Приготовление раствора Люголя
В 100 см3 стерильной дистиллированной воды растворяют 25 г кристаллического йода и 20 г йодистого калия.
В стерильную колбу помещают 4,5 г х. ч. мела и стерилизуют сухим жаром при температуре 150°С в течение 15 мин, наливают 90 см3 мясо-пептонного бульона (по п. 3.8), стерилизуют в течение 30 мин при давлении 105 Па. В колбу с мясо-пептонным бульоном и мелом стерильно добавляют 2 см3 раствора Люголя и 10 см3 раствора серноватистокислого натрия, взбалтывают.
G 8 ГОСТ 9958—81
Приготовление среды Кауфмана
В 100 см3 стерильной среды Мюллера, приготовленной по п. 3.15, стерильно добавляют 1 см3 водного раствора 1 г/дм3 бриллиантовой зелени и 5 см3 стерильной желчи крупного рогатого скота. Смесь хорошо взбалтывают (не стерилизуют).
(Измененная редакция, Изм. № 2).
Приготовление среды Гисса
Для приготовления индикатора Андреде в 100 см3 дистиллированной воды растворяют 18,4 см3 1 моль/дм3 раствора гидроокиси натрия и 0,3 г кислого фуксина. Раствор стерилизуют 5 мин при давлении 5* 104 Па и хранят в темноте.
В 100 см3 дистиллированной воды растворяют 1 г пептона и 0,5 г хлористого натрия при нагревании. Затем фильтруют до тех пор, пока раствор не станет совершенно прозрачным.
В фильтрате устанавливают pH 7,0, прибавляют 0,5 г углевода, а затем 1 см3 индикатора Андреде. Полученную смесь разливают в пробирки с поплавками по 5 см3 и стерилизуют 20 мин при давлении 5-Ю4 Па.
Среда должна быть бесцветной или соломенно-желтого цвета, без розового оттенка.
Допускается использовать готовые среды Гисса — сухой препарат с индикатором «ВР» и маннитом, лактозой, сахарозой, глюкозой.
Среду Плоскирева приготавливают из сухой готовой среды.
Среду Левина приготавливают из сухой готовой среды.
Среду висмут-сульфит-агар приготавливают из сухой, готовой среды.
Приготовление х л о р и с т о м а г н и е в о й с р е- д ы «М» (модифицированной)
Среда состоит из трех растворов А, В и С.
Приготовление дрожжевого экстракта
В 2 дм3 дистиллированной воды растворяют 1 кг прессованных хлебопекарных дрожжей. Полученную суспензию стерилизуют 30 мин текучим паром, затем отстаивают в холодильнике при температуре 4—6°С в течение 5—6 сут.
Жидкость над осадком декантируют, приливают 2,5 см3) 0,01%-ного раствора кристалл-виолета, разливают во флаконы или пробирки и вновь стерилизуют при температуре 100°С в течение 30 мин.
Экстракт хранят в холодильнике при температуре 4—6°С в течение двух недель со дня приготовления.
Для приготовления раствора А в 90 см3 дистиллированной воды растворяют 0,42 г пептона, 0,7 г хлористого натрия, 0,15 г однозамещенного фосфорнокислого натрия, 2 см3 дрожжевого диализата. (При отсутствии дрожжевого диализата допускается заменять его дрожжевым экстрактом).
ГОСТ 9958—81 С. 9
Для приготовления раствора В в 9 см3 дистиллированной воды растворяют 3,6 г кристаллического хлористого магния.
Раствор С состоит из 0,09 см3 водного раствора 50 г/дм3 бриллиантовой зелени.
(Измененная редакция, Изм. № 2).
Для приготовления хлористомагниевой среды «М» (мо- дифицированной) растворы А, В и С смешивают и стерилизуют 30 мин при давлении 5-Ю4 Па.
Приготовление среды Крумвид е-0 л ь к е- ницкого в модификации Ковальчука
В 1 дм3 дистиллированной воды растворяют 1 г гипосульфита, 0,6 г соли Мора, 10 г мочевины, 15 г лактозы х. ч., 3,5 г сахарозы и 2 г глюкозы. Устанавливают pH среды до 7,4—7,6. Добавляют 46 г сухой среды с сахарозой и индикатором ВР. Все размешивают, кипятят в водяной бане в течение 40 мин. Разливают в пробирки по 5—6 см3. Среду, разлитую в пробирки, стерилизуют 20 мин при давлении 5* 104 Па. После стерилизации среду скашивают так, чтобы в пробирке остался столбик высотой не менее 3 см.
Приготовление агара с бриллиантовым зеленым и феноловым красным (БФА)
Для приготовления растворов красок:
0,5 г бриллиантового зеленого растворяют в 100 см3 дистиллированной воды;
0,4 фенолового красного, 16 см3 0,1 моль/дм3 гидроокиси натрия — в 184 см3 дистиллированной воды.
