---

температуре.

3. Второй - третий день.

Просмотр чашек, фиксация в журнале характера и массивности

роста. На выше указанных средах стафилококк растет в виде круглых,

блестящих, маслянистых, выпуклых, пигментированных колоний. На

средах, содержащих желток, зол. стафилококк, выделенный от

человека, в 60 - 70 % случаев образует радужный венчик вокруг

колонии (положительная лецитовителлазная реакция). Стафилококки

животного происхождения дают положительную лецитовителлазную

реакцию в 5 - 10 % случаев.

Отвивка на скошенный агар для дальнейшего исследования не

менее 2-х колоний, подозрительных на стафилококк. Для исследования

отвивают прежде всего колонии, дающие положительную

лецитовителлазную реакцию. При отсутствии на чашках таких колоний

дальнейшему исследованию подвергаются пигментированные колонии,

схожие по морфологии со стафилококком. При одновременном наличии

на чашках колоний стафилококка, отличающихся по пигменту, следует

отвивать не менее двух колоний различного вида. Пробирки с посевом

помещают в термостат при 37 град. C на 18 - 20 часов.

4. Четвертый день.

После суточной инкубации у выделенных штаммов проверяют

морфологию, тинкториальные свойства (окраска по Граму) и наличие

плазмокоагулирующей активности. Следует отметить, что характер

роста культуры на скошенном агаре в ряде случаев дает возможность

"предвидеть" принадлежность ее к виду золотистого стафилококка или

эпидермального стафилококка. Первые, как правило, дают обильный

равномерный сочный рост, вторые - очень скудный и неравномерный

рост по ходу посева.

Окраску по Граму проводят общепринятым методом. Под

микроскопом окрашенные по Граму стафилококки имеют вид

фиолетово-синих кокков, располагающихся гроздьями или небольшими

кучками ("кружево").

Плазмокоагулирующую активность проверяемой в реакции

коагуляции плазмы (РКП).

С учетом результатов РКП и лецитовителлазной активности в 70

- 75 % случаев, на четвертый день исследования может быть

подтверждена принадлежность выделенного штамма к виду зол.

стафилококка и выдан соответствующий ответ. На схеме представлены

возможные варианты сочетаний результатов определения

плазмокоагулирующей и лецитовителлазной активности.

Если культура обладает только плазмокоагулирующей и только

лецитивителлазной активностью, то для окончательного ответа

требуется определение других признаков патогенности (ферментации

маннита в аэробных условиях - АФМ или ДНКазной активности).

В этих случаях ответ выдают в зависимости от результатов,

полученных при определении названных признаков.

В случае необходимости на 4-й день исследования может быть

поставлена реакция определения ДНКазной активности или анаэробной

ферментации маннита.

Определение антибиограммы проводят только после выделения

чистой культуры по показаниям (выбор способа лечения и т. д.).

Выделенные культуры золотистого стафилококка подлежат

типированию.

5. Пятый день.

Учет результатов фаготипирования, определения

чувствительности к антибиотикам, ДНКазной активности.

Окончательная выдача ответа.

Критерии оценки микробной обсемененности воздуха в

хирургических клиниках

--------------------------------------------------------------

|Место забора |Условия работы |Общее кол-во |Количество |

| | |колоний в 1 куб.|патогенного |

| | |м воздуха |стафилококка |

| | | |в 250 литрах |

|-------------+---------------+----------------+-------------|

|Операционные |До начала |не выше 500 |не должно |

| |работы | |быть |

|-------------+---------------+----------------+-------------|

| |Во время |не выше |не должно |

| |работы |1000 |быть |

--------------------------------------------------------------

2.2. Исследования микробной обсемененности объектов внешней

среды.

2.2.1. Бактериологическое исследование микробной

обсемененности предметов внешней среды предусматривает выявление

синегнойной палочки, бактерий группы кишечных палочек и аэроманад

(строго по показаниям). Забор проб с поверхностей различных

объектов осуществляют методом смывов.

2.2.2. Взятие смывов производят стерильным ватным тампоном на

палочках, вмонтированных в пробирки, или марлевыми салфетками

размером 5 х 5 см, простерилизованными в бумажных пакетах или в

чашках Петри. Для увлажнения тампонов в пробирки с тампонами

наливают по 2,0 мл стерильного физиологического раствора. При

использовании салфеток стерильный физиологический раствор

разливают в стерильные пробирки по 20 мл. Салфетку захватывают

стерильным пинцетом, увлажняют физиологическим раствором из

пробирки, после протирания исследуемого объекта помещают в ту же

пробирку.

