4.6.2.4 Приготовление раствора В
Пипеткой отбирают 25 см раствора Б, приготовленного по 4.6.2.3, и переносят в мерную колбу с пришлифованной пробкой вместимостью 50 см . Доводят объем раствора в колбе до метки дистиллированной водой, колбу закрывают пробкой и тщательно перемешивают.
Массовую концентрацию каждого компонента полученного раствора В , г/дм , определяют по формуле
, (7)
где - массовая доля синтетического красителя в растворе Б по 4.6.2.3, г/дм ;
2 - коэффициент разведения.
Полученные растворы Б и В используют в качестве реперов (свидетелей).
4.6.3 Определение состава синтетического красителя
На хроматографическую пластину, подготовленную по 4.5.4, шириной от 6,5 до 7,0 см, микрошприцем наносят от 0,3 до 1,0 мм растворов реперов (раствор Б и раствор В) и анализируемого раствора синтетического красителя по 4.5.2.1 или 4.5.2.2. Все растворы наносят на пластину в одинаковой пропорции. Пластину подсушивают в течение 3-4 мин и пинцетом помещают в хроматографическую камеру, заполненную элюентом. Элюент выбирают в соответствии с 4.6.1 и таблицей 1. Камеру плотно закрывают. Элюирование заканчивают при достижении границы элюента - высоты 7,0 см от линии старта. По окончании элюирования хроматографическую пластину вынимают и подсушивают.
4.6.4 Обработка результатов
Измеряют линейкой по ГОСТ 427 расстояние от центра каждого пятна анализируемого синтетического красителя и границы элюента до линии старта.
Вычисляют значение по формуле
, (8)
где - расстояние до линии старта от центра пятна синтетического красителя, см;
- расстояние до линии старта от границы элюента (проявителя), см.
Сравнивая цвет пятен и значения каждого синтетического красителя анализируемого раствора со значениями реперов, идентифицируют анализируемые синтетические красители, присутствующие в анализируемой алкогольной продукции. При отсутствии разделения пятен синтетических красителей на хроматограмме анализ повторяют, используя элюент 2 или элюент 3.
5 Денситометрический метод определения массовой доли синтетических красителей в тонком слое сорбента
Метод предназначен для количественного определения в алкогольной продукции пищевых азокрасителей (основных красящих веществ): тартразина Е102, желтого "солнечный закат" Е110, азорубина Е122, амаранта Е123, понсо 4R E124, красного очаровательного AC E129, черного блестящего PN E151.
5.1 Сущность метода
Метод основан на сорбции синтетических красителей из анализируемой алкогольной продукции твердыми сорбентами, десорбции аммиаком, удалении аммиака выпариванием, хроматографировании в тонком слое сорбента (ТСХ) и определении массовой доли синтетических красителей методом количественной оптической денситометрии.
Допускается использование других способов, обеспечивающих получение значений плотности окрашивания в пятне на пластине ТСХ с заданной погрешностью измерений.
В качестве реперов (свидетелей) используют стандартных синтетических красителей (раствор Б и раствор В, приготовленные по 4.6.2.3 и 4.6.2.4).
5.2 Условия проведения анализа
При подготовке и проведении измерения должны быть соблюдены следующие условия:
|
|
температура окружающего воздуха |
от 15 °С до 25 °С |
|
|
атмосферное давление |
от 84,0 до 106,7 кПа |
|
|
относительная влажность воздуха |
от 30% до 80% |
|
|
напряжение в электросети |
220 % В |
|
|
частота тока в электросети |
от 49 до 51 Гц |
Помещение, где проводят работы с реактивами, должно быть обеспечено приточно-вытяжной вентиляцией.
Все операции с реактивами следует проводить в вытяжном шкафу.
5.3 Средства измерений, вспомогательное оборудование, реактивы и материалы
Для проведения анализа следует использовать средства измерений, вспомогательное оборудование, реактивы и материалы по 4.3, за исключением стандартных синтетических красителей N 2, 4, 8, 11-18 (приложение А), а также:
- оптический денситометр, работающий в диапазоне длин волн от 400 до 800 нм, с чувствительностью по каждому измеряемому синтетическому красителю в алкогольной продукции не ниже 0,012 г/дм ;
- детектор - черно-белую малогабаритную видеокамеру или аналогичную цветную с чувствительностью не хуже 0,02 лк, с ручной фокусировкой и ручной регулировкой диафрагмы, либо цветной сканер с разрешением от 200 dpi и выше с интерфейсом, соответствующим TWAIN стандарту;
- компьютер с операционной системой Microsoft Windows 2000 или Microsoft Windows XP, специальным программным обеспечением по обработке тонкослойных хроматограмм;
- блок ввода изображения.
Допускается применение других средств измерений и вспомогательного оборудования, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам и обеспечивающих необходимую точность измерения, а также реактивов по качеству не хуже вышеуказанных.
5.4 Приготовление реактивов
Приготовление реактивов - по 4.4.
5.5 Подготовка к анализу
Подготовка к анализу - по 4.5.
5.6 Проведение анализа
5.6.1 Предварительная оценка состава анализируемого синтетического красителя - по 4.6.1.
5.6.2 Приготовление смесевых стандартных синтетических красителей - по 4.6.2.
5.6.3 Определение состава синтетического красителя - по 4.6.3.