Оба приготовленных раствора в плотно закрытых флаконах выдерживают в термостате при температуре 37°С в течение суток. Небольшим нерастворившимся осадком можно пренебречь.
2. Для приготовления смеси красок в 200 см3 раствор фенолового красного добавляют 5 см3 бриллиантового зеленого. Смесь хранят в холодильнике. Срок хранения смеси не ограничен.
В 1 дм3 дистиллированной воды вносят 50 г сухого питательного агара. 10 г лактозы, 40 см3 0,1 моль/дм3 соляной кислоты,
Смесь выдерживают при комнатной температуре в течение 30 мин, затем в кипящей водяной бане не менее 1 ч, после чего на открытом огне (электроплитке) в течение 3—5 мин, фильтруют через вату (небольшой мутностью можно пренебречь).
Смесь разливают во флаконы, стерилизуют при давлении 5-104 Па в течение 30 мин и хранят в холодильнике до месяца со дня приготовления.
В 100 см3 среды с агаровой основной (п. 3.23.3), предварительно расплавленной и охлажденной до 45°С, вносят 4,1 см3 смеси красок (п. 3.23.2). Среду разливают по чашкам Петри. Среда имеет цвет бутылочного стекла — зеленовато-желтый.
П р и готов л е н и е молочно-солевого агара
Для приготовления солевого мясо-пептонного агара
С. 10 ГОСТ 9958—81
65 г/дм3 в 1 дм3 расплавленного мясо-пептонного агара (пп. 3.4; 3.5) добавляют 65 г х. ч, хлористого натрия. Останавливают pH-— 7,4. Стерилизуют в актоклаве в течение 20 мин при давлении 105 Па.
(Измененная редакция, Изм. № 1, 2).
3 100 см3 расплавленного и охлажденного солевого агара до 45°С (п. 3.24.1) добавляют 10 см3 стерильного обезжиренного молока, разливают по чашкам Петри. Среду хранят в холодильнике при температуре 4—9°С в течение недели со дня приготовления.
Приготовление желточно-солевого агара (среды Чистович)
Для приготовления желточного раствора в 200 см3 стерильного физиологического раствора добавляют стерильно один яичныи желток и раствор взбалтывают. Раствор хранят в холодильнике при температуре 4—9°С в течение одной недели со дня приготовления.
В 150 см3 расплавленного и охлажденного до 45СС солевого агара 65 г/дм3 (п. 3.24.1) стерильно добавляют 50 см3 желточного раствора, взбалтывают и разливают по чашкам Петри. Среду хранят в холодильнике при температуре 4—9°С в течение недели со дня приготовления.
Приготовление цитратной плазмы
К 8 см3 свежей крови кролика добавляют стерильно 2 см3 лимоннокислого натрия 50 г/дм3 и отстаивают в холодильнике при температуре 4—9°С в течение суток.
Допускается использовать готовую сухую цитратную плазму.
3.25.2; 3.26. (Измененная редакция, Изм. № 2).
Пр иготовление бульона Вайнберга
Приготовление мясной воды из сердца крупного рогатого скота
В 1 дм3 водопроводной воды добавляют 1 кг сердца крупного рогатого скота, пропущенного через мясорубку. Медленно нагревают до кипения, кипятят 20 мин, охлаждают, снимают жир, фильтруют через ватно-марлевый фильтр*
Приготовление пепсин-пептонной воды
В 4 дм3 водопроводной воды добавляют 400 г измельченной свежей печени крупного рогатого скота, 400 г измельченных свиных желудков, 40 г соляной кислоты (плотностью 1,19 г/см2), перемешивают, подогревают до 50°С и оставляют при комнатной температуре на 18—24 ч. Затем кипятят в течение 10 мин, декантируют (осаждают), фильтруют, добавляют 8 г двузамещенного фосфорнокислого натрия, устанавливают pH 7,4.
Смешивают 1 дм3 мясной воды из сердца крупного рогатого скота (п. 3.27.1) и 2 дм3 пепсин-пептонной воды (п. 3.27.2), устанавливают pH 7,8—8,2, разливают по колбам и стерилизуют 30 мин при давлении 10s Па.
ГОСТ 99S8—81 С. 11
Приготовление сухой среды КПД (ки- то-пептон о-д рожжевой)
В 1 дм3 теплой дистиллированной воды добавляют 65 г сухого порошка КПД. Устанавливают pH 7,8—8,0 и разливают в стерильную посуду с ватой. Стерилизуют 30 мин при давлении 5-Ю4 Па.
