---

После тщательного перемешивания приготовленную среду разливают в чашки Петри. Чашки со средой можно хранить не более 48 ч.

Применяют для культивирования стафилококков.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

5.2. Желточный агар с ТТХ

К 500 см стерильного мясо-пептонного агара, расплавленного и затем охлажденного до температуры 45 °С, прибавляют 20 см желточной эмульсии и 25 мг 2, 3, 5-трифенилтетразолиум хлорида. Смесь тщательно перемешивают и разливают в чашки Петри, хранят в холодильнике не более 10 сут.

Применяют для культивирования Вас. cereus.

5.3. Капустный агар

200 г размельченной свежей капусты добавляют в 1 дм водопроводной воды, смесь доводят до кипения, кипятят в течение 10-14 мин. Фильтруют через ватно-марлевый фильтр. Полученный фильтрат разводят водой в два раза, добавляют к нему 20 г глюкозы, 10 г пептона, 10 г углекислого кальция расплавляют в нем при нагревании 15-20 г агара. Устанавливают рН среды 7,0-7,4, разливают в стерильные колбы. Стерилизуют 20 мин при температуре (121±1) °С.

5.4. Молочно-солевой агар

Непосредственно перед посевом к 1 дм расплавленного и охлажденного до температуры 60-70 °С мясо-пептонного агара, содержащего 65 г хлористого натрия, добавляют 100 см стерильного обезжиренного молока. Устанавливают рН (7,4±0,1), тщательно перемешивают и разливают в чашки Петри.

Применяют для культивирования стафилококков.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

5.5. Печеночный агар

К 500 см печеночной воды доливают 500 см водопроводной воды, добавляют 10 г пептона, 5 г хлористого натрия и 20-30 г агара. Среду кипятят на слабом огне до растворения агара, устанавливают рН 6,8-7,0, разливают в пробирки или флаконы и стерилизуют при температуре (121±1) °С в течение 20 мин.

Применяют для культивирования мезофильных анаэробных микроорганизмов.

5.6. Сахарный кровяной агар по Цейсслеру

К 100 см расплавленного и охлажденного до температуры 50 °С мясо-пептонного агара добавляют 10 см раствора глюкозы концентрации 200 г/дм и 15-20 см свежевзятой стерильной дефибринированной крови крупного рогатого скота, лошадей, овец. Смесь осторожно взбалтывают, избегая образования пены и пузырей и разливают по чашкам Петри, среду подсушивают по ГОСТ 26670-91 и хранят не более 2 сут при температуре (4±1) °С. Среда должна иметь рН 7,2-7,4.

Применяют для определения гемолитической активности микроорганизмов.

5.7. Яично-желточно-азидный агар

10 г пептона, 3 г хлористого натрия, 0,2 г двузамещенного фосфорнокислого натрия, 15 г агара, 5,5 г мясного экстракта растворяют при подогревании в 1 дм дистиллированной воды. При отсутствии мясного экстракта используют мясную воду. В этом случае все компоненты растворяют в 1 дм мясной воды. Устанавливают рН среды (7,6±0,1), стерилизуют при температуре (121±1) °С в течение 30 мин, охлаждают до температуры 50-60 °С, добавляют 0,15 г азида натрия, смешивают, вновь стерилизуют при температуре (121±1) °С в течение 30 мин, охлаждают до температуры 50 °С, добавляют 150 см яично-желточной взвеси, смешивают и разливают по 15 см в чашки Петри.

Применяют для культивирования стафилококков.

5.8. Яично-желточно-солевой агар

1 дм мясо-пептонного агара перед анализом расплавляют и растворяют в нем 95 г хлористого натрия, охлаждают до температуры (45±1) °С и добавляют 100 см яично-желточной взвеси. Смесь тщательно перемешивают и разливают в чашки Петри. Чашки хранят в холодильнике не более 5 сут.

Применяют для культивирования стафилококков.

5.7; 5.8. (Измененная редакция, Изм. N 1).

5.9. Глюкозо-триптонный (агар) бульон

К 1 дм дистиллированной воды добавляют 5 г триптона, 2,5 г дрожжевого экстракта или 12,5 см раствора дрожжевого экстракта и при приготовлении плотных сред 12-15 г агара кипятят до полного растворения, фильтруют, охлаждают до температуры 50-60 °С, доводят рH до (7,0±0,1), добавляют 1 г глюкозы и в среду для термофилов 0,04 г бромкрезолпурпура, фасуют в колбы (плотную среду) или в пробирки (жидкую среду) и стерилизуют в автоклаве при температуре (121±1) °С в течение 15 мин.

Применяют для культивирования мезофильных и кислотообразующих термофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов.

