---

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
СОЮЗА ССР

РЕАКТИВЫ

МЕТОД ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

ГОСТ 28366-89
(СТ СЭВ 6398-88)

Издание официальное

коп. БЗ 11-89/965

го

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР ПО УПРАВЛЕНИЮ
КАЧЕСТВОМ ПРОДУКЦИИ И СТАНДАРТАМ

М вс к в

а

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ СОЮЗА ССР

Р

ГОСТ

28366—89

(СТ СЭВ 6398—88)

еактивы

Метод тонкослойной хроматографии
Reagents. Method of thin-layer chromatography

ОКСТУ 2609

Дата введения 01,01.91

Несоблюдение стандарта преследуется по закону

Настоящий стандарт распространяется на химические реакти­вы и устанавливает метод проведения испытания, основанный на тонкослойной хроматографии.

Термины, применяемые в стандарте, и их определения приве­дены в приложении 2. Рекомендуемые области применения мето­да приведены в приложении 3.

1. ОБЩИЕ УКАЗАНИЯ

   1. При проведении испытаний должны быть соблюдены тре­бования ГОСТ 27025.

   2. В нормативно-технической документации на испытуемый реактив должны быть указаны следующие данные:

      1. Описание приготовления испытуемого раствора.

      2. Предварительная обработка (при необходимости).

      3. Используемые растворители (или смесь).

      4. Применяемые реактивы и растворы.

      5. Способ хроматографирования.

      6. Тип хроматографической пластинки, материал и толщи­на слоя сорбента, тип сорбента, размер частиц, дополнительные данные о приготовлении сорбента, его активации, хранении (при необходимости).

      7. Время насыщения хроматографической камеры парами подвижной фазы.

      8. Объем испытуемого раствора, наносимый на пластинку.

      9. Температура, при которой проводят хроматографирова­ние (при необходимости).

      10. Критерии окончания процесса хроматографирования.

Издание официальное Перепечатка воспрещена

1. 11. © Издательство стандартов, 1990Способ проявления хроматограмм и реагенты для про­явления (при необходимости).

   12. Способ оценки хроматограмм.

   13. Вещества сравнения, используемые для оценки (при не­обходимости) .

   14. Аппаратура для количественной оценки разделенных компонентов (при необходимости).

2. СУЩНОСТЬ МЕТОДА

Метод заключается в разделении на тонком слое сорбента сме­си веществ в потоке растворителя, основанном на различной ско­рости перемещения компонентов смеси.

3. АППАРАТУРА И МАТЕРИАЛЫ

   1. Камера (сосуд) хроматографическая, закрытая герметич­ной крышкой.

   2. Микропипетка вместимостью 0,002—0,010 см³ или микро­шприц вместимостью не более 0,01 см³.

   3. Пластинки хроматографические из стекла, пластмассы, алюминия с тонким слоем подходящих материалов, пригодных для хроматографирования (например силикагеля, кизельгура, оки­си алюминия, целлюлозы).

   4. Аппарат для подготовки пластинок.

   5. Пульверизатор.

   6. Лампа ультрафиолетовая (для обнаружения веществ с ис­пользованием флуоресценции при длинах волн от 254 до 366 нм).

   7. Денситометр.

   8. Устройство для сканирования пятен на сорбенте.

4. ПОДГОТОВКА К ИСПЫТАНИЮ

   1. Приготовление пластинок для тонкослойной хроматографии

Предварительная очистка пластинок, размеры пластинок, тол­щина слоя сорбента, средний размер частиц сорбента или его тип, а также сушка, хранение пластинок и предварительное приготов­ление для испытания должны быть приведены в нормативно-тех­нической документации на испытуемый реактив. Пластинки гото­вят одним из способов, указанных ниже.

В точки, отмеченные на линии старта, наносят с помощью ка­либрованной микропипетки или микрошприца 0,001—0,010 см³ ис­пытуемых растворов, если в нормативно-технической документа­ции на испытуемый реактив нет других указаний. При необходи­мости, в точки на линии старта наносят таким же образом раство­ры веществ, соответствующих предполагаемым компонентам сме­си, для идентификации и количественной оценки этих примесей. При нанесении пробы не должна быть нарушена целостность слоя сорбента. Оптимальный диаметр пятен нанесенных проб должен быть 3—5 мм. Допускается наносить пробу не в виде точки, а чертой с применением микропипетки или капилляра. На тонко­слойной пластинке отмечают высоту продвижения фронта подвижной фазы и записывают данные о каждой пробе, под­вижной фазе и дату анализа. При необходимости нанесения боль­ших объемов испытуемого раствора рекомендуется нанесение пя­тен хроматографическим шприцем, порциями по 0,001 см³ и под­сушивание пятна холодным воздухом.

После нанесения пробы растворителю дают свободно испа­риться.

