---

    

    4.4.2.4 Приготовление элюента 4

    

    В мерную колбу (с пришлифованной пробкой) по ГОСТ 1770 вместимостью 100 см пипеткой вносят 5 см водного аммиака (4.3.30) и доводят объем раствора до метки метанолом по ГОСТ 6995. Колбу закрывают пробкой и тщательно перемешивают.

    

    Элюенты (проявители) готовят за 1 ч до начала анализа.

    

    4.5 Подготовка к анализу

    

    4.5.1 Приготовление стандартных синтетических красителей

    

    4.5.1.1 В необходимое число стаканов по ГОСТ 25336 вместимостью 50 см каждый взвешивают на лабораторных весах по ГОСТ 24104 с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания ±0,1 мг навески стандартных синтетических красителей с погрешностью не более 0,0001 г.

    

    Массу навески стандартного синтетического красителя , г, рассчитывают с учетом массовой доли основного красящего вещества в навеске по формуле

    

,                                                                               (1)

    

где 0,25 - масса основного красящего вещества, содержащегося в навеске стандартного синтетического красителя, г;

    

    100 - коэффициент пересчета;

    

    - массовая доля основного красящего вещества в навеске стандартного синтетического красителя, %.

    

    Массовую долю основного красящего вещества в навеске стандартного синтетического красителя определяют в соответствии с приложением Б.

    

    4.5.1.2 В каждый стакан с навеской стандартного синтетического красителя, приготовленного по 4.5.1.1, прибавляют 20 см дистиллированной воды и перемешивают стеклянной палочкой по 4.3.17 до полного растворения. Для интенсификации растворения допускается нагревание раствора в стакане на водяной бане до температуры не более 90 °С. Затем раствор охлаждают до 20 °С, переносят в мерную колбу (с пришлифованной пробкой) вместимостью 100 см , доводят объем раствора в колбе до метки дистиллированной водой, закрывают колбу пробкой и тщательно перемешивают.

    

    4.5.1.3 Полученный раствор стандартного синтетического красителя имеет массовую концентрацию основного красящего вещества , г/дм , определяемую по формуле

    

                                                    (2)

    

или

    

                                                                  (3)

    

где 0,25 - масса основного красящего вещества, содержащегося в навеске стандартного синтетического красителя, г;

    

     - объем раствора стандартного синтетического красителя, см ( =100 см );

    

     - коэффициент пересчета см в дм .

    

    Раствор стандартного синтетического красителя хранят в склянке из темного стекла с завинчивающейся пробкой при комнатной температуре.

    

    Срок хранения стандартных синтетических красителей - 6 мес.

    

    4.5.2 Извлечение синтетических красителей из анализируемой алкогольной продукции

    

    4.5.2.1 Извлечение синтетических красителей методом твердофазной экстракции

    

    4.5.2.1.1 Приготовление анализируемого раствора алкогольной продукции

    

    В стакане вместимостью 50 см взвешивают на лабораторных весах с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания ±100 мг 25 г анализируемой алкогольной продукции с погрешностью не более 0,1 г. Затем пипеткой по ГОСТ 29169 в стакан добавляют 1 см ледяной уксусной кислоты по ГОСТ 61. Стакан помещают на водяную баню, предварительно нагретую до температуры 80 °С - 90 °С, и выдерживают в течение 5-6 мин.

    

   4.5.2.1.2 Подготовка патрона для твердофазной экстракции

    

    Медицинским шприцем по 4.3.5 набирают 10-20 см дистиллированной воды, соединяют шприц с патроном для твердофазной экстракции по 4.3.2, заполненным сорбентом (оксидом алюминия по 4.3.31). Патрон промывают со скоростью от 10 до 20 капель дистиллированной воды в минуту. Объем пропускаемой через патрон дистиллированной воды должен быть не менее 30 см . После этого патрон промывают один раз 25 см раствора ледяной уксусной кислоты массовой концентрацией 10 г/дм по 4.3.26. Затем патрон отсоединяют от шприца.

    

    4.5.2.1.3 Сорбция синтетических красителей из анализируемой алкогольной продукции

    

    Медицинским шприцем набирают 10-20 см анализируемого раствора алкогольной продукции, приготовленного по 4.5.2.1.1, и соединяют шприц с патроном. Пропускают анализируемый раствор через патрон по одной капле со скоростью от 10 до 20 капель в минуту. При появлении на выходе из патрона окрашенного анализируемого раствора его пропускают через второй патрон. При необходимости используют 1-5 патронов, подготовленных по 4.5.2.1.2, до достижения полноты сорбции синтетического красителя. После этого промывают каждый патрон с сорбированным синтетическим красителем 25 см раствора ледяной уксусной кислоты массовой концентрации 10 г/дм .

    

    4.5.2.1.4 Десорбция синтетических красителей из патронов водным аммиаком

    

    Медицинским шприцем набирают 10-20 см водного аммиака (4.3.30) и соединяют шприц с патроном. Пропускают водный аммиак через патрон по одной капле со скоростью от 10 до 20 капель в минуту. При необходимости промывание патрона водным аммиаком повторяют до полного обесцвечивания сорбента (оксида алюминия) в патроне. Элюат (раствор водного аммиака, пропущенный через патрон) собирают в выпарную чашку по 4.3.14 и выпаривают досуха на водяной бане с температурой от 80 °С до 90 °С. После этого чашку с сухим остатком (синтетическим красителем) охлаждают. Охлажденный синтетический краситель растворяют в чашке от 0,5 см до 1,0 см с дистиллированной водой.

