Приготування: інгредієнти змішують, розливають у флакони з поплавками по 50 cм3. Стерилізують автоклавуванням при (112??1) ºС 20 хв.

6,5%, 10% сольовий та 1% цукровий бульйони

Склад:

М’ясо-пептонний бульйон

– 100 cм3

Натрію хлорид або (глюкоза)

– 6,5 (10)г або

Приготування: сіль або глюкозу розчиняють у м’ясо-пептонному бульйоні, встановлюють рН таким чином щоб після стерилізації рН становило 6,9??0,1. Бульйон розливають у колби або пробірки і стерилізують при (121??1) ºС протягом 15 хв.

1% пептонна вода з 3% NaCl

Склад:

Пептон

Хлористий натрій

Азотнокислий калій

Вуглекислий натрій

Дистильована вода

– 1000 см3

рН 8,4-8,6

1% пептонна вода з 7% та 10% NaCl має ідентичний склад, але вміст NaCl збільшується до та відповідно.

1% пептонна вода без NaCl повинна вміщувати тільки воду та пептон. При її виготовленні підлужування проводять дуже обережно, так як у випадку додавання надлишкової кількості їдкого натру нейтралізація його соляною кислотою приведе до утворення NaCl і середовище буде непридатним для визначення галофільності.

Пептонну воду без NaCl не готують з основного розчину пептону, так як в ньому вже є хлористий натрій.

Сухий лужний агар

Склад:

Пептон ферментативний

Екстракт дріжджів

Натрію хлорид

Натрію метабісульфіт

Натрію карбонат

Натрію фосфат двозаміщений

Агар

Дистильована вода

– 1000 см3

рН 7,8??0,2

Приготування: наважку сухого препарату ретельно розмішують при нагріванні в 1000 см3 дистильованої води, кип’ятять протягом 2 – 3 хвилин до повного розплавлення агару, відстоюють протягом 30 хвилин, при необхідності фільтрують через ватно-марлевий фільтр, розливають у стерильні флакони, стерилізують насиченою парою при (121??1) º С протягом 20 хвилин у паровому стерилізаторі.

Середовище Вагатцума

Склад:

Пептон

Дріжджовий екстракт сухий

Хлористий натрій

Двозаміщений фосфорнокислий калій

Агар-агар

Дистильована вода

– 1000 см3

Приготування: перераховані інгредієнти розчинюють при нагріванні, але не стерилізують. Потім додають маніту, 0,1 см3 0,1% спиртового розчину кристалвіолету та 5,0 см3 дефібринованої крові людини. Середовище розливають в чашки, після застигання підсушують і використовують за призначенням.

Середовище Нікодемуса

Склад:

Стерильній 2% поживний агар

– 1000 см3

Етанол

– 80 см3

Емульсія двох жовтків

Приготування: до розплавленого і охолодженого до 45-50 ºС агару додають етиловий спирт і ,після перемішування, емульсію яєчних жовтків. Ретельно перемішують і розливають у чашки Петрі, які можна зберігати у холодильнику не більше 3 діб.

Емульсію яєчних жовтків готують шляхом емульгування відділених від білка 2 жовтків в 10 см3 стерильного фізіологічного розчину.

Сольовий-поліміксиновий агар з 2,3,5-трифеніл-тетразолій хлоридом (ТТХ)

Склад:

Стерильний 2% поживний агар

– 1000 см3

Хлорид натрію (NaCl)

Поліміксин «М»

– 200000 – 400000 од

2,3,5-трифеніл-тетразолій хлорид

– 0,1 –

Емульсія двох жовтків

Приготування: в агар після розплавлення і охолодження до 45-50 ºС додають поліміксин, 2,3,5-ТТХ та емульсію жовтків, ретельно перемішують і розливають в чашки Петрі, які можна зберігати у холодильнику не більше 7 – 10 діб.

Кров’яний агар

Склад:

Стерильний 2% поживний агар

– 1000 см3

Кров дефібринована

– 5 см3

Приготування: до розплавленого і охолодженого поживного агару додають кров, ретельно перемішують і розливають у стерильні чашки Петрі.

Середовища для попередньої диференціації

Трицукровий агар з сечовиною (Олькеніцького)

Склад:

Дистильована вода

– 1000 cм3

Сухій поживний агар

Лактоза

Сахароза

Глюкоза

Сечовина

Амоній-залізо (ІІ) сульфат (FeSO4·(NH4)2 ??·6Н2О)

Натрій тіосульфат(Na2S2O3·5Н2О)

0,4% водній розчин фенол-рот

– 4 см3

Приготування: солі попередньо розчиняють в невеликій кількості дистильованої води. Вуглеводи і сечовину розчиняють так само, але підігріваючи на водяній бані. Сухий поживний агар розплавляють в решті води підігріваючи на вогні та помішуючи. Усі інгредієнти ретельно з’єднують, змішують з розплавленим агаром, фільтрують через марлевий фільтр, встановлюють рН 7,2–7,4. Додають індикатор, добре перемішують, розливають у пробірки по 6-7 см3. Стерилізують при (112??1) ºС 15 хв. Після стерилізації середовище скошують. При скошуванні залишають в нижній частині пробірки нескошений стовпчик висотою біля 2 – . Готове середовище має блідо-рожевий колір.

