Расщепление прекращают нагреванием до температуры 85 °С. Фарш отделяют от смеси процеживанием через ткань. Добавлением гидроокиси натрия устанавливают рН (5,6±0,1). Смесь кипятят 5 мин. После охлаждения фильтруют через фильтровальную бумагу. Добавлением гидроокиси натрия устанавливают рН (7,4±0,1). Измеряют объем отвара и прибавляют к нему пептон из расчета 1,5 г на 100 см отвара и, если нужно, агар из расчета 1,5-2 г на 100 см отвара.


После растворения пептона и агара (при подогревании) вновь устанавливают рН (7,4±0,1). Бульон или агар разливают в колбы и стерилизуют при температуре (127±1) °С в течение 20 мин.


Для приготовления бульона с печенью кусочки вареной печени массой около 1-1,5 г вносят в пробирки и заливают бульоном до высоты 10-15 см. Стерилизуют при температуре (127±1) °С в течение 20 мин.


Применяют для мезофильных анаэробных микроорганизмов.


5.22. Дифференциальная улучшенная клостридиальная среда (жидкая, вязкая или плотная)


В 800 см дистиллированной воды вносят 10 г мясного экстракта (допускается заменять дистиллированную воду и мясной экстракт 800 см мясной воды), 10 г пептона, 1,5 г дрожжевого экстракта или 7,5 см раствора дрожжевого экстракта, 5 г уксуснокислого натрия. Отдельно 1 г растворимого крахмала вносят в небольшую порцию воды и при непрерывном помешивании переносят в кипящую воду, доводя объем до 200 см и получая крахмальный клейстер. Полученный клейстер смешивают с 800 см смеси, содержащей остальные компоненты, и кипятят на водяной бане в течение 30 мин. После кипячения к раствору добавляют 1 г глюкозы и 0,5 г цистеин гидрохлорида и доводят рН раствора до 7,1-7,2. Горячий раствор фильтруют через бумажный фильтр. Для приготовления вязкой среды в раствор добавляют 2 г агара на 1 дм среды, для приготовления плотной среды - 15-20 г агара на 1 дм среды. Среды стерилизуют в автоклаве при температуре (121±1) °С в течение 15 мин.


Растворы сульфита натрия Na SO ·7Н О концентрации 40 г/дм и цитрата железа FeC Н O ·5Н О с массовой концентрацией 70 г/дм (при приготовлении последнего раствор нагревают в течение 5 мин) стерилизуют фильтрованием и хранят раздельно при температуре 3-5 °С в полностью заполненных флаконах в течение не более 14 сут. Перед использованием основную среду регенерируют и охлаждают. Растворы, сульфита натрия и цитрата железа смешивают в равных объемах и асептически добавляют в охлажденную среду из расчета 0,5 см смеси на 25 см основной среды.


Применяют для культивирования мезофильных анаэробных микроорганизмов.


5.21, 5.22. (Измененная редакция, Изм. N 1).


5.23. Лакмусовое молоко


К стерильному молоку добавляют лакмусовую настойку до получения сиреневатого окрашивания (на 100 см молока примерно 1 см лакмусовой настойки). Лакмусовое молоко разливают по стерильным пробиркам высоким столбиком, кипятят на водяной бане в течение 15-20 мин и охлаждают для посева до температуры 45 °С.


Применяют для мезофильных клостридий при анализе молочных консервов и при культивировании С. perfringens.


5.24. Пептонная среда с глюкозой (глюкозо-пептонный бульон)


5 г глюкозы, 5 г пептона, 5 г фосфорнокислого однозамещенного калия вносят в 1 дм дистиллированной воды, нагревают до растворения всех ингредиентов, устанавливают рН 7,0-7,2 и разливают в пробирки по 5 см . Стерилизуют при температуре (121±1) °С в течение 15 мин.


Применяют для культивирования микроорганизмов и определения их способности образовывать ацетилметилкарбинол.


5.25. Печеночно-глицериновая среда


К 1 дм печеночного бульона добавляют 5 г глицерина, 5 г глюкозы, разливают в пробирки или флаконы с кусочками печени (20-30 г печени на 100 см среды), устанавливают рН (7,0±0,1) и стерилизуют при температуре (121±1) °С в течение 20 мин.


Применяют для культивирования мезофильных анаэробных микроорганизмов.


5.26. Плотная среда Бликфельдта


В 800 см дистиллированной воды растворяют 10 г лактозы, 10 г глюкозы, 5 г пептона, кипятят и фильтруют через бумажный фильтр. К фильтрату добавляют 40 г дрожжевого экстракта или 200 см раствора дрожжевого экстракта, 5 г углекислого кальция, растертого в ступке непосредственно перед употреблением, доводят рН до (7,3±0,1) и добавляют 15-20 г агара. Среду разливают в стерильные колбы, затем стерилизуют в автоклаве при температуре (117±1) °С не более 20 мин.


Применяют для культивирования молочнокислых бактерий.


(Измененная редакция, Изм. N 1).


