Статус Проект Порядок розслідування, обліку і проведення лабораторних досліджень у випадках харчових отруєнь. Інструкція

Агар Кліглера

Склад:

Бульйон м’ясний

– 1000 см³

Пептон

– 20 г

Лактоза

– 10 г

Глюкоза

– 1 г

Натрію хлорид (NaCl)

– 5 г

Натрію сульфіт (Na₂SO₃)

– 0,4 г

Натрію тіосульфат (Na₂S₂O₃·5Н₂О)

– 0,08 г

Заліза (ІІ) сульфат (FeSO₄· 7H₂O)

– 0,5 г

Агар

– 20 г

Феноловий червоний (0,2% розчин в 50% етанолі)

– 12 см³

Приготування: до м’ясної води додають послідовно пептон, солі натрію, агар і кип’ятять до повного розплавлення агару; встановлюють рН 7,8, знову кип’ятять, фільтрують через вату і додають інші інгредієнти; сульфат заліза попередньо розчиняють у невеликої кількості води. Готове середовище розливають у пробірки по 6-7 см³ і стерилізують при (1121) ºС 30 хв. Скошують залишаючи в ніжній частині пробірки стовпчики висотою 2-2,5 см.

Середовища для подальшої ідентифікації

Середовище Сімонса

Склад:

Натрію цитрат (Na₃C₆Н₅О₇·5Н₂О)

– 3 г

Натрію хлорид (NaCl)

– 5 г

Магнію сульфат (MgSO₄·7Н₂О)

– 0,2 г

Амонію дигідрофосфат ((NН₄)₂HPO₄)

– 1,5 г

Калію гідрофосфат (КH₂PO₄)

– 1 г

Бромтимоловий синій

– 0,08 г

Агар-агар

– 20 г

Вода дистильована

– 1000 см³

Приготування: Попередньо добре відмитий агар розплавляють при підігріванні у свіжо виготовленій дистильованій воді. Всі солі спочатку розчиняють у невеликій кількості води, потім розчин додають до розплавленого агару і доводять до 1000 см³. Встановлюють рН 6,9, додають індикатор у вигляді 0,2% водного розчину в об’ємі 40 мл, добре перемішують, розливають у стерильні пробірки по 5-7 см³, стерилізують при (1211) ºС 15 хв. або при (1121) ºС 30 хв. Охолоджують у скошеному положенні.

Середовище Крістенсена

Склад:

Дистильована вода

– 1000 см³

Натрію цитрат (Na₃C₆Н₅О₇·5Н₂О)

– 3 г

Глюкоза

– 0,2 г

Дріжджовий екстракт

– 22 см³

Цистеіна гідрохлорид

– 0,1 г

Калію дигідрофосфат (КH₂PO₄)

– 1 г

Натрію хлорид (NaCl)

– 5 г

Феноловий червоний 0,4% водний розчин

– 3 см³

Агар-агар

– 15 г

Приготування: Попередньо всі інгредієнти розчиняють в невеликий об’ємах води, далі все з’єднують, додаючи решту води, добре перемішують, приєднуючи агар. Суміш нагрівають до повного розчинення агару, фільтрують, встановлюють рН, який в готовому середовищі повинен бути 6,7 і додають індикатор. Розливають по 5 см³ в стерильні пробірки. Стерилізують при (1121) ºС 15 хв. Охолоджують у напівскошеному положенні, залишаючи стовпчик висотою 2 см.

Дріжджовий екстракт для середовища Крістенсена

Склад:

Дріжджі пресовані хлібні (краще маточні)

– 500 г

Дистильована вода

– 1000 см³

Приготування: В 1 дм³ води розчиняють 500 г хлібних дріжджів, кип’ятять протягом 1 години, після чого фільтрують через паперовий фільтр. Стерилізують при (1121) ºС 30 хв. Додають 22 см³ екстракту на 1 дм³ середовища Кристенсена.