5.10. Картофельно-пептонный (агар) бульон

200 г очищенного и нарезанного кусочками картофеля заливают 1 дм водопроводной воды, кипятят 15-20 мин, не допуская разваривания клубней, фильтруют через ватно-марлевый фильтр и доводят объем фильтрата до первоначального. В фильтрате растворяют 5 г пептона, 5 г хлористого натрия и расплавляют при нагревании 15-20 г агара. Устанавливают рН 7,0-7,2. Разливают в колбы и пробирки и стерилизуют при температуре (125±1) °С в течение 30 мин. Рекомендуется контролировать стерильность среды, термостатируя ее при (55±1) °С в течение 48 ч.

Применяют для культивирования термофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов.

5.11. Кислый протеозо-пептонный (агар) бульон

5 г пептона, 500 мкг триптофана, 5 г глюкозы, 4 г двузамещенного фосфорнокислого калия растворяют при подогревании в 500 см дистиллированной воды и добавляют 135 см раствора дрожжевого экстракта. Устанавливают рН среды (5,0±0,1). Смесь разливают в колбы по 50 см . В отдельную колбу к 500 см дистиллированной воды добавляют 20 г агара и нагревают при (100±1) °С до его растворения. Оба раствора стерилизуют 20 мин при температуре (121±1) °С. Перед посевом агар расплавляют, охлаждают до (50±1) °С, смешивают с таким же объемом среды и заливают посевы на чашках.

Применяют для культивирования термофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов.

5.12. Мясо-пептонный (агар) бульон

10 г пептона и 5 г хлористого натрия добавляют к 1 дм мясной воды. Устанавливают рН 7,0-7,2, кипятят, фильтруют через бумажный фильтр. Стерилизуют при температуре (121+1) °С в течение 20 мин. При выпадении осадка в мясо-пептонном бульоне его вторично фильтруют с последующей стерилизацией.

Для приготовления мясо-пептонного агара в 1 дм мясо-пептонного бульона перед стерилизацией добавляют 15-20 г агара и кипятят на слабом огне при постоянном помешивании до полного растворения агара. Устанавливают рН 7,0-7,2, разливают в пробирки или флаконы и стерилизуют при температуре (121±1) °С в течение 20 мин.

Применяют для культивирования мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов.

5.13. Мясо-пептонный (агар) бульон с глюкозой

К 1 дм мясо-пептонного бульона (агара) перед стерилизацией добавляют 1 г или 10 г глюкозы, устанавливают рН 7,0-7,2 и стерилизуют при температуре (121±1) °С в течение 20 мин.

Применяют для культивирования мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов и для определения общего количества микроорганизмов подсчетом на чашках Петри.

5.14. Мясо-пептонный (агар) бульон с глюкозой и дрожжевым экстрактом

К 1 дм мясо-пептонного (агара) бульона с глюкозой добавляют асептически 2 г дрожжевого экстракта или 10 см раствора дрожжевого экстракта.

Применяют для культивирования аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов.

5.15. Мясо-пептонный бульон с растворимым крахмалом

10 г крахмала добавляют в небольшую порцию воды и при помешивании вносят в кипящую дистиллированную воду, получая 100 см крахмального раствора. Полученный раствор смешивают с 900 см мясо-пептонного бульона, содержащего триптофан (положительная качественная реакция на триптофан) и стерилизуют при температуре (121±1) °С в течение 20 мин. Среда должна иметь рН (7,1±0,1).

Применяют для культивирования кислотообразующих термофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов.

5.16. Мясо-пептонный бульон с углекислым кальцием

В пробирки разливают по 5-6 см мясо-пептонного бульона с раствором глюкозы концентрации 10 г/дм , добавляют 0,1 г стерильного углекислого кальция. Во флаконы со 100 см среды добавляют 2 г углекислого кальция и стерилизуют при температуре (121±1) °С в течение 20 мин.

Применяют для культивирования мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов при анализе кислотных консервированных продуктов.

5.17. Мясо-пептонный бульон с нитратами

К 100 см мясо-пептонного бульона, свободного от нитритов (проверяют йодкрахмальным реактивом по п.4.30, при наличии нитритов появляется слабо-розовое окрашивание), добавляют 0,2 г свободной от нитритов калийной селитры. Разливают среду по 5 см в пробирки, промытые дистиллированной водой не менее пяти раз.

При анализе на выявление анаэробных микроорганизмов в среду вводят 1,5 г агара, растворяют его при нагревании, среду разливают в пробирки по 10 см . Стерилизацию проводят 15 мин при (121±1) °С.

Применяют для определения нитратредуцирующей способности микроорганизмов.

5.18. Рыбо-пептонный бульон

Рыбу, освобожденную от костей и жира, пропускают через мясорубку и заливают холодной водопроводной водой из расчета 1 дм воды на 500 г рыбы. Смесь фарша с водой медленно нагревают до кипения и кипятят в течение 1,5 ч. Небольшое количество (до 5 дм ) можно кипятить на открытом огне, часто помешивая, чтобы не произошло пригорания частичек рыбы. Большое количество лучше кипятить в котлах с паровой рубашкой. Для определения готовности рыбной воды сначала фильтруют небольшое количество ее в пробирку через бумажный фильтр. Если жидкость прозрачная, рыбная вода готова. Затем жидкость отцеживают через полотно, сюда же отжимают весь сок из вареной рыбы, добавляют кипяченой воды до первоначального объема и разливают.

