Страница 3: ГОСТ 9958—81. Изделия колбасные и продукты из мяса (67679)

Для посевов на питательные среды стерильной градуирован* ной пипеткой отбирают взвесь после 15 мин выдержки при КОМ’ натной температуре.

1. см³ приготовленной испытуемой взвеси содержит 0,2 г про* дукта.

(Измененная редакция, Изм. № 1, 2).

4. ПРОВЕДЕННІ АНАЛИЗА

Метод не распространяется на сырокопченые колбасы.

Питательный агар, приготовленный по пп. 3.4; 3.5, расплав* ляют на водяной бане и охлаждают до температуры 45°С.

Стерильные чашки Петри раскладывают на столе, подписы­вают наименование анализируемого продукта, дату посева и ко­личество посеянного продукта.

Из каждой пробы должно быть сделано не менее двух посевов* различных по объему, взятых с таким расчетом, чтобы на чашках выросло от 30 до 300 колоний. При этом на одну чашку Петри проводят посев 0,1 г, а на другую — 0,01 г продукта.

Для посева 0,1 г продукта готовят первое десятикратное раз- ведение испытуемой взвеси: стерильной пипеткой с широким кон­цом отбирают 5 см³ испытуемой взвеси (приготовленной по п. 3.33), переносят ее в пробирку с 5 см³ стерильного физиологи­ческого раствора или пептонной воды. Конец пипетки должен быть опущен ниже поверхности раствора, не прикасаясь к стен­кам пробирки, чтобы избежать смывания бактерий с наружной стороны. 1 см³ полученного раствора содержит 0,1 г испытуемого продукта.

Другой стерильной пипеткой тщательно перемешивают содер­жимое пробирки продуванием, отбирают 1 см³ и переносят в сте­рильную чашку Петри, слегка приоткрывая крышку.

Для посева 0,01 г продукта готовят следующее разведение: другой стерильной пипеткой тщательно перемешивают содержи­мое пробирки, отбирают 1 см³ и переносят в пробирку с 9 см³ стерильного физиологического раствора. 1 см³ испытуемого раст­вора вторичного разведения содержит 0,01 г испытуемого продук­та. 1 см³ этого раствора переносят в стерильную чашку Петри,

С. 14 ГОСТ 9958—81

как описано выше. При необходимости таким же образом готовят последующие разведения.

После внесения разведения анализируемой взвеси в чашки Петри чашку заливают 12—15 см³ расплавленного и охлажденно­го питательного агара при фламбировании краев пробирки или бутылки, где он содержится. Быстро смешивают с мясо-пептон­ным питательным агаром, осторожно наклоняя или вращая чашку по поверхности стола. Необходимо избегать образования пузырь­ков воздуха, незалитых участков дна чашки Петри, попадания среды на края и крышку чашки.

Для того, чтобы помешать развитию на поверхности агара спорообразующих микробов и бактерий группы протея в Н-фор- ме, допускается наслоение расплавленного и охлажденного до температуры 45—50°С голодного агара толщиной 3—4 мм.

После застывания агара чашки Петри перевертывают и поме­щают в термостат с температурой 30°С на 72 ч. Через 72 ч под­считывают общее количество’ колоний бактерий, выросших на чашках.

Колонии, выросшие как на поверхности, так и в глубине агара, подсчитывают при помощи лупы с пятикратным увеличением или специальным прибором с лупой. Для этого чашку кладут вверх дном на черный фон и кажду о колонию отмечают со стороны дна тушью или чернилами для стекла.

Для определения общего количества микробов в 1 г продукта подсчитанное количество колоний умножают на степень разве­дения анализируемого продукта.

За окончательный результат определения количества бактерий в 1 г анализируемого продукта принимают среднее арифметичес­кое результатов подсчета двух чашек разной массы продукта.

Цель определения этой группы бактерий — проверка соблюде­ния режима варки колбас или санитарно-гигиенических условий в процессе производства сырокопченых колбасных изделий.

При микробиологическом контроле колбасных изделий в про­изводственных лабораториях можно ограничиваться обнаружени­ем бактерий из группы кишечной палочки без их биохимической дифференциации.

ГОСТ 9958—81 С. 15

В пробирки, содержащие по 5 см³ среды «ХБ», среды Хейфе­ца двойной концентрации или среды КОДА, вносят по 5 см³ ис­пытуемой взвеси (пп. 3.33; 3.34) стерильной пипеткой вмести­мостью 5—10 см³ с широким концом.