Приготовление циклосериновой среды (СЦС)
В 1 дм3 питательной основы (бульон Хоттингера п. 3.7, бульон Вайнберга п. 3.27, сухая кито-пептоно-дрожжевая и. 3.28) добавляют последовательно 5 см3 раствора 100 г/дм3 сернокислого железа, 10 см3 раствора 100 г/дм3 сульфита натрия (кристаллического) и 40 см3 раствора 10 г/дм3 Д-циклосерина. Все перечисленные компоненты готовят отдельно на стерильной дистиллированной воде. Не следует их смешивать вместе перед добавлением к основе, так как может образоваться осадок.
Среду хранят в холодильнике при температуре 4—9°С не более недели со дня приготовления.
П риготовл ение среды В ил ьсо н-Б л ер а
Раствор хлористого железа готовят на стерильной дистиллированной воде; раствор сернистокислого натрия стерилизуют в течение 1 ч текучим паром.
К 100 см3 расплавленного и охлажденного до температуры 80°С мясо-пептонного агара, приготовленного по п. 3.4 или 3.5, добавляют 1 г глюкозы (pH не ниже 7,2), 10 см3 раствора 200 г/дм3 сернистокислого натрия и 1 см3 раствора 80 г/дм3 хлористого железа. Смесь разливают в стерильные пробирки столбиком высотой по 10 см3.
3.29; 3.30. (Измененная редакция, Изм. № 2).
П риготовл ение мясной воды
кг мясного фарша, приготовленного из говядины высшего сорта, заливают 2 дм3 водопроводной воды и настаивают в холодильнике 24 ч; затем кипятят в течение 30 мин при постоянном помешивании и фильтруют через ватно-марлевый фильтр. К полученному фильтрату добавляют воду до первоначального уровня.
Режим стерилизации 20 мин при давлении 10s Па.
Пр игот о вл ение мясо-пептонного бульона (МПБ) из мясной воды
В 1 дм3 мясной воды добавляют 10 г пептона и 5 г хлористого натрия. Затем устанавливают pH 7,3—7,4, кипятят в течение 20 мин и фильтруют. Раствор стерилизуют 20 мин при давлении 10s Па.
Подготовка проб
В зависимости от вида продукта объединенную пробу массой 50 г составляют из точечных проб следующим образом:
С* 12 ГОСТ 9958—81
колбасные изделия в оболочке и продукты из свинины, баранины и говядины помещают в металлический или эмалированный тазик (тарелку), тщательно протирают ватным тампоном, смоченным спиртом, и дважды обжигают над пламенем (спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962—67).
Затем батоны разрезают продольно стерильным (фламбированным) ножом или скальпелем на две половинки, не рассекая оболочку противоположной стороны батона. Пробу отбирают из нескольких участков центральной части и из-под оболочки обеих половинок батона;
из свиных, бараньих, говяжьих продуктов на костях и из бекона пробы вырезают стерильным инструментом из различных участков обожженного образца на глубине 2—3 см от поверхно- сти, предпочтительно ближе к кости;
изделия без оболочки (мясные хлебы, паштеты, студни и другие изделия) исследуют с поверхности и в глубине продукта.
Для анализа поверхности изделий без оболочки, после развертывания упаковки, с поверхности исследуемых образцов делают смыв (с каждого образца новым стерильным увлажненным ватным тампоном) с тех участков, с которыми могли соприкасаться руки упаковщика.
Тампоны помещают в пробирки, заполненные на 3/4 их высоты средой «ХБ», Хейфеца или 5 см3 среды Кесслер.
Для анализа ГЛубинных участков продукта образцы помещают в металлический или эмалированный тазик (тарелку), смачивают спиртом и обжигают. Затем делают продольный разрез и отбирают навеску методом, указанным для колбасных изделий и продуктов в оболочке, составляя из них одну объединенную пробу для каждого образца в отдельности, которую помещают в предвари- тельно взвешенную стерильную бюксу или чашку Петри.
Из объединенной пробы каждого образца берут в стерильную посуду (пергамент) навеску массой 20 г с погрешностью, не превышающей 0,1 г.
Навеску помещают в стерильную колбу (стакан) гомогенизатора для приготовления испытуемой взвеси. Для этого в колбу добавляют раствор 1 г/дм3 пептонной воды или стерильного физиологического раствора в четырехкратном количестве и гомогенизируют в электрическом смесителе; вначале измельчают материал на кусочки замедленной скоростью вращения ножей, затем при 15000—20000 об/мин в течение 2,5 мин.
Допускается при отсутствии гомогенизатора приготовление испытуемой взвеси в ступке путем растирания 20 г продукта в стерильной фарфоровой ступке с 2—3 г стерильного песка, постепенно приливая 80 см3 раствора 1 г/дм3 пептонной воды или стерильного физиологического раствора. При растирании проб варе-
ГОСТ 9958—81 С. 1В
ных изделий мажущейся консистенции (ливерные, кровяные кол* басы) стерильный песок можно не добавлять.
