---

равного 100ТР, в данную ампулу необходимо добавить 1,0 мл бульона.

Полученное разведение фага 1:10 будет соответствовать 100ТР. Если

на этикетке ампулы указанное тест-разведение фага соответствует

0,001 (1:1000), то для получения разведения фага, равного 100ТР, в

данную ампулу необходимо добавить 1,0 мл бульона, и полученное

разведение фага 1:10 развести еще в 10 раз. С этой целью к 0,1 мл

разведения 1:10 добавляют 0,9 мл бульона. Полученное разведение

соответствует 100ТР.

Фаготипирование рекомендуется начинать дозой фага 100ТР. Фаги

в разведении 100ТР могут храниться в холодильнике при +4 град. C в

течение 1,5 - 2 месяцев. Для предохранения высыхания пробирку с

фагом следует закрывать стерильной резиновой пробной.

При приготовлении разведения фага для ампулы берут отдельную

пипетку. После добавления бульона фаг быстро растворяется в ампуле

и его переносят этой же пипеткой в стерильную пробирку. На

последней подписывают столбиком порядковый номер фага, его

название (тип), конечное разведение и тест-разведение:

Например: 1 или 19

29 83А

10-3 10-4

100ТР 100ТР

Для фаготипирования можно использовать не только 3 - 4

часовую, но и 18 - 20 часовую бульонную культуру.

3. Для приготовления среды использовать как 1,2 % агар,

приготовленный на бульоне Хоттингера, так и сухой питательный агар

или агар Д (pH 7,6) с добавлением 0,4 % глюкозы. Непосредственно

перед разливом чашек в агар добавляют 0,2 мл стерильного

продажного 10 % раствора хлористого кальция на 100 мл среды. Чашки

подсушивают в термостате.

4. На подсушенные среды наносят бульонную культуру и засевают

ее газоном, избыток культуры отсасывают пипеткой. Чашки с посевом

вновь подсушивают. Поскольку на среду наносится массивный газон

культуры, воздушное загрязнение среды не может при этом играть

существенной роли. Для удобства работы можно закрывать чашки

картонными крышками.

5. Дно подсушенных чашек со средой расчерчивают на 22

квадрата или на поверхности агара агглютинационной пробиркой

делают 22 кружканасечки. В каждый квадрат или кружок оттянутой до

капилляра пастеровской пипеткой наносят каплю соответствующего

фага всегда в одном и том же порядке. Наносить фаг следует таким

образом, чтобы не коснуться пипеткой поверхности среды и избежать

тем самым переноса культуры на другую чашку со средой или пробирку

с типовым фагом. Набирать в пипетку фаг следует над пламенем

горелки.

Если количество исследуемых культур невелико, фаг можно

наносить не пипеткой, а петлей, каждый раз прожигая ее.

Более удобно наносить фаг репликатором. В этом случае на

хорошо подсушенную чашку наносят сначала фаг, вновь подсушивают,

после чего наносят газоном исследуемую бульонную культуру. Избыток

культуры удаляют пипеткой, чашки подсушивают, закрывают крышкой,

переворачивают и помещают в термостат. Инкубируют при 37 град. C в

течение 18 - 20 часов, либо 5 - 6 часов при 37 град. C и до

следующего утра при комнатной температуре.

6. При учете результатов фаготипирования отмечают наличие

лизиса тем, или иным фагом на ++++, +++ и ++ креста. При учете

отмечают ++++ - сливной (полный) лизис.

+++ - полусливной лизис (незначительный рост культуры в зоне

лизиса);

++ - наличие в месте нанесения капли фага свыше 50 колоний

фага;

+ - почти полное отсутствие лизиса;

- - полное отсутствие лизиса.

Некоторые фаги вызывают как бы утончение роста культуры в

месте нанесения фага, т. е. феномен ингибиции (подавление),

обозначаемое "О". Ингибиция относится к слабой реакции, но ее

наличие должно обязательно отмечаться в рабочем журнале.

Штамм считается типируемым, если хотя бы один фаг вызвал

сильную реакцию на ++++, +++ или ++ креста. Стафилококковые штаммы

чаще лизируются не одним, а несколькими фагами, что дает для

каждого штамма характерную фагомозаику. Результаты фаготипирования

регистрируются в журнале, с указанием дозы фага, вызвавшей лизис и

степени лизиса.

Например: 100ТР - 3С++++/55+++/71++++.

В ответе степень лизиса не обозначается, указывается только

фагомозаика данного штамма - 3С/55/71.