Допускается применение среды Кесслер по 10 см³.

Пробирки со средой «ХБ> или Кесслер, или Хейфеца, или КОДА помещают в термостат с температурой (37+0,5) °С на 18—20 ч.

Посевы смывов, отобранных тампонами с поверхности изделий без оболочки, выдерживают при температуре 43°С (для обнару- жения повторного бактериального загрязнения).

При росте бактерий группы кишечной палочки среды «ХБ» и КОДА окрашиваются в желтый цвет, среда Хейфеца приобретает также желтый цвет, который может меняться до салатно-зеле­ного, на среде Кесслер в поплавке образуется газ.

Для окончательного заключения о присутствии в продукте бактерий группы кишечной палочки проводят высев со среды Кесслер (забродившие пробирки) или Хейфеца (изменение цвета среды) в чашки Петри со средой Эндо или Плоскирева, или Ле­вина. Чашки Петри помещают в термостат с температурой 37°С. Через 18—20 ч посевы просматривают. На среде Эндо бактерии группы кишечной палочки образуют темно-красные колонии с металлическим блеском или розово-красные без блеска, на среде Плоскирева — кирпично-красные с глянцевой поверхностью, на среде Левина — темно-фиолетовые колонии или фиолетово-черные блестящие. Из подозреваемых колоний готовят мазки, которые окрашивают по Граму.

Специфическое изменение среды «ХБ» и КОДА не требует дальнейшего подтверждения.

При заведомо высокой обсеменности анализируемый продукт массой не более 0,25 г помещают в пустую пробирку, в которую закладывают комочек стерильной фильтровальной бумаги раз- мером 5><5 см, и стерильной стеклянной палочкой или фламбиро­ванной проволокой проталкивают материал до дна (не уплотняя), в пробирку наливают среду «ХБ», КОДА или Хейфеца (нормаль­ной концентрации), заполняя ее на ³/₄ высоты пробирки. Пробир­ки помещают в термостат с температурой 37°С на 8—10 ч. При росте бактерий группы кишечной палочки на среде «ХБ» и КОДА среда изменяет свой цвет из фиолетово-пурпурного в желтый. При росте бактерий группы кишечной палочки на среде Хейфеца среда изменяет свой цвет из красно-фиолетового п желтый, ко­торый затем может меняться до салатно-зеленого.

Пробы, отобранные с поверхности изделий без оболочки там­понами, анализируют аналогично.

С. 16 ГОСТ 9958—81

Обнаружение грамотрицательных не образующих спор пало­чек, специфически изменяющих цвет жидких дифференциально­диагностических сред и образующих характерные колонии на элективных средах с лактозой, указывает на наличие бактерий і руппы кишечной палочки.

Навеску продукта массой 25 г от объединенной пробы вносят во флакон Сокслета, содержащий 100 см³ среды обогащения (Мюллера, Кауфмана, хлористомагниевой среды М). Жидкость во флаконе должна подняться до метки 125 см³. Флаконы тща­тельно встряхивают и помещают в термостат с температурой 37 С. Через 16—24 ч после тщательного перемешивания с по­мощью бактериологической петли (диаметр 0,4—0,5 мм) или па­стеровской пинетки проводят посев из среды обогащения в чашки Петри с предварительно подсушенной средой Эндо, БФА, Плос- кирева, Левина или висмут-сульфит-агар (по выбору).

Чашки с посевами помещают в термостат с температурой 37°С; посевы просматривают через 16—48 ч, на висмут-сульфит- агаре — через 24—48 ч.

На среде Эндо бактерии из рода сельмонелл образуют бес­цветные или с розовым оттенком колонии.

На среде БФА сальмонеллы образуют крупные, гладкие, крас­новатого оттенка прозрачные колонии (колонии сальмонеллы тифи суис, как и на среде Эндо — мелкие). Бактерии группы ки­шечной палочки образуют колонии желто-зеленоватого цвета. Бактерии группы протея дают рост через 72 ч.

На среде Плоскирева сальмонеллы растут в виде бесцветных колоний, но колонии более плотные и несколько меньшего разме­ра, чем на среде Эндо.

На среде Левина сальмонеллы растут в виде прозрачных, бледных, нежно-розовых или розовато-фиолетовых колоний.