5.27. Жидкая среда Бликфельдта


В 800 см дистиллированной воды растворяют 10 г лактозы, 10 г глюкозы, 5 г пептона, кипятят и фильтруют через бумажный фильтр. К фильтрату добавляют 4 г дрожжевого экстракта или 20 см раствора дрожжевого экстракта, 10 см раствора бромкрезолпурпура, устанавливают рН (7,3±0,1), разливают в стерильную посуду и стерилизуют при температуре (117±1) °С не более 20 мин.


Применяют для культивирования молочнокислых бактерий.


5.28. Среда Вильсона-Блера, измененная для анаэробов


Раствор железоаммонийных квасцов концентрации 50 г/дм и раствор сернистокислого натрия с массовой концентрацией 200 г/дм готовят на стерильной дистиллированной воде extempore. Раствор сернистокислого натрия стерилизуют текучим паром в течение 1 ч. К 100 см расплавленного и охлажденного до температуры 80 °С мясо-пептонного агара концентрации глюкозы 10 г/дм добавляют 10 см раствора сернистокислого натрия и 1 см раствора железоаммонийных квасцов. Устанавливают рН 7,5-7,8. Среду разливают по чашкам Петри и чашки подсушивают в термостате по ГОСТ 26670-91.


Применяют для культивирования мезофильных анаэробных микроорганизмов и определения их сульфитредуцирующей способности.


(Измененная редакция, Изм. N 1).


5.29. Среда Гисса


10 г пептона и 5 г хлористого натрия растворяют в 1 дм дистиллированной воды при нагревании, фильтруют через бумажный фильтр так, чтобы раствор был прозрачным, прибавляют 10 г углевода (глюкозы, лактозы, мальтозы, маннита или сахарозы) в зависимости от выявляемой микрофлоры.


Устанавливают рН 7,0-7,2, прибавляют 10 см раствора индикатора Андреде (п.4.6). При анализе для выявления аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов среду разливают по 5 см в стерильные пробирки с поплавками. Стерилизуют 20 мин при температуре (112±1) °С. Среда должна быть бесцветной или соломенно-желтого цвета без розового оттенка.


При выявлении анаэробных микроорганизмов в среду добавляют 1,5 агара, расплавляют при нагревании и разливают в пробирки по 12-13 см .


Применяют для определения сахаролитической способности микроорганизмов.


5.30. Среда из вареного мяса (Cocked-Meat Medium)


500 г свежего, освобожденного от костей, жира и сухожилий мяса или сердца крупного рогатого скота помещают в 500 см кипящей дистиллированной воды, содержащей 1,5 см раствора (NaOH)=1 моль/дм и кипятят в течение 20 мин; в конце кипячения в смесь добавляют молочную кислоту в количестве, необходимом для доведения рН смеси до (7,0±0,1). Горячую жидкость фильтруют через ватно-марлевый фильтр, к отфильтрованной жидкости добавляют пептон в количестве 0,5 г пептона на 100 см жидкости и хлористый натрий в количестве 0,25 г хлористого натрия на 100 см жидкости. Полученную жидкость вновь кипятят в течение 20 мин, добавляют в нее 1 см соляной кислоты и фильтруют. Доводят рН фильтрата до (8,2±0,1) и кипятят его в течение 3 мин.


После кипячения устанавливают рН 7,7-7,8. Кусочки мяса фасуют в пробирки до 2,5 г и заливают 10 см вышеприготовленной жидкости. Стерилизуют при температуре (121±1) °С в течение 20 мин. После стерилизации среда должна иметь рН 7,4-7,5. Для выделения С. botulinum и сахаролитических анаэробных микроорганизмов в среду добавляют раствор глюкозы из расчета содержания ее в среде 0,5-1,0%. На поверхность среды наслаивают голодный агар, вазелиновое масло или парафиновую смесь.


Применяют для культивирования анаэробных микроорганизмов.


(Измененная редакция, Изм. N 1).


5.31. Среда из сухого питательного агара


50 г порошка сухого питательного агара высыпают в 1 дм холодной водопроводной воды, тщательно перемешивают и кипятят на слабом огне 1-2 мин при помешивании до полного расплавления агара, не допуская пригорания в закрытом сосуде. Устанавливают рН среды 7,0-7,2. Расплавленный раствор фильтруют через вату, разливают в пробирки, флаконы или колбы и стерилизуют 20 мин при температуре (121±1) °С.


5.32. Среда из сухого питательного агара с глюкозой


В 975 см среды из сухого питательного агара непосредственно перед применением асептически добавляют 25 см стерильного раствора глюкозы концентрации 200 г/дм .


5.33. Среда из томатного сока


К 700 см воды добавляют 300 см томатного сока, 2 г дрожжевого экстракта или 10 см раствора дрожжевого экстракта, 10 г глюкозы, доводят рН 5,5-5,6, фильтруют, разливают по 100 см в стерильные колбы и стерилизуют в автоклаве при температуре (117±1) °С в течение 20 мин. Отдельно в 500 см дистиллированной воды растворяют при нагревании 20 г агара, разливают по 100 см в колбы и стерилизуют в автоклаве при температуре (121±1) °С в течение 20 мин. Перед посевом в асептических условиях смешивают 100 см жидкой среды со 100 см расплавленного агара. Агаризованную среду вносят в чашки, содержащие 0,25 г стерильного углекислого кальция.