При определении идентичности штаммов следует ориентироваться

на следующее: если культуры стафилококков, типированные в один и

тот же день, дают фагомозаику, не различающуюся или различающуюся

на одну сильную реакцию, то их следует считать идентичными. Если

культуры стафилококка, типированные в один и тот же день,

обнаруживают разницу на 2 и более сильные реакции, штаммы следует

признать разными. Однако этот результат является ориентировочным и

в каждом отдельном случае при решении вопроса об идентичности

выделенных культур следует уточнить место их выделения,

характеристику патогенных свойств, отношение к антибиотикам,

эпидемическую ситуацию. Следует отметить, что внутри одной группы

идентичные штаммы могут иметь различие более чем в одну сильную

реакцию.

В настоящее время примерно 30 - 40 % выделенных культур

золотистого стафилококка не чувствительны к используемым типовым

фагам (так называемые нетипируемые штаммы золотистого

стафилококка). Идентичность таких штаммов может быть установлена

весьма ориентировочно на основании антибиограммы.

VIII. Определение фосфатазной активности

В 100 мл растительного и остуженного до 40 питательного агара

добавляют 50 мг паранитрофенилфосфата. Смесь разливается стерильно

в чашки (по 10 - 12 мл на чашку). Чашки с застывшим агаром

подсушивают и на каждую из них точечным посевом наносятся

исследуемые культуры (16 - 20 культур). Чашки помещают в термостат

на 24 часа при 37 град. C. Появление интенсивного желтого

окрашивания вокруг посевов регистрируется как положительная

реакция.

Обязательным является постановка контролей со штаммами

стафилококка, заведомо обладающими и не обладающими фосфатазной

активностью.

Реакция фогес-Проскауэра (в модификации Баррита).

Исследуемую культуру засевают в глюкозофосфатный бульон

Кларка. После 3 дней роста при 37 град. C 1,0 мл культуры

переносят в пробирку и прибавляют 0,6 мл альфа-нафтола (5 %

раствор в абсолютном спирте) и 0,2 мл КОН (40 % раствор) и

взбалтывают. В положительном случае через 2 - 5 минут наступает

розовое окрашивание. У штаммов, дающих сильную реакцию, окраска

становится интенсивной и через 30 минут - 1 час переходит в

малиновую. В отрицательных случаях розового окрашивания не

наступает и раствор принимает цвет меди (КОН + альфа-нафтол).

Приложение N 4

к приказу Минздрава СССР

от 31 июля 1978 г. N 720

Инструкция

по очистке (мойке) и обеззараживанию аппаратов

ингаляционного наркоза и искусственной

вентиляции легких

1. Общие положения

1.1. Инструкция предназначена для специалистов

лечебно-профилактических учреждений, эксплуатирующих аппараты

ингаляционного наркоза (ИН) и искусственной вентиляции легких

(ИВЛ).

1.2. Аппараты ИН и ИВЛ в процессе их использования

обсеменяются различной микрофлорой, включая микобактерии

туберкулеза, и без соответствующей обработки могут быть одним из

факторов передачи заболеваний респираторного тракта (бронхит,

пневмония, абсцессы и т. п.).

1.3. Аппараты ИН и ИВЛ как новые, так и после каждого

использования, подвергают обработке (мойке и обеззараживанию) в

соответствии с настоящей Инструкцией.

1.4. В зависимости от конструктивных особенностей аппараты ИН

и ИВЛ обрабатывают двумя способами:

а) поблочно;

б) в собранном виде.

2. Очистка аппаратов ИН и ИВЛ

2.1. Обязательным условием надежности обеззараживания

аппаратов ИН и ИВЛ является мойка отдельных элементов и блоков

дыхательного контура и комплектующих аппарат деталей.

2.2. Очистке подвергают как новые аппараты с целью

освобождения от пыли, связывающих, опудривающих веществ, так и

аппараты после их использования с целью деконтаминации и удаления

пирогенных веществ, кусочков тканей и других органических

остатков.

2.3. Для мойки элементов и комплектующих деталей применяют

комплекс, состоящий из 3 % раствора перекиси водорода с 0,5 %

моющим средством ("Прогресс", "Новость", "Триас-А", "Астра",

"Лотос"), величина pH рекомендуемого комплекса - 6,0 - 8,0.

Использование 3 % раствора перекиси водорода с 0,5 % моющего

средства позволяет разъединить мойку и дезинфекцию в один процесс.

2.3.1. Перекись водорода является хорошим окислителем.

Выпускается промышленностью в виде водного раствора 30 - 33 %

концентрации под названием "пергидроль". Пергидроль - жидкость без

запаха и цвета.

В рекомендуемых концентрациях (3 % - 6 %) растворы перекиси

водорода не токсичны для людей, незначительно меняют свойства

материалов медицинского назначения.