2.2.3. При контроле мелких предметов смывы забирают с

поверхности всего предмета. При контроле предметов с большой

поверхностью смывы проводят в нескольких местах исследуемого

предмета площадью примерно в 100 - 200 кв.см.

2.4. Для выделения стафилококков делают посев непосредственно

на чашку Петри с желточно-солевым агаром (см. схему исследования

на стафилококк). Кроме того, в качестве среды накопления

используют бульон с 6,5 % хлористого натрия, бульон с 1 % глюкозы,

разлитые в пробирки по 0,5 мл, в которые засевают по 0,2 - 0,3 мл

смывной жидкости. Засеянные пробирки инкубируют при 37 град. C в

течение 20 - 24 часов, после чего делают высев на ЖСА (см. схему

исследования на стафилококк).

2.2.5. Для выявления бактерий группы кишечных палочек

производят посев на среду обогащения, для чего тампон (марлевую

салфетку погружают в 10 - 20 % желчный бульон или среду Кесслера.

Через сутки инкубирования при 37 град. C делают пересев на среду

Эндо. Подозрительные колонии на среде Эндо микроскопируют и

пересевают на 2-ю бродильную пробу - среду Гисса с глюкозой. Среду

выдерживают 24 часа при 43 град. C.

______________________

Примечание: При использовании свиной желчи для приготовления

желчного бульона концентрация желчи должна быть в 20 раз меньше.

2.2.6. Для выявления синегнойной палочки специальные посевы

можно не производить. Обычно колонии синегнойной палочки удается

выявить на кровяном агаре или на среде Эндо. Колонии,

подозрительные на синегнойную палочку, пересевают на скошенный

агар, содержащий 2 - 5 % глицерина или маннита. Колонии

синегнойной палочки дают на поверхности скошенного агара обильный

рост с зеленоватым оттенком, маслянистой консистенции с

характерным медовым запахом. Выделенную культуру окрашивают по

Граму, микроскопируют, определяют гемолитические свойства путем

высева на чашку с кровяным агаром. Ориентировочный перечень

объектов, подлежащих бактериологическому контролю:

А. Наркозная комната

1. Инкубационная трубка

2. Маска наркозного аппарата

3. Тройник наркозного аппарата

4. Гофрированная трубка

5. Ларингоскоп

6. Роторасширитель

7. Дыхательный мешок

8. Руки врачей-анестезиологов-реаниматологов,

сестер-анестезиологов

Б. Предоперационная

1. Тазы для мытья рук хирургов

2. Чистые щетки для мытья рук

3. Фартуки (клеенчатые или полиэтиленовые)

В. Операционная

1. Рабочий стол анестезиологов

2. Операционный стол

3. Шланг вакуум-насоса

4. Шланг кислородной подводки

5. Смывы с рук всех участвующих в операции

6. Кожа операционного поля

Г. Послеоперационные палаты, отделения и палаты

реанимации и интенсивной терапии

1. Кровать, подготовленная для больного

2. Полотенце для рук персонала и смывы с рук

3. Щетка на раковине

4. Шланг кислородной подводки

5. Запасная наркозная аппаратура (набор реанимационной

укладки)

6. Шланг вакуум-отсоса

7. Внутренняя поверхность холодильника (для хранения

лекарств, градусников)

8. Градусники

Д. Перевязочные

1. Кушетка для перевязок

2. Полотенце для рук персонала

3. Щетка на раковине

4. Халат медицинских сестер

5. Руки врачей, медицинских сестер

6. Рабочий медицинский стол

7. Внутренняя поверхность холодильника для хранения лекарств

3. Правила отбора проб для контроля стерильности в

лечебно-профилактических учреждениях

3.1. Забор проб на стерильность проводит операционная сестра

под руководством сотрудника бактериологической лаборатории в

стерильные емкости с соблюдением строжайших правил асептики

непосредственно перед проведением операции.

3.2. Для контроля стерильности используют следующие

питательные среды:

- сахарный бульон Хоттингера (0,5 и 1 % глюкозы);

- тиогликолевую среду;

- бульон Сабуро.

Одновременный посев изделий на 3 вышеуказанные среды

обязателен. При посеве изделия или его части непосредственно в

питательную среду количество среды в пробирке (колбе, флаконе и т.

д.) должно быть достаточным для полного погружения изделия или его

части.