Середовище Кларка для вирощування бактерій при постановці реакцій з метиловим червоним (MR) і Фогеса-Проскауера (VP)

Склад:

Пептон

– 7 г

Калію гідрофосфат (K₂HPO₄)

– 5 г

Глюкоза

– 5 г

Вода дистильована

– 1000 см³

Приготування: інгредієнти розчиняють у воді, кип’ятять 2 – 3 хв., фільтрують через паперовий фільтр, встановлюють рН 6,9 – 7,0, розливають у пробірки по 4-5 см³. Стерилізують при (1121) ºС 20 хв.

Реактив для тесту MR

Склад:

Метиловий червоний

– 0,1

Спирт етиловий (96 º)

– 300 см³

Приготування: розчинити в етанолі фарбник і довести об’єм до 500 см³ дистильованою водою.

Реактив для тесту VP

5% розчин α-нафтола в 96 º етиловому спирті^

40% розчин калію гідроокису

Середовище з сечовиною (за Преусом)

Склад:

Бульйон Хотингера

– 1000 см³

Агар

– 15 г

Глюкоза

– 5 г

50% розчин сечовини

– 20 см³

0,2% розчин бромтимолового синього

– 12 см³

Приготування: агар розплавляють у бульйоні при підігріванні, фільтрують, встановлюють рН 6,9-7,0. Стерилізують при (1211) ºС 20 хв. До стерильного поживного агару додають глюкозу, сечовину, індикатор. Середовище розливають в стерильні пробірки по 5 – 7 см3 і стерилізують текучою парою 15 хв., після чого скошують. Колір готового середовища оливковий.

Середовище з сечовиною (за Крістенсеном)

Склад:

Пептон

– 1 г

Натрію хлорид (NaCl)

– 5 г

Калію дигідрофосфат (КH₂PO₄)

– 2 г

Агар

– 20 г

Глюкоза

– 1 г

Феноловий червоний (0,2% розчин)

– 6 см³

Сечовина (20% водний розчин)

– 100 см³

Вода дистильована

– 1000 см³

Приготування: пептон, солі та агар розчиняють при нагріванні, встановлюють рН, фільтрують, стерилізують при (1121) ºС 20 хв., додають глюкозу та індикатор, стерилізують текучою парою 1 год., охолоджують до (50-55) ^ºС. Розчин сечовини після стерилізуючої фільтрації асептично додають до основи. Готове середовище асептично розливають в стерильні пробірки і охолоджують у скошеному стані.

Рідке середовище з сечовиною

Склад:

Пептон

– 1 г

Натрію хлорид (NaCl)

– 5 г

Калію дигідрофосфат (КH₂PO₄)

– 2 г

Глюкоза

– 1 г

Феноловий червоний (0,2% розчин)

– 6 см³

Сечовина (50% водний розчин)

– 40 см³

Вода дистильована

– 1000 см³

Приготування: до води додають пептон, солі і кип’ятять 2-3 хв., вносять глюкозу. Встановлюють рН 6,8-6,9 (особливо точно), додають індикатор, фільтрують через паперовий фільтр, розливають у флакони по 150 – 200 см³ і стерилізують при (1121) ºС 30 хв. Асептично додають сечовину (50% водний розчин, витриманий 2 – 3 доби для “самостерилізації”) із розрахунку кінцевого вмісту сечовини в середовищі 2%. Розливають у стерильні пробірки асептично.

Середовище з фенілаланіном

Склад:

Дріжджовий екстракт рідкий

– 100 см³

Сухий

– 3 г

DL(L)-фенілаланін

– 2 г(1 г)

Натрію гідрофосфат (Na₂HPO₄)

– 1 г

Натрію хлорид (NaCl)

– 5 г

Агар-агар

– 12 г

Вода дистильована

– 1000 см³

Приготування: дріжджовий екстракт внести у холодну воду, нагріти. Послідовно розчинити решту інгредієнтів, кип’ятити до повного розчинення агару, розлити по 2-3 см³ у пробірки, стерилізувати при (1121) ºС 10 хв. і зразу після стерилізації скошують.

Тест-реактив – 10% водний розчин хлорного заліза (FeCl₃). Зберігають при (62) ºС, без доступу світла.

Середовища для визначення індолоутворення

Пептонна вода 2%^

Склад:

Триптон (або бактопептон

Натрію хлорид (NaCl)

Вода дистильована

– 20,0 г

– 5,0 г

– 1000 см³