5. ПРОВЕДЕНИЕ ИСПЫТАНИЯ

Хроматографическое разделение веществ проводят в хромато­графической камере, в замкнутой системе, насыщенной парами подвижной фазы. Если в нормативно-технической документации на испытуемый реактив нет других указаний, хроматографирова­ние проводят, как указано ниже.

Предварительно готовят подвижную фазу (элюирующую сис­тему), раствор пробы, а также растворы веществ сравнения или растворы предполагаемых примесей и элюирующую систему вво­дят в камеру.

Тонкослойную пластинку с нанесенной пробой и, при необхо­димости, с веществами сравнения или предполагаемыми примеся­ми после испарения растворителя при комнатной температуре по­мещают в камеру, насыщенную парами подвижной фазы, подвер­гают элюированию подвижной фазой. Элюируют до тех пор, пока фронт подвижной фазы не окажется на предварительно обозна­ченной высоте, примерно в 20—30 мм от верхнего края пластинки. Хроматографическую пластинку вынимают и сушат. После высу­шивания хроматограмму можно элюировать повторно или тем же самым растворителем (повторная хроматография) или другим растворителем (последовательная хроматография). Пластинку по- Г

мещают в растворитель стартом вниз или повернув ее под углом> 90° (метод двумерного разделения пятна испытуемой пробы).

Хроматографическую пластинку помещают в хроматографиче­скую камеру таким образом, чтобы ее нижний конец был погру­жен в слой подвижной фазы на дне сосуда, как показано на черт. 1 и черт. 2 приложения 1.

Испытание проводят, как показано на черт. 3 приложения 1.

В камере для нисходящей хроматографии должен быть сосуд, в который помещают подвижную фазу. Подвешенную хроматогра­фическую пластинку соединяют (вблизи линии старта) бумажным фитилем с подвижной фазой сосуда, как показано на черт. 4 при­ложения 1.

6. СУШКА ХРОМАТОГРАММ

По окончании разделения хроматограмму вынимают из каме­ры, отмечают фронт мягким карандашом и сушат в таком поло­жении, как при элюировании, при комнатной температуре или в горячем воздухе (кроме пластинок, приготовленных насыпным способом, которые сушат в горизонтальном положении). Продол­жительность сушки зависит от скорости испарения подвижной фа­зы и химической стабильности хроматографируемых веществ.

7. ПРОЯВЛЕНИЕ ХРОМАТОГРАММ

Проявление компонентов на хроматограмме проводят одним из способов, приведенных ниже.

Визуально при дневном свете отмечают на хроматограмме по­ложение пятен цветных веществ. При наличии флуоресцирующих веществ проявление проводят в УФ-свете.

Хроматограмму проявляют жидкими и газообразными прояви­телями, используя реакцию имеющихся на хроматограмме соеди­нений с подходящим реагентом-проявителем с образованием ок­рашенного или флуоресцирующего вещества. Жидкие проявители наносят пульверизатором или используют реагенты в аэрозольной упаковке; газообразные проявители применяют, поместив хрома­тограмму в пары проявителя.

Хроматограмму проявляют, используя биологическую актив­ность хроматографируемых веществ.

8. ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ ИСПЫТАНИЙ

   1. Качественная оценка хроматограммы заключается в опре­делении положения пятна или полосы, которое характеризуется значением R_f:

где а — расстояние от центра пятна до стартовой линии, мм;

b — расстояние от фронта растворителя до стартовой линии» мм

или значением R_x:

R_x=—,
с

где с — расстояние от центра пятна вещества сравнения до стар­товой линии, мм.

Если характер пятен позволяет, то на хроматограммы наносят слой быстросохнущего лака. В случае необходимости проводят за­рисовку контуров хроматограммы или фотографирование.ПРИЛОЖЕНИЕ 1

Справочное

ПРИМЕРЫ ОБОРУДОВАНИЯ ДЛЯ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

К

1—хроматографическая ка­мера; 2—фильтровальная бумага; 3—хроматограмма;

4—растворитель; 5—стек-
лянная палочка

/—пластинки хроматогра­

фической камеры; 2—хрома-
тограмма; 3—лодочка хрома-
тографической камеры; 4—
растворитель

амера для восходящей
хроматографииЧ

Черт. 1

ерт. 2

Камера для
горизонтальной
хроматографии

/—хроматографическая камера; 2— хроматограмма
(сорбентом вниз); 3—фильтровальная бумага; 4—раство-
ритель; 5—стеклянная палочка

Черт.

3Камера для нисходяще*
хроматографии
(проточная хроматография)

Ч

растворитель

/—хроматограмма; 2—хроматографичес­кая камера; 3—бумажный фитиль; 4—

ерт. 4

< ПРИЛОЖЕНИЕ 2

Справочное

ТЕРМИНЫ И ОПРЕДЕЛЕНИЯ