрію цитрат (Na3C6Н5О7·5Н2О) |
– |
|
Глюкоза |
– |
|
Дріжджовий екстракт |
– 22 см3 |
|
Цистеіна гідрохлорид |
– |
|
Калію дигідрофосфат (КH2PO4) |
– |
|
Натрію хлорид (NaCl) |
– |
|
Феноловий червоний 0,4% водний розчин |
– 3 см3 |
|
Агар-агар |
– |
Приготування: Попередньо всі інгредієнти розчиняють в невеликий об’ємах води, далі все з’єднують, додаючи решту води, добре перемішують, приєднуючи агар. Суміш нагрівають до повного розчинення агару, фільтрують, встановлюють рН, який в готовому середовищі повинен бути 6,7 і додають індикатор. Розливають по 5 см3 в стерильні пробірки. Стерилізують при (112??1) ºС 15 хв. Охолоджують у напівскошеному положенні, залишаючи стовпчик висотою .
Дріжджовий екстракт для середовища Крістенсена
Склад: |
Дріжджі пресовані хлібні (краще маточні) |
– |
|
Дистильована вода |
– 1000 см3 |
Приготування: В 1 дм3 води розчиняють хлібних дріжджів, кип’ятять протягом 1 години, після чого фільтрують через паперовий фільтр. Стерилізують при (112??1) ºС 30 хв. Додають 22 см3 екстракту на 1 дм3 середовища Кристенсена.
Середовище Кларка для вирощування бактерій при постановці реакцій з метиловим червоним (MR) і Фогеса-Проскауера (VP)
Склад: |
Пептон |
– |
|
Калію гідрофосфат (K2HPO4) |
– |
|
Глюкоза |
– |
|
Вода дистильована |
– 1000 см3 |
Приготування: інгредієнти розчиняють у воді, кип’ятять 2 – 3 хв., фільтрують через паперовий фільтр, встановлюють рН 6,9 – 7,0, розливають у пробірки по 4-5 см3. Стерилізують при (112??1) ºС 20 хв.
Реактив для тесту MR
Склад: |
Метиловий червоний |
– 0,1 |
|
Спирт етиловий (96 º) |
– 300 см3 |
Приготування: розчинити в етанолі фарбник і довести об’єм до 500 см3 дистильованою водою.
Реактив для тесту VP
Середовище з сечовиною (за Преусом)
Склад: |
Бульйон Хотингера |
– 1000 см3 |
|
Агар |
– |
|
Глюкоза |
– |
|
50% розчин сечовини |
– 20 см3 |
|
0,2% розчин бромтимолового синього |
– 12 см3 |
Приготування: агар розплавляють у бульйоні при підігріванні, фільтрують, встановлюють рН 6,9-7,0. Стерилізують при (121??1) ºС 20 хв. До стерильного поживного агару додають глюкозу, сечовину, індикатор. Середовище розливають в стерильні пробірки по 5 – 7 см3 і стерилізують текучою парою 15 хв., після чого скошують. Колір готового середовища оливковий.
Середовище з сечовиною (за Крістенсеном)
Склад: |
Пептон |
– |
|
Натрію хлорид (NaCl) |
– |
|
Калію дигідрофосфат (КH2PO4) |
– |
|
Агар |
– |
|
Глюкоза |
– |
|
Феноловий червоний (0,2% розчин) |
– 6 см3 |
|
Сечовина (20% водний розчин) |
– 100 см3 |
|
Вода дистильована |
– 1000 см3 |