Страница 18: ГОСТ 16962-71. Изделия электронной техники и электротехники механические и климатические воздействия. требования и методы испытаний (72493)

Приготовление твердой питательной среды сусло-агара производят путем добавления 1,5% агар-агара. Для его расплавления среду нагревают на водяной бане. Расплавленный сусло-агар разливают в пробирки или колбы и стерилизуют.

Б. Методы стерилизации питательных сред и посуды

Посуду, используемую для выращивания микроорганизмов, готовые питательные среды, разлитые в пробирки или колбы, закрытые ватными пробками, подвергают стерилизации, т.е. обеспложиванию. Стерилизацию питательных сред, резиновых и других предметов производят насыщенным паром под давлением в автоклаве.

Посуду (пипетки, чашки Петри, пробирки и др.) стерилизуют сухим жаром в печах Пастера или сушильных шкафах.

1. Стерилизацию насыщенным паром осуществляют в автоклаве при давлении 2 2

1,5 кгс/см или 2 кгс/см и температуре 112 °С или 121 °С соответственно.

2 Среду Чапека-Докса и сусло-агар стерилизуют при давлении 1,5 кгс/см в течение 20-30 мин.

2. Стерилизацию сухим жаром производят в специальных сушильных шкафах- печах Пастера или в электросушильных шкафах с нагревом до 200 °С. Хорошо вымытую и высушенную посуду перед стерилизацией завертывают в бумагу (каждый предмет отдельно) и помещают в сушильный шкаф. Нагревание производят в течение 2 ч при температуре 160-170 °С.

В. Пересевы микроорганизмов

Грибы, предназначенные для заражения испытываемых образцов, сохраняют в так называемой чистой культуре. Каждый раз для работы производят пересев микроорганизмов. Пересевом называют перенос небольшого количества микроорганизмов из чистой культуры в сосуды (пробирку или чашку Петри) со стерильной питательной средой. Пересев производят в стерильных условиях, чтобы не загрязнить культуру другими микроорганизмами из воздуха. Для переноса используют изолированные маленькие комнаты (боксы), где воздух предварительно очищают облучением бактерицидными лампами. Перенос культуры грибов совершают с помощью бактериологической петли или иглы, конец которой может быть загнут под прямым углом в виде небольшого крючка.

Бактериологические петли или иглы, которые укрепляются в держателе, изготовляют из платиновой, хромоникелевой или вольфрамовой проволоки толщиной 0,5 мм и длиной 5-10 см.

Порядок работы при пересеве микроорганизмов должен быть следующим:

1. Зажечь спиртовку или газовую горелку.

2. Взять в левую руку две пробирки: одну со свежей стерильной питательной средой (ближе к себе), другую с культурой микроорганизма.

3. Взять правой рукой держатель петли или иглы, прокалить их в пламени спиртовки (до красного каления) и обжечь часть держателя.

4. Открыть одновременно пробирки, плавно зажав ватные пробки мизинцем правой руки.

5. Обжечь края пробирок.

6. Ввести петлю или иглу в пробирку с микроорганизмами, и, захватив наибольшее количество спор грибов, перенести их, не касаясь стенок пробирки, на поверхность свежей питательной среды в другой пробирке.

7. Обжечь одновременно обе пробки и края пробирок и также одновременно в пламени закрыть обе пробирки.

8. Прокалить иглу или петлю и часть держателя в пламени спиртовки.

Для проверки чистоты или для очистки имеющихся культур грибов пользуются агаровыми пластинками, на которых получают отдельные колонии грибов. Для получения отдельных колоний микроорганизмов на агаровых пластинках в чашках Петри наиболее удобным является способ Коха, описанный ниже.

Берут несколько пробирок с расплавленным сусло-агаром. Одну из них зажимают между большим и указательным пальцами левой руки так, чтобы пробирки находились почти в горизонтальном положении во избежание попадания в них зародышей из воздуха. Затем, сняв ватную пробку и зажав ее между мизинцем и ладонью правой руки так, чтобы часть пробки, бывшая внутри пробирки, не касалась руки, слегка обжигают края пробирки и вводят внутрь ее посевной материал с помощью бактериологической петли или иглы. После этого обжигают горлышко пробирки и, закрыв ее ватной пробкой, осторожно размешивают расплавленный сусло-агар наклонением пробирки в разные стороны и раскатыванием ее между ладонями. Затем берут пробирку с расплавленным сусло-агаром и, соблюдая те же самые предосторожности, переносят петлей или иглой 2-3 капельки из первой пробирки во вторую.

Получив первое и второе разбавление посевного материала, производят разлив. Сначала снимают пробку и после обжига края пробирки вливают содержимое ее в стерильную чашку Петри.

Сусло-агар распределяют равномерным слоем по дну чашки осторожным наклонением последней в разные стороны так, чтобы не запачкать средой крышку. Таким же способом выливают содержимое второй пробирки в другую стерильную чашку Петри и обе чашки Петри выдерживают при температуре 29±2 °С и относительной влажности 95±3%.

Каждая спора, попавшая в сусло-агар из посевного материала, будет при застывании сусло-агара закреплена на определенном месте, где она начнет развиваться и даст колонию. Колонии, образовавшиеся из одной клетки, и будут представлять чистую культуру.

После просмотра колоний под микроскопом и установления однородности клеток в микроскопических препаратах производят отсев микроорганизмов из колонии в пробирку на твердую косую питательную среду с соблюдением правил стерильности.