Применяют для культивирования молочнокислых бактерий.


5.34. Среда Китт-Тароцци


Для приготовления среды Китт-Тароцци стерильные пробирки заполняют на 1,0-1,5 см кусочками печени, мяса или рыбы и заливают приготовленным мясо-пептонным бульоном с глюкозой и агаром. В 1 дм мясо-пептонного, рыбо-пептонного или печеночного бульона вносят 10 г глюкозы и 1,5 г агара, который при нагревании постепенно расплавляют (высота слоя бульона в обычных пробирках 12-13 см, в высоких 15-18 см) и стерилизуют 20 мин при температуре (121±1) °С. Требуемую величину рН проверяют до и после стерилизации. рН среды после стерилизации должно быть (7,1±0,1).


При приготовлении среды впрок вместо добавления к ней агара на поверхность среды перед стерилизацией в пробирки наслаивают 0,5-1,0 см вазелинового масла.


При применении среды Китт-Тароцци без добавления в нее агара или вазелинового масла на поверхность среды после окончания посева наслаивают голодный агар или парафиновую смесь высотой 1,0-1,5 см.


При посевах в свежеприготовленную среду Китт-Тароцци (не более 3 сут с момента приготовления) добавлять агар, вазелиновое масло или наслаивать на ее поверхность голодный агар не обязательно.


Применяют для культивирования мезофильных и термофильных анаэробных микроорганизмов.


5.35. Среда Китт-Тароцци с углекислым кальцием


В пробирки или флаконы, предназначенные для среды Тароцци, добавляют на дно щепотку углекислого кальция, стерилизуют горячим воздухом по ГОСТ 26668-85, закладывают в них кусочки мяса или печени и заливают мясо-пептонным бульоном с глюкозой, приготавливая среду Тароцци по вышеописанной технологии.


Применяют для анаэробных микроорганизмов, для посева кислотных консервированных продуктов.


5.36. Среда Китт-Тароцци с углекислым кальцием, дрожжевым экстрактом и аскорбиновой кислотой


Готовят среду Китт-Тароцци с углекислым кальцием, но в мясо-пептонный бульон перед фасовкой вносят 2 г дрожжевого экстракта или 10 см раствора дрожжевого экстракта. Перед анализом в регенерированную среду Китт-Тароцци с углекислым кальцием и дрожжевым экстрактом асептически вносят аскорбиновую кислоту из расчета 100 мкг на 1 дм среды.


Применяют для мезофильных и термофильных анаэробных микроорганизмов.


Для внесения аскорбиновой кислоты в среду раствор, приготовленный по п.4.10, разводят в стерильной дистиллированной воде в 100 раз и 0,2 см приготовленного раствора вносят на 1 дм среды.


(Измененная редакция, Изм. N 1).


5.37. Среда Мак-Кланг и Мак-Кой (модифицированная)


В 1 дм водопроводной воды добавляют 20 г порошкообразной печени, при отсутствии сухой порошкообразной печени применяют печеночную воду - 1 дм , но в этом случае водопроводная вода из среды исключается, 50 г кукурузной муки (белой или желтой), все хорошо размешивают, чтобы не было комков. Нагревают в течение 1 ч в текучем паре до полного растворения всех компонентов. Устанавливают рН 7,0-7,2, разливают и стерилизуют 1 ч при (121±1) °С.


Применяют для выявления мезофильных анаэробных и микроорганизмов при анализе консервов с рН 4,4 и ниже.


5.38. Пептонная среда с триптофаном


10 г пептона растворяют в небольшом количестве водопроводной воды, добавляют 5 г растворимого крахмала, предварительно растворенного в 50 см воды, и доводят объем водопроводной водой до 1 дм , устанавливают рН 6,7-6,8. Фильтруют через бумажный фильтр, добавляют 500 мкг триптофана, 5 г глюкозы, 20 г агара, нагревают до полного растворения агара и добавляют индикатор бромкрезол-пурпур и бромтимоловый синий (пп.4.7, 4.8). Разливают в стерильную посуду и стерилизуют 20 мин при температуре (116±1) °С.


5.39. Среда Роберта


В 1 дм дистиллированной воды вносят 2 г азотнокислого калия, 2 г двузамещенного фосфорнокислого калия, 1 г агара, 30 г желатина, дают набухнуть желатину и нагревают на водяной бане до полного растворения желатина и агара, добавляют 25 см стерильного мясо-пептонного бульона и 10 см раствора 2, 3, 5-трифенилтетразолиум хлорида концентрации 10 г/дм , устанавливают рН (7,1±0,1), стерилизуют 3 сут подряд при температуре (100±1) °С в течение 20 мин или однократно при температуре (110±1) °С в течение 15 мин. Среда должна быть бесцветной.


Применяют для культивирования С. perfringens.


5.40. Среда Сабуро


В 1 дм горячей дистиллированной воды растворяют 10 г пептона и 40 г глюкозы или мальтозы, разливают в стерильную посуду и стерилизуют 20 мин при температуре (112±1) °С.


Применяют для дрожжей и плесневых грибов.