    

    4.5.2.2 Извлечение синтетических красителей методом колоночной хроматографии

    

    4.5.2.2.1 Подготовка хроматографической колонки

    

    В стакане по ГОСТ 25336 вместимостью 400 см взвешивают на лабораторных весах с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания ±100 мг 20 г целлюлозы. Затем в стакан прибавляют 200 см раствора сульфата аммония по ГОСТ 3769 (4.3.35) и взбалтывают. Дают смеси отстояться и декантируют жидкость (сливают с отстоявшегося осадка). Повторяют промывание целлюлозы с декантацией жидкости от 3 до 5 раз. В стакан с промытой целлюлозой добавляют 100 см раствора сульфата аммония и переносят суспензию в хроматографическую колонку по 4.3.15. После прохождения жидкости содержимое колонки промывают вторично 100 см раствора сульфата аммония.

    

    4.5.2.2.2 Сорбция синтетических красителей из анализируемой алкогольной продукции

    

    В стакан вместимостью 50 см взвешивают на лабораторных весах с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания ±100 мг 25 г анализируемой алкогольной продукции с погрешностью не более 0,1 г. Навеску анализируемой алкогольной продукции переносят в хроматографическую колонку порциями по 5 см и пропускают через нее со скоростью 2 см /мин.

    

    4.5.2.2.3 Десорбция синтетических красителей

    

    После прохождения навески анализируемой алкогольной продукции через хроматографическую колонку по 4.5.2.2.2 в колонку вносят порциями по 5 см элюент 4, приготовленный по 4.4.2.4. Элюент 4 пропускают через колонку со скоростью 2 см /мин до полного обесцвечивания целлюлозы. Элюат (раствор элюента 4, пропущенный через патрон) собирают в коническую колбу с пришлифованной пробкой вместимостью 250 см . Элюат переносят в чашку и выпаривают досуха на водяной бане с температурой от 80 °С до 90 °С. После этого чашку с сухим остатком (синтетическим красителем) охлаждают. Охлажденный синтетический краситель растворяют в чашке от 0,5 см до 1,0 см дистиллированной воды.

    

    4.5.3 Подготовка хроматографической камеры

    

    В хроматографическую камеру по 4.3.4 вносят элюент 1, приготовленный по 4.4.2.1, в количестве, необходимом для погружения хроматографической пластины в камере на глубину не более 0,5 см от нижнего края пластины. Камеру плотно закрывают.

    

    4.5.4 Подготовка пластин для ТСХ анализа

    

    На линию старта хроматографической пластины по 4.3.3, расположенную на расстоянии 1 см от края пластины, карандашом наносят точки с интервалом не менее 1 см.

    

    4.6 Проведение анализа

    

    4.6.1 Предварительная оценка состава синтетического красителя анализируемой алкогольной продукции

    

    Пластину, подготовленную по 4.5.4, разрезают на две части на расстоянии от 3,0 до 3,5 см от боковой стороны пластины перпендикулярно к линии старта.

    

    На линию старта подготовленной хроматографической пластины шириной от 3,0 до 3,5 см микрошприцем по 4.3.7 наносят от 0,3 до 1,0 мм раствора, полученного по 4.5.2.1 или 4.5.2.2. Пластину подсушивают в течение 3-4 мин и затем пинцетом по 4.3.23 погружают в раствор элюента 1 на глубину не более 0,5 см от нижнего края пластины под углом примерно 45°. Камеру плотно закрывают. Элюирование заканчивают при достижении границы элюента 1 - высоты 7,0 см от линии старта. По окончании элюирования пластину вынимают и подсушивают.

    

    Предварительную оценку состава анализируемого синтетического красителя проводят на основе визуальной оценки цвета пятен и значений анализируемых синтетических красителей со значениями стандартных синтетических красителей, приведенных в таблице 1, или с помощью специальных хроматографических карт, полученных при предварительном хроматографировании стандартных синтетических красителей.

    

    

Таблица 1 - Значения стандартных синтетических красителей

    

    

    4.6.2 Приготовлениесмесевых стандартных синтетических красителей

    

    4.6.2.1 смесевых стандартных красителей готовят с учетом предварительной оценки состава синтетических красителей по 4.6.1.

    

    Примечание - На силикагелевых пластинах синие, фиолетовые и красные красители идентифицируются намного лучше желтых и оранжевых.

    

    

    4.6.2.2 Приготовление раствора А

    

    В мерную колбу (с пришлифованной пробкой) вместимостью 500 см пипеткой вносят по 50 см стандартных синтетических красителей, присутствие которых наиболее вероятно в анализируемой алкогольной продукции, доводят объем раствора в колбе до метки дистиллированной водой, закрывают пробкой и тщательно перемешивают.

    

    Массовую концентрацию каждого компонента полученного раствора А , г/дм , определяют по формуле

    

                                                            (4)

    

или

    

,                                                              (5)

    

где - количество основного красящего вещества индивидуального стандартного синтетического красителя, содержащегося в 50 см , приготовленного по 4.5.1.1, г;

    

     - объем раствора смесевых стандартных синтетических красителей, см ( =500 см );

    

    - коэффициент пересчета см в дм .

    

    4.6.2.3 Приготовление раствора Б

    

    Пипеткой по 4.3.7 отбирают 25 см раствора А, приготовленного по 4.6.2.2, и переносят в мерную колбу с пришлифованной пробкой вместимостью 50 см . Доводят объем раствора в колбе до метки дистиллированной водой, закрывают колбу пробкой и тщательно перемешивают.

    

    Массовую концентрацию каждого компонента полученного раствора Б , г/дм , определяют по формуле

    

,                                                             (6)

    

где - массовая доля синтетического красителя в растворе А по 4.6.2.2, г/дм ;

    

    2 - коэффициент разведения.