5.6.4 Проведение измерений
Измерения , и массовых долей синтетических красителей проводят с помощью денситометра. При проведении измерений массовую долю каждого синтетического красителя определяют по объему пятна, учитывающему площадь пятна и его интенсивность.
Значения массовых концентраций каждого синтетического красителя , в растворах реперов (свидетелей) стандартных синтетических красителей и анализируемого синтетического красителя вводят в программу компьютерной обработки. Массовую концентрацию анализируемого синтетического красителя обозначают . Получают результат измерения в диапазоне значений массовых концентраций синтетического красителя в анализируемой алкогольной продукции от 0,012 до 0,25 г/дм . Пример количественного определения синтетического красителя приведен в приложении В.
В случае превышения массовой доли синтетического красителя в анализируемом растворе диапазона измерения необходимо разбавить раствор до концентрации, соответствующей указанному диапазону. При вычислении массовой доли синтетического красителя необходимо учесть коэффициент разбавления.
5.7 Обработка результатов
Массовую долю синтетического красителя в анализируемой алкогольной продукции , г/кг, рассчитывают по формуле
(9)
или
, (10)
где - количество анализируемого синтетического красителя в пятне пластины ТСХ (выходной сигнал денситометра), мкг;
- коэффициент пересчета, мкг в г;
- объем анализируемого раствора синтетического красителя, полученного по 4.5.2.1.4 или 4.5.2.2.3, см ;
- объем анализируемого раствора синтетического красителя, нанесенного на пластину ТСХ по 4.6.3, мм ;
- коэффициент пересчета мм в см ;
- масса пробы анализируемой алкогольной продукции, взятой для анализа по 4.5.2.1.1 или 4.5.2.2.2, г, ( =25 г);
- коэффициент пересчета г в кг.
За окончательный результат анализа принимают среднеарифметическое значение результатов трех параллельных определений.
5.8 Контроль точности результатов анализа
5.8.1 Полноту сорбции синтетического красителя из анализируемой алкогольной продукции, обуславливающей систематическую составляющую погрешности, контролируют визуально.
5.8.2 Оперативный контроль точности результатов анализа
За результат анализа принимают среднеарифметическое значение , г/кг, трех параллельных определений, допустимое расхождение между которыми не должно превышать нормативов оперативного контроля: сходимости , воспроизводимости , погрешности , значения которых приведены в таблице 2.
Таблица 2 - Нормативы оперативного контроля стандартных синтетических красителей
|
Диапазон измеряемой массовой доли стандартного синтетического красителя, г/кг |
Нормативы оперативного контроля, % |
||
|
|
Сходимость =3 при =0,95 |
Воспроизводимость =2 при =0,95 |
Погрешность при =0,95 |
|
0,012-0,250 |
10,0 |
15,0 |
8,4 |
5.8.3 Контроль сходимости результатов анализа
Контроль сходимости результатов анализа проводят при каждом определении сравнением результатов =3 параллельных определений массовой доли синтетического красителя в одной и той же пробе алкогольной продукции, выполненных по 5.6 одним и тем же исполнителем на одном и том же приборе.
Результат контроля считают положительным, если выполняется условие
, (11)
где - максимальная массовая доля синтетического красителя, г/кг;
- минимальная массовая доля синтетического красителя, г/кг;
- среднее значение массовой доли синтетического красителя, г/кг.
Если условие (11) не выполняется, контроль повторяют. При получении повторного отрицательного результата выясняют и устраняют его причины.
5.8.4 Контроль воспроизводимости результатов анализа
Контроль воспроизводимости результатов анализа проводят, сравнивая результаты =2 определений массовой доли синтетического красителя в одной и той же пробе алкогольной продукции, выполненных по 5.6 разными исполнителями или одним и тем же исполнителем, но с использованием разных приборов.
Результат контроля считают положительным, если выполняется условие
, (12)
где - максимальная массовая доля синтетического красителя, г/кг;
- минимальная массовая доля синтетического красителя, г/кг;
- среднее значение массовой доли синтетического красителя, г/кг.
Если условие (12) не выполняется, контроль повторяют. При получении повторного отрицательного результата выясняют и устраняют его причины.
5.8.5 Контроль погрешности
Контроль погрешности проводят по 5.6 с использованием стандартных красителей по 4.5.1.
Результат контроля считают положительным, если выполняется условие
, (13)
где - массовая доля синтетического красителя в стандартного синтетического красителя, г/кг;
- полученное в результате анализа значение массовой доли синтетического красителя в стандартного синтетического красителя, г/кг.
6 Спектрофотометрический метод определения массовой доли синтетических красителей
Метод предназначен для количественного определения в алкогольной продукции индивидуальных синтетических красителей (основных красящих веществ) в соответствии с таблицей 3 и некоторых смесевых синтетических красителей, в состав которых входят индивидуальные синтетические красители, имеющие спектры, не перекрывающие друг друга.
6.1 Сущность метода
Метод основан на сорбции синтетических красителей из анализируемой алкогольной продукции твердыми сорбентами, десорбции аммиаком, удалении аммиака выпариванием и определении массовой доли синтетических красителей по интенсивности окраски полученного раствора методом спектрофотометрии при характеристической длине волны.
6.2 Условия проведения анализа
Подготовка и проведение анализа - в соответствии с 4.2.
6.3 Средства измерений, вспомогательное оборудование, реактивы и материалы
Для проведения анализа следует использовать средства измерений, вспомогательное оборудование, реактивы и материалы по 4.3, а также:
