---

физиологическим раствором или стерильной водопроводной водой.

4.2.8. Перед посевом исследуемый материал вносят в

предбоксник, предварительно снимая наружную мягкую упаковку. В

предбокснике пакеты, биксы протирают снаружи с помощью стерильного

пинцета (корнцанга) стерильной салфеткой (ватным тампоном),

обильно смоченной 6 % раствором перекиси водорода, перекладывают

на стерильный лоток и оставляют на 30 минут. При поступлении

изделий в мягкой упаковке первый слой снимают в предбокснике и

изделия во внутренней упаковке сразу переносят в бокс.

4.2.9. Посевы на стерильность проводят бактериолог с помощью

лаборанта.

5. Посевы на стерильность хирургического инструмента

5.1. Хирургический инструментарий с помощью стерильного

пинцета извлекают из бикса или мягкой упаковки и целиком погружают

в пробирки с питательными средами. Как исключение, в отдельных

случаях, если все простерилизованные инструменты в одной упаковке

крупных размеров (иглодержатели, ранорасширители и т. д.),

производят смыв с поверхности инструмента стерильной салфеткой,

смоченной в стерильном физиологическом растворе или стерильной

водопроводной воде и погружают салфетку в пробирку с тиогликолевой

средой. Аналогичные смывы с других инструментов засевают в

пробирки со средой Хоттингера и Сабуро.

5.2. Методика посева на стерильность игл и шприцев.

Для контроля на стерильность отбирают шприцы малой емкости

(1,0 или 2,0 мл) в условиях бактериологического бокса, с

соблюдением правил асептики погружают в пробирки с питательными

средами - отдельно цилиндр, поршень, иглы.

При необходимости контроля шприцев большой емкости (10, 20 мл

и более) исследование стерильности производят методом смыва, при

этом стерильной салфеткой, смоченной в стерильном физиологическом

растворе или водопроводной воде, протирают с помощью пинцета

внутренние части шприца и погружают салфетку в питательные среды.

5.3. Исследование на стерильность систем переливания крови

многоразового использования.

От резинового шланга, ближе к игле, отрезают ножницами с

помощью пинцета небольшие кусочки (1 - 2 см) и погружают в

пробирки с питательными средами, иглу отдельно погружают в

питательные среды.

5.4. Посев на стерильность катетеров, резиновых перчаток и

др. изделий из резины и пластикатов.

Контроль стерильности зондов, катетеров, резиновых перчаток и

других изделий из резины производят путем полного погружения

мелких изделий в питательные среды, от более крупных с помощью

стерильного пинцета стерильными ножницами отрезают небольшие

кусочки (1 - 2 см) и погружают в питательные среды.

5.5. Посев на стерильность хирургического шовного материала.

Перед посевом емкость с отобранными образцами шовного

материала в предбокснике протирают стерильной марлевой салфеткой,

обильно смоченной 6 % раствором перекиси водорода, и оставляют на

30 минут. Затем вносят в бокс.

5.5.1. Кетгут. Подготовленный к работе кетгут в операционном

блоке хранят в спиртовом растворе йода. Кетгут перед посевом

подвергают специальной обработке для нейтрализации и отмывания

нейтрализующего раствора. Моток кетгута, приготовленный для

исследования, перекладывают стерильным карнцангом или пинцетом в

стерильный 10 % раствор гипосульфита натрия. Раствор гипосульфита

натрия готовят на дистиллированной воде, разливают в пробирки

(колбы) по 20 - 30 мл, стерилизуют текучим паром по 30 минут в

продолжении 3 дней. Кетгут выдерживают в растворе гипосульфита в

течение 24 часов при комнатной температуре (возможно помутнение

раствора за счет выпадения серы), затем перекладывают в пробирки с

20 - 30 мл стерильной дистиллированной воды, где также выдерживают

в течение 24 часов в при комнатной температуре. Непосредственно

перед посевом моток кетгута извлекают стерильным пинцетом и

перекладывают в стерильную чашку Петри, с помощью пинцета и ножниц

его разрезают на мелкие кусочки длиной 1 - 2 см и раздергивают для

прорастания микроорганизмов кетгута.

Посев производят в 2 пробирки с тиогликолевой средой, 2

пробирки со средой Сабуро и 2 пробирки со средой Хоттингера,

помещая в каждую пробирку по 4 - 5 кусочков исследуемого

материала.

5.5.2. Шелк. Подготовленный к работе шелк в операционных

хранят в спиртовом растворе, поэтому перед посевом шелк (лавсан)

помещают на 24 часа в стерильную дистиллированную воду при

комнатной температуре. Перед посевом моток шелка (лавсана)

перекладывают в стерильные чашки Петри, разрезают на мелкие

кусочки длинной 1 - 2 см. Посев шелка производят так же, как и

кетгута.

5.6. Исследование на стерильность аппаратов

экстракорпорального кровообращения.

Исследование на стерильность аппарата искусственного

кровообращения проводит бактериолог и лаборант

лечебно-профилактического учреждения в операционной после

асептической уборки аппарата.

Контролю подлежат:

- смыв из аппарата;

- перфузат до перфузии;

- кровь после перфузии.

Стерильный физиологический раствор в количестве не менее 250

мл прогоняют через аппарат, подготовленный к операции, отбирают

100 мл раствора и засевают на питательные среды. Аналогично

производят посев перфузата до перфузии и крови после перфузии.

5.7. Посев на стерильность перевязочного материала.

Бинты, ватные шарики, марлевые салфетки, турунды и т. п.

отбирают из разных мест бикса стерильным пинцетом. Мелкие изделия

целиком погружают в пробирки с питательными средами. От бинтов

(внутренних частей) и крупных марлевых салфеток с помощью

стерильных ножниц отрезают кусочки и погружают в пробирки

питательными средами. На каждый вид перевязочного материала

используют по 2 пробирки каждой среды.

5.8. Посев на стерильность хирургического белья.

Простерилизованными и фламбированными ножницами (смоченными в

спирте и проведенными через пламя горелки) с помощью пинцета от

хирургического белья отрезают небольшие кусочки ткани (завязка,

внутренние швы и т. п.) и погружают в пробирки (колбы) с

питательными средами, по-возможности, не касаясь стенок пробирки

(колбы).

6. Учет результатов

Материал стерилен при отсутствии роста во всех посевах.

Материал не стерилен при росте микрофлоры.

7. Бактериологический контроль эффективности обработки

кожи операционного поля и рук хирургов

Смывы с кожи операционного поля и рук хирургов производят

стерильными марлевыми салфетками размером 5 х 5 см, смоченными в 2

% растворе нейтрализатора (если таковой имеется) или в

физиологическом растворе. Марлевой салфеткой тщательно протирают

ладони, околоногтевые и межпальцевые пространства обеих рук. После

забора проб марлевую салфетку помещают в широкогорлые пробирки или

колбы с раствором нейтрализатора (воды или физиологического

раствора) и стеклянными бусами, встряхивают в течение 10 минут,

производят отмыв марлевой салфетки. Отмывную жидкость засевают

глубинным способом по 0,5 мл на 2 чашки Петри с мясо-пептонным

агаром, а марлевую салфетку - в 0,5 % сахарного бульона. Посевы

инкубируют при температуре 37 град. C в течение 48 часов.

8. Учет результатов

Кожа и руки стерильны при отсутствии роста микроорганизмов

как на твердой, так и на жидкой питательной среде.

Приложение 1

Способ приготовления питательных сред,

используемых для контроля эффективности стерилизации

1. Тиогликолевая среда

1.1. Состав.

Гидролизат казеина (в пересчете на сухой остаток) - 15 г;

дрожжевой экстракт (10 % в пересчете на сухой остаток) - 5 г;

натрий хлорид - 2,5 г;

глюкоза - 5 г;

цистин - 0,75 г;

тиогликолевая кислота - 0,3 мл;

раствор резазурина 1:1000 свежеприготовленный - 1 мл;

агар-агар дальневосточный - 0,75 г;

вода дистиллированная до 1000 мл;

pH среды после стерилизации 7,0 - 7,2.

1.2. Приготовление.

Смешивают все компоненты среды, кроме глюкозы и тиогликолевой

кислоты.

Цистин предварительно растворяют в небольшом количестве

дистиллированной воды при постепенном добавлении 10 - 20 %

раствора едкого натра до его полного растворения. Смесь

подщелачивают 10 % раствором едкого натра до pH 8,0 - 8,2, кипятят

в котле с паровой рубашкой или на открытом огне при постоянном

перемешивании до расплавления агар-агара 5 - 10 минут. Можно

автоклавировать 20 минут при 100 град. C, затем прибавляют горячую

воду до первоначального объема, прибавляют глюкозу и тиогликолевую

кислоту, фильтруют через полотно, устанавливают pH 7,2 - 7,3.

Добавляют раствор резазурина, смешивают и разливают в стерильные

пробирки по 20 мл. Стерилизуют 20 минут при 120 град. C.

Тиогликолевую среду можно хранить до посева, предохраняя ее

от света, при комнатной температуре в течение не более 7 суток со

дня приготовления.

___________________

Примечание:

1. Допускается приготовление среды без раствора резазурина

натрия.