На висмут-сульфитном агаре сальмонеллы растут в виде чер­ных или коричневых колоний с характерным металлическим блес­ком. При этом наблюдается прокрашивание в черный цвет участ­ка среды под колонией. Исключение составляют некоторые серо­логические типы из группы С, которые на этой среде растут в виде нежных светло-зеленых или крупных серовато-зеленых ко­лоний.

ГОСТ 9958—81 G 17

Изолированные колонии, характерные для бактерий из рода сальмонелл, пересевают на трехсахарный агар Крумвиде-Ольке­ницкого в модификации Ковальчука штрихом по скошенной по­верхности и уколом в столбик. Посевы помещают на 12—16 ч в термостат с температурой 37^СС.

При росте бактерий из рода сальмонелл цвет скошенной по­верхности среды Крумвиде-Олькеницкого в модификации Коваль­чука — розовый, столбик — желто-бурый; газообразование уста­навливают по наличию трещин и разрыву столбика агара, серо­водородообразующие — вызывают потемнение столбика.

Другие грамнегативные бактерии дают следующие изменения цвета среды:

бактерии группы кишечной палочки — вся среда окраши­вается в синий или сине-зеленый цвет с образованием газа или без него;

бактерии из группы протея — среда окрашивается в ярко- красный цвет, может образоваться черный осадок;

шигеллы и возбудители брюшного тифа — косяк окрашивает­ся в розовый цвет, столбик — в синий или сине-зеленый.

Допускается вместо среды Крумвиде-Олькеницкого в моди­фикации Ковальчука посев на углеводные среды в короткий пест­рый ряд, включая среды с глюкозой, лактозой, сахарозой, ман­нитом и мальтозой, полужидкий агар уколом (для определения подвижности) и бульон Хеттингера для определения образования индола и сероводорода.

Для дальнейшей идентификации бактерий готовят мазки, ко­торые окрашивают по Граму, микроскопируют и изучают серо­логические свойства микроорганизмов путем постановки пробной агглютинации на предметном стекле с агглютинирующей адсорби­рованной поливалентной сальмонеллезной О-сывороткой. При получении положительной реакции на стекле с поливалентной сывороткой проводят идентификацию с помощью монорецептор- ных агглютинирующих О-сывороток.

Установив серологическую группу, к которой относятся иссле­дуемые бактерии, с помощью Н-сывороток определяют тип бак­терий.

(Измененная редакция, Изм. № 1, 2),

Обнаружение подвижных (кроме S.pullorum и S.gallinarum) грамотрицательных палочек, дающих характерный рост на элек­тивных средах, неферментирующих лактозу и сахарозу, фермен­тирующих глюкозу и маннит с образованием кислоты и газа (S.typhi suis. не ферментирует маннит), дающих положительную реакцию агглютинации с мопорецепторными О- и Н-сальмонел- лезными сыворотками, указывает на наличие бактерий из рода сальмонелл.

_С

. 10 IWI УУЭІ—ОІ

4 А. Определение протея

Для подтверждения наличия протея в Н-форме 0,5 см³ анали­зируемой взвеси (приготовленной по п. 3.34) вносят в конденса­ционную воду свежескошенного мясо-пептонного агара, разлитого в широкие пробирки, не касаясь поверхности среды (метод Шу- кевича). Вертикально поставленные пробирки помещают в тер- мостят с температурой 37°С. Через 18—24 ч посевы просматрива­ют. Обращают внимание на образование ползучего вуалеобраз­ного налета с голубым оттенкомj на скошенном мясо-пептонном агаре культура поднимается из конденсационной жидкости вверх по поверхности среды. При появлении характерного роста микро­бов рода протея, микроскопируют окрашенные по Граму мазки и изучают подвижность микробов в раздавленной или висячей капле.

Для обнаружения нероящихся «О-форм» можно проводить посев на поверхность агара Плоскирева. «О-форма» протея ра­стет на этой среде в виде прозрачных колоний, слегка подщела­чивающих среду, окрашивая ее в желтый цвет. Делают пересев материала из подозрительных колоний в среду Крумвиде-Ольке- ницкого в модификации Ковальчука, где при наличии бактерий из группы протея среда окрашивается в ярко-красный цвет (вслед­ствие расщепления мочевины) и может образовываться черный осадок с возможным разрывом агарового столбика (вследствие образования сероводорода).