Количество образцов каждой выборки и параметры — критерии годности (далее — параметры) изделий устанавливают в НТД.
Виды грибов — по п. 1.3.
Аппаратура, материалы, реактивы — по п. 1.4.
Подготовка к испытаниям
Готовят посуду, среды, чашки Петри в соответствии с приложениями 2, 3, 5.
Готовят камеры, эксикаторы, кассеты, подставки и бокс по п. 1.5.5.
Испытательная и контрольная выборки должны быть помещены в разные камеры или эксикаторы.
Готовят суспензию спор грибов в воде по п. 1.5.6.
Проведение испытаний
Проводят внешний осмотр образцов на соответствие требованиям НТД и измерение параметров изделий испытательной и контрольной выборок.
Изделия контрольной выборки очищают от внешних загрязнений (п. 1.5.7).
Образцы испытательной и контрольной выборок помещают в кассеты и (или) подставки (п. 1.6.1).
Кассеты и (или) подставки с образцами контрольной выборки помещают в камеру или эксикатор (п. 1.6.4).
Кассеты и (или) подставки с образцами испытательной выборки помещают в бокс (п. 1.6.2).
Испытательную выборку заражают суспензией спор грибов (п. 1.6.3) и помещают в камеру или эксикатор (п. 1.6.4).
В камерах или эксикаторах с образцами контрольной и испытательной выборок устанавливают режим по п. 1.6.5.
Продолжительность испытаний — 84 сут.
Осмотр чашек Петри — по п. 1.6.6.
После испытаний образцы испытательной и контрольной выборок извлекают из камеры или эксикатора и осматривают (п. 1.6.7).
После оценки интенсивности развития грибов измеряют парат метры изделий, установленные в НТД. Параметры измеряют не позднее чем через 1 ч после изъятия изделий из камеры или эксикатора.
Если указано в НТД, изделия испытательной и контрольной выборок после испытания выдерживают в нормальных климатических условиях в течение установленного времени и измеряют параметры.
Обработка результатов
Обработка результатов внешнего осмотра изделий — по п. 1.7.1.
Изделия считают грибостойкими, если грибы не влияют на параметры изделий. Для определения действия грибов на параметры изделий сопоставляют результаты испытаний испытательной и контрольной выборок в соответствии с приложением 6.
Результаты испытаний записывают в протокол (п. 1.7.2) и дополнительно указывают измеряемые параметры до и после испытания.
МЕТОД 4
Сущность метода заключается в том, что изделия заражают суспензией грибов в питательной среде и выдерживают в условиях, оптимальных для их развития, в течение 28 сут.
Отбор образцов — по п. 3.2.
Виды грибов — по п. 1.3.
Аппаратура, материалы, реактивы — по п. 1.4.
Подготовка к испытаниям
Готовят посуду, среды, чашки Петри в соответствии с приложениями 2, 3, 5.
Камеры, эксикаторы, кассеты, подставки и бокс готовят по п. 3.5.2.
Готовят питательную среду Чапека-Докса (см. приложение 3) и наливают в стерильный пульверизатор. Срок хранения среды в пульверизаторе в стерильных условиях не более 2 ч.
Готовят суспензию спор грибов в питательной среде (см. приложение 5) и наливают в стерильный пульверизатор. Срок хранения суспензии не более 2 ч.
Проведение испытаний
Проводят внешний осмотр образцов на соответствие требованиям НТД и измерение параметров изделий испытательной и. контрольной выборок.
Изделия контрольной выборки очищают от внешних загрязнений по п. 1.5.7.
Изделия испытательной и контрольной выборок размещают в кассеты и (или) подставки (п. 1.6.1).
Кассеты и (или) подставки с изделиями помещают в бокс (п. 1.6.2).
Образцы контрольной выборки обрабатывают питательной средой, подготовленной по п. 4.5.3, образцы испытательной выборки заражают суспензией спор грибов (см. п. 4.5.4). Не допускается слияние капель.
Обработанные по п. 4.6.4 изделия помещают в камеру или эксикатор (см. п. 1.6.4).
В камерах или эксикаторах с образцами контрольной и испытательной выборок устанавливают режим по п. 1.6.5.
Продолжительность испытаний — 28 сут.
Осматривают контрольные чашки Петри (см. п. 1.6.6).
После испытаний образцы испытательной и контрольной выборок извлекают из камеры или эксикатора и измеряют параметры по п. 3.6.7.
Обработка результатов
Обработка результатов —по пп. 3.7.2 и 3.7.3.
ТРЕБОВАНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ
При испытаниях изделий на грибостойкость используют грибы, которые могут являться источником опасности для челове
ка. При работе с плесневыми грибами необходимо соблюдать требования безопасности и руководствоваться положением о порядке учета, хранения, обращения, отпуска и пересылки культур бактерий, вирусов, риккетсий, грибов, простейших, микоплазм, бактерийных токсинов, ядов биологического происхождения.
М е р ы индивидуальной защиты и гигиены труда работающих
Лица, которые проводят испытание на грибостойкость, должны пройти медицинский осмотр, инструктаж по технике безопасности.
К работе не допускаются лица, страдающие хроническими заболеваниями дыхательных путей, повышенной аллергической реакцией и поражением открытых участков кожи.
Сотрудники должны проходить периодический медицинский осмотр в соответствии с приказом Министерства здравоохранения СССР № 700 от 19.06.84.