Пипетки, предметные стекла и прочие лабораторные предметы после употребления опускают в сосуд с дезинфицирующим раствором. В качестве дезинфицирующих растворов в лабораторной практике чаще всего употребляют 5%-ный раствор фенола (карболовой кислоты) или 5%-ные раствора крезола и лизола, а также 10-20%-ную взвесь хлорной извести и другие вещества.

Засеянные питательные среды в пробирках и чашках Петри для выращивания культур микроорганизмов выдерживают при температуре 29±2 °С и относительной влажности 95±3% в течение 10 дней до появления зрелых спор грибов.

Признаками появления созревших спор грибов является окраска колоний.

1. Aspergillus niger (v. liegh) - черная.

2. Aspergillus amstelodami (Mong) - ярко-желтая.

3. Penicillium syslopium (Westl) -зеленая.

4. Penicillium brevicompacturn - окраска меняется от белой до розовой, (Dierckx) лососевой и бурой. В спороносной области

колонии - зеленого цвета.

Созревшие споры используются для приготовления водной суспензии.

Г. Хранение культур грибов

Музейные части культуры грибов, представляющие собой потомство одной клетки, выращивают и хранят на косых питательных средах в пробирках, закрытых ватными пробками. Пробирки с культурами хранят в холодильнике в чистом помещении при температуре от 5 до 10 °С или при комнатной температуре 20±5 °С (в затемненном помещении).

Срок хранения культур грибов в условиях температуры от 5 до 10 °С - 3 месяца. Срок хранения культур грибов при температуре 20±5 °С - не более одного месяца.

После окончания указанного срока хранения культур грибов их следует снова пересевать на свежую питательную среду.

Ввиду того, что в результате многократных пересевов культуры грибов могут выродиться, рекомендуется обновлять культуры один раз в три года.

Д. Метод приготовления суспензии спор

Для приготовления водной споровой суспензии используют культуру грибов, возраст которых равен 14-30 суткам (считая с момента пересева).

В культуру грибов прибавляют 5-7 мл стерильной дистиллированной воды, которая содержит 0,01% смачивающего агента - лаурил сульфоната натрия или полигликолевого эфира.

Поверхность культуры слегка трут перевиальной иглой для переведения спор в водную фазу. Путем легкого взбалтывания пробирки споры отделяют от культур.

Данную операцию повторяют для каждой культуры. Взболтанную суспензию спор каждой культуры фильтруют в стерильные колбы через тонкий слой стерилизованной гигроскопической или стеклянной ваты для устранения части мицелия и остальных ненужных частиц. Отфильтрованную смешанную суспензию отделяют в асептических условиях и удаляют жидкость, находящуюся на поверхности. Остаток снова суспендируют в 50 мл стерильной дистиллированной воды и снова сепарируют.

Данную операцию повторяют три раза. Необходимо работать с определенным количеством спор. Для этого суспензию спор культуры каждого штамма фильтруют отдельно, а количество спор определяют при помощи счетной камеры или нефелометра. Суспензию разбавляют до концентрации 1-2 миллионов спор в 1 мл.

После смешивания подготовленных таким образом суспензий спор отдельных штаммов плесени суспензии очищают, как указано выше. Суспензию спор применяют в течение 8 ч с момента ее приготовления.

ПРИЛОЖЕНИЕ 12

ОЦЕНКА РОСТА ГРИБОВ ДЛЯ ИЗДЕЛИЙ ЭЛЕКТРОННОЙ
ТЕХНИКИ

Степень биологического обрастания испытываемых образцов оценивают по 5- балльной системе:

0 - нет роста грибов. На образцах при контроле под микроскопом при 56- кратном увеличении не обнаруживается роста грибов;

1. - очень слабый рост грибов. На образцах при контроле под микроскопом при 56-кратном увеличении наблюдаются единичные проросшие споры;

2. - слабый рост грибов. На образцах при контроле под микроскопом при 56- кратном увеличении наблюдается слабый рост мицелия и может наблюдаться единичное спороношение;

3. - умеренный рост грибов. Невооруженным глазом на образцах видны очаги плесени;

4. - обильный рост грибов. Невооруженным глазом видно сплошное поражение грибами поверхности образцов.

ПРИЛОЖЕНИЕ 13

МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВОДНОСТИ И ДИСПЕРСНОСТИ
СОЛЯНОГО ТУМАНА

Определение водности тумана

Водность определяют прибором Зайцева, работающим по принципу инерционного оседания капель тумана на специальную фильтровальную бумагу, смазанную красящим веществом. При просасывании определенного объема воздуха, содержащего туман, на фильтровальной бумаге образуется пятно, по размеру которого, на основании переводных градуировочных таблиц, определяют содержание капельно-жидкой влаги в единице объема.

Определение дисперсности тумана методом микрофотографирования

Пробу тумана берут путем естественного осаждения капелек на предметное стекло, помещенное в середине камеры. На поверхность стекла наносят смесь трансформаторного масла с вазелином. Стекла выдерживают в камере около 0,5 мин. Стекло с осевшими на него капельками тумана фотографируют через микроскоп, причем делают 3-5 снимков в разных местах пробы. Сфотографированные на пленку капли увеличивают при помощи проекционного аппарата и подсчитывают общее число заснятых капель данной пробы и число капель каждого размера.

ПРИЛОЖЕНИЕ 14 к ГОСТ 16962-71

Справочное

Связь между степенями жесткости по влажности воздуха и
исполнениями изделий

Текст документа сверен по:
официальное издание
М.: Издательство стандартов, 1987