Агар Кліглера

Склад:

Бульйон м’ясний

– 1000 см3

Пептон

Лактоза

Глюкоза

Натрію хлорид (NaCl)

Натрію сульфіт (Na2SO3)

Натрію тіосульфат (Na2S2O3·??5Н2О)

Заліза (ІІ) сульфат (FeSO4·?? 7H2O)

Агар

Феноловий червоний (0,2% розчин в 50% етанолі)

– 12 см3

Приготування: до м’ясної води додають послідовно пептон, солі натрію, агар і кип’ятять до повного розплавлення агару; встановлюють рН 7,8, знову кип’ятять, фільтрують через вату і додають інші інгредієнти; сульфат заліза попередньо розчиняють у невеликої кількості води. Готове середовище розливають у пробірки по 6-7 см3 і стерилізують при (112??1) ºС 30 хв. Скошують залишаючи в ніжній частині пробірки стовпчики висотою 2-.

Середовища для подальшої ідентифікації

Середовище Сімонса

Склад:

Натрію цитрат (Na3C6Н5О7·5Н2О)

Натрію хлорид (NaCl)

Магнію сульфат (MgSO4·7Н2О)

Амонію дигідрофосфат ((NН4)2HPO4)

Калію гідрофосфат (КH2PO4)

Бромтимоловий синій

Агар-агар

Вода дистильована

– 1000 см3

Приготування: Попередньо добре відмитий агар розплавляють при підігріванні у свіжо виготовленій дистильованій воді. Всі солі спочатку розчиняють у невеликій кількості води, потім розчин додають до розплавленого агару і доводять до 1000 см3. Встановлюють рН 6,9, додають індикатор у вигляді 0,2% водного розчину в об’ємі 40 мл, добре перемішують, розливають у стерильні пробірки по 5-7 см3, стерилізують при (121??1) ºС 15 хв. або при (112??1) ºС 30 хв. Охолоджують у скошеному положенні.

Середовище Крістенсена

Склад:

Дистильована вода

– 1000 см3

Натрію цитрат (Na3C6Н5О7·5Н2О)

Глюкоза

Дріжджовий екстракт

– 22 см3

Цистеіна гідрохлорид

Калію дигідрофосфат (КH2PO4)

Натрію хлорид (NaCl)

Феноловий червоний 0,4% водний розчин

– 3 см3

Агар-агар

Приготування: Попередньо всі інгредієнти розчиняють в невеликий об’ємах води, далі все з’єднують, додаючи решту води, добре перемішують, приєднуючи агар. Суміш нагрівають до повного розчинення агару, фільтрують, встановлюють рН, який в готовому середовищі повинен бути 6,7 і додають індикатор. Розливають по 5 см3 в стерильні пробірки. Стерилізують при (112??1) ºС 15 хв. Охолоджують у напівскошеному положенні, залишаючи стовпчик висотою .

Дріжджовий екстракт для середовища Крістенсена

Склад:

Дріжджі пресовані хлібні (краще маточні)

Дистильована вода

– 1000 см3

Приготування: В 1 дм3 води розчиняють хлібних дріжджів, кип’ятять протягом 1 години, після чого фільтрують через паперовий фільтр. Стерилізують при (112??1) ºС 30 хв. Додають 22 см3 екстракту на 1 дм3 середовища Кристенсена.

Середовище Кларка для вирощування бактерій при постановці реакцій з метиловим червоним (MR) і Фогеса-Проскауера (VP)

Склад:

Пептон

Калію гідрофосфат (K2HPO4)

Глюкоза

Вода дистильована

– 1000 см3

Приготування: інгредієнти розчиняють у воді, кип’ятять 2 – 3 хв., фільтрують через паперовий фільтр, встановлюють рН 6,9 – 7,0, розливають у пробірки по 4-5 см3. Стерилізують при (112??1) ºС 20 хв.

Реактив для тесту MR

Склад:

Метиловий червоний

– 0,1

Спирт етиловий (96 º)

– 300 см3

Приготування: розчинити в етанолі фарбник і довести об’єм до 500 см3 дистильованою водою.

Реактив для тесту VP

  1. 5% розчин α-нафтола в 96 º етиловому спирті??
  2. 40% розчин калію гідроокису

Середовище з сечовиною (за Преусом)

Склад:

Бульйон Хотингера

– 1000 см3

Агар

Глюкоза

50% розчин сечовини

– 20 см3

0,2% розчин бромтимолового синього

– 12 см3

Приготування: агар розплавляють у бульйоні при підігріванні, фільтрують, встановлюють рН 6,9-7,0. Стерилізують при (121??1) ºС 20 хв. До стерильного поживного агару додають глюкозу, сечовину, індикатор. Середовище розливають в стерильні пробірки по 5 – 7 см3 і стерилізують текучою парою 15 хв., після чого скошують. Колір готового середовища оливковий.

Середовище з сечовиною (за Крістенсеном)

Склад:

Пептон

Натрію хлорид (NaCl)

Калію дигідрофосфат (КH2PO4)

Агар

Глюкоза

Феноловий червоний (0,2% розчин)

– 6 см3

Сечовина (20% водний розчин)

– 100 см3

Вода дистильована

– 1000 см3