Для приготовления рыбо-пептонного бульона к 1 дм полученной рыбной воды добавляют 10 г пептона, 5 г хлористого натрия. Устанавливают рН 7,0-7,2. Стерилизуют при (121±1) °С 20 мин.

5.19. Рыбо-пептонный бульон с глюкозой

К 1 дм рыбо-пептонного бульона перед стерилизацией добавляют 10 г глюкозы. Стерилизуют при температуре (121±1) °С в течение 20 мин.

5.20. Бульон Хоттингера и среды, его содержащие

5.20.1. Для приготовления основного раствора Хоттингера в 1 дм кипящей воды на 20 мин опускают 1 кг мяса, нарезанного мелкими кусочками, затем мясо вынимают, измельчают на мясорубке и снова кладут в тот же отвар. Добавляют 30-40 г измельченной поджелудочной железы (вместо поджелудочной железы можно брать 3-5 г панкреатина) и 20 см хлороформа. Бутылки плотно закрывают пробкой и энергично встряхивают (пробку надо придерживать), ставят в термостат при температуре 37 °С на 3-4 ч. Мясо в виде мелкозернистой массы осаждается на дно бутыли. Жидкость над мясом должна быть прозрачной. Жидкость сливают, фильтруют и стерилизуют при температуре (121±1) °С в течение 20 мин. Готовый раствор должен давать положительную реакцию на триптофан (розовое окрашивание при прибавлении двух капель бромной воды в пробирку с пробой).

5.20.2. Для приготовления бульона Хоттингера смешивают 200 см основного раствора Хоттингера, 400 см мясного отвара и 400 см воды, добавляют 5 г хлористого натрия, 0,2 г фосфорнокислого двузамещенного натрия или фосфорнокислого двузамещенного калия, кипятят 10 мин и устанавливают рН (7,6±0,1). Бульон Хоттингера разливают высоким столбиком по пробиркам или флаконам, на дно которых кладут кусочки вареного мяса или фарша, наслаивают стерильное вазелиновое масло высотой около 2,0 см и стерилизуют при температуре (121±1) °С в течение 20 мин.

5.20.3. Для приготовления плотной среды Хоттингера с триптоном, глюкозой и дрожжевым экстрактом в 1 дм бульона Хоттингера вносят 0,5 г дрожжевого экстракта или 2,5 см раствора дрожжевого экстракта, 5 г глюкозы, 5 г триптона, 15-20 г агара, устанавливают рН среды (7,1±0,1) и стерилизуют ее при температуре (121±1) °С в течение 20 мин. Перед употреблением в расплавленную стерильную среду асептически вносят 0,6 г аскорбиновой кислоты.

5.20.4. Плотную среду Хоттингера с глюкозой и дрожжевым экстрактом приготовляют по п.5.19.3, но без триптона и аскорбиновой кислоты.

5.20.5. Бульон Хоттингера и плотную среду Хоттингера с триптоном, глюкозой и дрожжевым экстрактом применяют для культивирования мезофильных анаэробных микроорганизмов; плотную среду Хоттингера с глюкозой и дрожжевым экстрактом - для культивирования мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов.

5.21. Бульон (агар) с печенью

2 кг говядины, очищенной от жира, сухожилий и пленок и пропущенной через мясорубку, смешивают с 500 г фарша из печени и 9 дм воды в эмалированной посуде. Нагревают до температуры 50 °С и прибавляют 100 см раствора соляной кислоты концентрации 42,7 г/дм (для приготовления 100 см раствора соляной кислоты концентрации 42,7 г/дм в мерную колбу вместимостью 100 см наливают 50-70 см дистиллированной воды, затем прибавляют 10 см концентрированной соляной кислоты с плотностью =1,18 г/см , раствор доливают до метки дистиллированной водой. При использовании концентрированной соляной кислоты с другой плотностью делают пересчет на требуемую концентрацию 42,7 г/дм ).

Количество пепсина, прибавляемого к смеси мяса, печени и воды определяется его титром, но прибавляют его на 50% больше, чем подсчитано. Например, при титре пепсина 1:10 для расщепления 2,5 кг белка требуется 0,25 г пепсина: в действительности же его прибавляют 0,375 г.

Пепсин оставляют действовать на смесь в течение 20 ч при температуре 50 °С в водяной бане. После 20 ч воздействия пепсина на смесь она должна давать положительную биуретовую реакцию и реакцию на триптофан.

Биуретовую реакцию проверяют с 5 см надосадочного слоя расщепленной смеси, в которую вносят для небольшого подщелачивания 1-2 капли раствора гидроокиси натрия концентрации 2 г/дм и прибавляют несколько капель раствора сернокислой (окисной) меди концентрации 10 г/дм .

При положительной реакции образуется фиолетовая окраска. Реакцию на триптофан устанавливают с бромной водой (п.5.20.1).