2.3.2. Синтетические моющие средства "Новость", "Триас-А",

"Астра", "Лотос" (первичные алкилсульфаты), "Прогресс" (вторичные

алкилсульфаты) обладают высокой моющей активностью, хорошо

разрыхляют различного рода загрязнения, практически не влияют на

качество материала и достаточно легко смываются. При температуре

50 град. C активность моющих растворов возрастает. Оптимальной

концентрацией моющих средств для очистки изделий является 0,5 %.

2.3.3. Приготовление комплекса перекиси водорода с моющим

средством проводят в соответствии с расчетом, приведенным в

табл. 1.

2.4. Процесс мойки включает ряд последовательных этапов:

2.4.1. Подготовка - разборка узлов, снятие шлангов,

присоединительных элементов, крышек клапанных коробок,

отсоединение и опорожнение сборников конденсат и т. п.

2.4.2. Предварительную промывку осуществляют под струей

холодной, затем теплой воды в возможно более короткие сроки после

использования аппарата. Особенно это относится к присоединительным

элементам и инкубационным трубкам во избежание высыхания на них

выделений, эксудата, крови и т. д.

2.4.3. Замачивание (дезинфекции) полное погружение с

обязательным заполнением полостей обрабатываемых деталей в горячий

(50 град. C) моющий раствор на 15 - 20 минут.

2.4.4. Собственно мойку осуществляют в том же растворе, в

котором замачивали элементы и детали аппаратов. Детали моют

ватно-марлевыми тампонами, затрачивая, в среднем, 25 - 30 секунд

на каждый предмет. Не следует для очистки и мытья использовать

острые предметы, а также щетки или ерши, т. к. имеется опасность

оставления в патрубках щетинок от щеток (ершей) и последующая их

аспирация в дыхательные пути. Марлевые тампоны используют для

мытья однократно. Моющий раствор используют повторно, если он не

изменил своего цвета.

2.4.5. Прополаскивание - вымытые детали прополаскивают в

проточной воде в течение 5 минут. При использовании моющих средств

"Астра" или "Лотос" детали прополаскивают 10 минут под контролем

фенолфталеиновой пробы. После прополаскивания детали ополаскивают

дистиллированной водой.

2.4.6. Сушка. После мытья и прополаскивания элементы и детали

просушивают стерильной простыней и затем подвергают

обеззараживанию.

2.4.7. Контроль эффективности очистки проводят в соответствии

с п. 8 приложения N 1 к настоящему приказу.

Таблица 1

Приготовление моющего раствора - комплекса

перекиси водорода с моющим средством

------------------------------------------------------------------------

|Состав рабочего раствора | Количество компонентов в 1 л раствора |

| |----------------------------------------|

| |пергидроля в зависимости|воды,|моющего |

| | от содержания в нем |в мл |средства,|

| | перекиси водорода | |в г |

|-----------------------------+------------------------+-----+---------|

|концентрация |концентрация |содержание |количество | | |

|перекиси |одного из |перекиси |пергидроля | | |

|водорода, в %|моющих средств |водорода в |на 1 л | | |

| |"Новость", |пергидроле, |раствора, | | |

| |"Триас-А", |в % |в мл | | |

| |"Лотос", | | | | |

| |"Астра", | | | | |

| |"Прогресс", в %| | | | |

|-------------+---------------+------------+-----------+-----+---------|

| 3 | 0,5 | 30,0 | 100 | 895 | 5 |

|-------------+---------------+------------+-----------+-----+---------|

| | | 31,0 | 95 | 900 | 5 |

|-------------+---------------+------------+-----------+-----+---------|

| | | 32,0 | 95 | 900 | 5 |

|-------------+---------------+------------+-----------+-----+---------|

| | | 33,0 | 90 | 905 | 5 |

------------------------------------------------------------------------

______________________

Примечание: При приготовлении раствора пергидроль приливают к

раствору моющего средства, температура моющего раствора 50 град.

C.

3. Обеззараживание комплектующих деталей и отдельных

узлов и блоков аппаратов ИН и ИВЛ

3.1. Комплектующие детали: эндотрахеальные трубки,

трахеотомические канюли, ротоглоточные воздуховоды, лицевые маски,

мундштуки-загубники, изготовленные из резины и пластмасс,

обеззараживают погружением в один из дезинфицирующих растворов:

- 3 % раствор перекиси водорода, экспозиция 60 минут;

- 3 % раствор формальдегида, экспозиция 30 минут;

- 1 % раствор хлорамина, экспозиция 30 минут;

- 0,1 % раствор дезоксона, экспозиция 20 минут.

Если трахеотомические канюли и ротоглоточные воздуховоды

изготовлены из металла, то их обеззараживают кипячением в

дистиллированной воде в течение 30 минут.

Изделия после обеззараживания отмывают последовательно в двух

порциях стерильной воды, затем сушат и хранят в асептических