2. Допускается применение других сортов агара, но с заранее

вытитрованным количеством.

2. Питательный агар с 0,5 % глюкозы

2.1. Состав.

Панкреатического гидролизата казеина (в пересчете на сухой

остаток) - 15 г;

дрожжевого экстракта (10 %) (в пересчете на сухой остаток) -

5 г;

глюкозы - 5 г;

натрия хлористого (с учетом содержания в гидролизате) - 5 г;

агар-агара (в зависимости от плотности агара) - 10 - 20 г;

воды дистиллированной - до 1000 мл;

pH среды после стерилизации 7,2 - 7,4.

2.2. Приготовление.

Смешивают все компоненты среды, кроме глюкозы, подщелачивают

10 - 20 % раствором aOH до pH 8,0 - 8,2 и оставляют на 20 - 30

минут для набухания агар-агара. Затем его расплавляют в автоклаве

текучим паром или в открытом котле с подогреванием в течение 30

минут, отстаивают 20 - 30 минут, отфильтровывают через ватный

фильтр. На полученный после фильтрации объем среды добавляют

глюкозу, устанавливают pH 7,3 - 7,5, разливают в стерильные

пробирки по 5 мл. Стерилизуют при 110 - 112 град. C (0,5 ати) - 30

минут.

Химические показания:

аминный азот 30 - 110;

хлориды 0,5 - 0,6 %.

Агар годен для применения в течение 3 месяцев при хранении в

холодильнике (4 - 10 град. C) или 1 месяц при комнатной

температуре.

3. Бульон Хоттингера с 0,5 % (1,0 %) глюкозы

3.1. Состав

Мясной перевар по Хоттингеру до разведения аминного азота на

140 - 160 мг %;

натрий хлористый - 0,5 %;

глюкоза - 0,5 % (1,0 %);

вода дистиллированная - до 1000 мл;

pH среды 7,2 - 7,4.

3.2. Приготовление.

Смешивают мясной перевар по Хоттингеру с водой в таком

соотношении, чтобы в среде содержалось 140 - 160 мг % аминного

азота, добавляют хлористый натрий. Смесь подщелачивают 10 % aOH до

pH 8,0 - 8,2, кипятят на открытом огне 10 минут или автоклавируют

при 100 град. C 10 минут. Если есть выкипание, доводят объем до

первоначального кипяченой или дистиллированной водой. Фильтруют

через ватный тампон, прибавляют 0,5 % (1,0 %) глюкозы,

устанавливают pH 7,3 - 7,5 добавлением 5 % HCl. Снова фильтруют

через бумажный фильтр или полотно "Бельтинт". Разливают в

стерильную посуду.

Стерилизуют при 110 град. C 30 минут.

4. Среда Сабуро

4.1. Состав.

Сухой пептон ферментативный 10 г;

глюкоза или мальтоза 100 г;

вода дистиллированная до 1000 г;

pH среды после стерилизации 5,5 - 5,8.

4.2. Приготовление.

В воду добавляют пептон и кипятят 10 минут. Фильтруют через

полотно "Бельтент". К полученному объему после фильтрами

прибавляют глюкозу или мальтозу. Если pH выше чем 5,7, то следует

подкислить 5 % раствором HC до pH 5,7.

Разливают в стерильные пробирки по 10 мл.

Стерилизуют при 110 (0,5 кгс/кв.см - 30 минут).

5. Контроль стерильности питательных сред

Для контроля стерильности питательные среды после

изготовления и стерилизации помещают в термостат при температуре

37 град. C на двое суток.

Сахарный бульон Хоттингера и среду Сабуро контролируют

полностью (всю приготовленную серию пробирок или колб).

Тиогликолевая среда, выдержанная при повышенной температуре,

до использования не допускается, поэтому от каждой серии отбирают

1 % от общего числа пробирок или колб и выдерживают их в

термостате при температуре 37 град. C в течение 2-х суток. Для

контроля стерильности эту часть сред не используют.

6. Подготовка посуды

Новую посуду для мытья кипятят в слабом растворе (1 - 2 %)

соляной кислоты во избежания дальнейшего выщелачивания стекла.

Мытье производят ершами с мылом и содой, затем тщательно

промывают проточной и ополаскивают дистиллированной водой, что

предупреждает выпадение содовых остатков при высушивании.

Приготовленную и высушенную посуду завертывают в бумагу и

стерилизуют.

Приложение N 3

к приказу Минздрава СССР

от 31 июля 1978 г. N 720

Инструкция

по бактериологическому обследованию

на выявление носителей патогенного

стафилококка и проведению санации

1. Общие положения

1.1. Инструкция предназначена:

Для руководителей:

- лечебно-профилактических учреждений, в составе которых