3.3. Посевы в бульон Хоттингера и тиогликолевую среду

выдерживают в термостате при температуре 37 град. C, среду Сабуро

- при температуре 20 - 22 град. C.

Посевы инкубируют в термостате в течение 14 суток.

3.4. Описание состава, способа приготовления и правила

контроля стерильности питательных сред изложены в приложении 1.

4. Мероприятия, обеспечивающие асептические

условия при посевах

4.1. Требования к помещению для посева на стерильность.

4.1.1. Посев исследуемого материала желательно проводить в

настольных боксах с ламинарным потоком воздуха. Эти боксы

размещают в отдельных помещениях бактериологической лаборатории.

При отсутствии боксов с ламинарным потоком воздуха контроль

стерильности проводят в боксированных помещениях (бокс с

предбоксником).

Общая площадь бокса должна быть не менее 3 кв.м.

4.1.2. В боксированном помещении стены должны быть окрашены

масляной краской и выложены картельной плиткой, не должны иметь

выступов, карнизов, трещин; пол в боксе и рабочий стол должны быть

покрыты линолиумом, стенки и ножки стола - покрашены масляной

краской.

4.1.3. Боксы оборудуют приточно-вытяжной вентиляцией (с

преобладанием притока над вытяжкой), в них подается стерильный

воздух, проходящий через бактериальные фильтры с материалом

Петрянова.

4.1.4. В боксе и предбокснике устанавливают настольные (БОН)

и потолочные (ОБП) ультрафиолетовые облучатели из расчета Вт

удельной мощности ламп, создающих прямое излучение на 1 кв.м

помещения. Облучатели размещают на высоте 2 - 2,5 м от пола.

4.1.5. Для тушения пожара в боксированном помещении должны

быть в наличии противопожарные средства, углекислотные

огнетушители типа ОУ-2 из расчета один огнетушитель на предбоксник

и бокс.

4.2. Подготовка бокса, инструментов и персонала к работе.

4.2.1. Ежедневно до проведения работы помещения бокса и

предбоксника подвергают тщательной обработке. Стены, пол,

поверхности инвентаря протирают раствором, содержащим 3 % перекиси

водорода и 0,5 % моющего средства ("Триас-А", "Прогресс", "Астра",

"Лотос"). В случае обнаружения в воздухе грибов или споровых форм

микроорганизмов, влажную уборку проводят 6 % раствором перекиси

водорода с 0,5 % выше перечисленных моющих средств.

Внутреннюю поверхность настольного бокса обрабатывают также,

как и помещение бокса. Через 45 - 60 минут после обработки в бокс

вносят все необходимое для работы - материалы и инструменты, кроме

образцов продукции.

4.2.2. Перед внесением материалов в настольном боксе включают

вентиляцию на время, достаточное для обеспечения полного обмена

воздуха в нем.

4.2.3. За 1,5 - 2 часа до начала работы в боксе и

предбокснике на 1,5 - 1 час включают бактерицидные лампы.

4.2.4. Инструменты, посуду и спецодежду, используемые в

работе, предварительно стерилизуют и тканевые изделия обрабатывают

при следующем режиме: температура 132 град. C +-2 град. C, время

стерилизационной выдержки - 20 мин.; изделия из резины (перчатки и

т. д.) - при температуре 120 град. C +-2 град. C в течение 45

минут.

В процессе работы вспомогательный инструмент 2 - 3 раза

заменяют новым стерильным комплектом.

4.2.5. Перед входом в бокс работники лаборатории тщательно

моют руки теплой водой с мылом и щеткой, вытирают стерильным

полотенцем, одевают в предбокснике на ноги бахилы, стерильные

халаты, 4-слойные маски, шапочки, стерильные перчатки.

4.2.6. В процессе посева в боксе регулярно проверяют

обсемененность воздуха. Для этого на рабочий стол ставят 2 чашки с

мясо-пептонным агаром (МПА), открывая их на 15 минут, затем чашки

помещают в термостат при температуре 37 град. C на 48 часов.

Допускается более трех колоний неспорообразующих сапрофитов.

В случае роста на чашках более 3 колоний проведение

дальнейших работ в данном боксе запрещается. В боксе дополнительно

проводят тщательную обработку 6 % раствором перекиси водорода с

0,5 % моющего средства.

4.2.7. Контроль стерильности изделий проводят путем

погружения в питательные среды. В исключительных случаях, когда

необходимо проверить стерильность инструмента больших размеров,

пробы забирают методом смыва стерильной марлевой салфеткой

размером 5 х 5 кв.см, предварительно увлажненной стерильным