Каждый сотрудник должен быть обеспечен сменой медицинских халатов и шапочек, резиновыми перчатками и респираторами. Смена спецодежды должна проводиться не реже 1 раза в неделю. Запрещается выходить в спецодежде за пределы лаборатории.
Все работы с микроорганизмами следует проводить в резиновых перчатках. После применения перчатки должны быть продезинфицированы 6%-ным раствором перекиси водорода с 0,5% моющего вещества.
Для защиты дыхательных путей следует использовать респиратор ШБ-1 «Лепесток-200».
По окончании работы сотрудникам рекомендуется принимать душ.
Т р е б о в а н и я к оборудованию и безопасности производственных процессов
Камера для испытаний должна быть оборудована системой вытяжки, обеспечивающей отток воздуха от человека.
В месте соединения камеры с вытяжкой должен быть установлен микробиологический фильтр тонкой очистки ФТО-С-2000.
Внутреннюю обшивку камеры следует изготовлять из грибостойких материалов.
До и после испытаний камеры, эксикаторы, кассеты и подставки дезинфицируют водным раствором, содержащим 6% перекиси водорода и 0,5% моющего вещества, и промывают теплой водой. Расход раствора от 0,1 до 0,2 дм3/м3.
Затем облучают ртутными лампами типа ДРТ-400 в течение (25±5) мин.
Пересев плесневых грибов, приготовление суспензии спор грибов, заражение и дезинфекцию изделий следует проводить в. пылезащитных боксах БП-4—004.
До и после испытаний в боксах проводят влажную уборку с применением дезинфицирующих средств по п. 5.3.3 и облучают ртутными лампами в течение (25±5) мин.
Микроскопы, рабочий столик и мелкий инструмент протирают этиловым спиртом.
Образцы после испытаний дезинфицируют 6%-ным раствором перекиси водорода и облучают ртутной лампой в течение (60± 10) мин на расстоянии (50± 10) см от образца. Оптические детали протирают спиртом.
Образцы, обильно пораженные грибами, по окончании испытаний дезинфицируют в автоклаве при давлении 100 кПа в течение (50 ±10) мин и уничтожают.
Работы с автоклавами, камерами, термостатами и ртутными лампами проводят в соответствии с действующими инструкциями и правилами эксплуатации, утвержденными в установленном порядке.
Требования к помещению
Помещение, предназначенное для испытаний, должно быть изолированным, с отдельным входом, двойными дверями и тамбуром.
Помещение должно быть светлым, сухим и теплым, хорошо освещаться дневным светом, с установленными ртутными лампами типа ДРТ-400.
Помещение должно быть оборудовано системой приточно-вытяжной вентиляции с микробиологическими фильтрами ФЛА-1, иметь отопительную систему, водопровод с горячей и холодной водой и отдельным сливом, газовые горелки.
В помещении должны быть комнаты с испытательным оборудованием, для подготовки образцов к испытаниям и осмотра их после испытаний, для дезинфекции и хранения спецодежды, для хранения реактивов, боксы для работы с грибами и проведения заражения образцов, комната для оформления результатов испытаний, моечная и автоклавная.
Потолки, стены и полы должны быть изготовлены из материалов, подвергающихся мойке и дезинфекции.
В помещении проводят ежедневную влажную уборку с дезинфицирующими средствами и дезинфекцию ртутными лампами в течение (25±5) мин.
Не реже чем один раз в 6 мес следует проводить генеральную уборку помещений с использованием дезинфицирующих средств, разрешенных для применения Министерством здравоохранения СССР и эффективных по .отношению к плесневым грибам.
Климатические условия в рабочих помещениях определяют действующими санитарными нормами СН—245—71 и контролируют в установленном порядке.ПРИЛОЖЕНИЕ 1
Рекомендуемое
ВЫБОР МЕТОДОВ ИСПЫТАНИЙ И ДОПУСТИМЫЕ ПОКАЗАТЕЛИ ГРИБОСТОЙКОСТИ ИЗДЕЛИЙ
|
Изделие |
Метод испытаний |
Продолжительность испытаний, сут. |
Оценка грибостойкости изделий |
|
|
по интенсивности развития грибов в баллах (визуально) |
по измерению параметров |
|||
|
Изделия электронной техники, квантовой электроники, |
1 |
28 |
2 |
Без измерения параметров |
|
электротехнические Оптические детали в сборке |
2 |
28 |
3 |
То же |
|
ІИ вне сборки |
1 |
28 |
2 |
|
|
Приборы, аппаратура, оборудование |
2 |
28 |
3 |
Без измерения параметров |
|
3 |
84 |
4 |
Сохранение параметров в соответствии с требова- |
|
|
|
4 |
28 |
Без оценки |
ниями НТД То же ■ |
ПРИЛОЖЕНИЕ 2
Обязательное
СТЕРИЛИЗАЦИЯ И ХРАНЕНИЕ ПОСУДЫ
Новую посуду промывают водой при температуре (60±10)°С с моющим порошком, затем погружают на 20 мин в 2%-ный раствор соляной кислоты и промывают дистиллированной водой.
Использованную посуду помещают в 5%-ный раствор перекиси водорода на 5 ч и моют в соответствии с п. 1.
Чашки Петри и пробирки с культурами грибов обеззараживают в авто- ’клаве при давлении 100 кПа в течение (50±10) мин, затем обрабатывают в соответствии с п. 2.
Посуду, подготовленную в соответствии с пп. 1—3, заворачивают в бумагу, предварительно закрыв колбы, пробирки и пипетки ватными пробками, їй стерилизуют в термостате при температуре (160^о)°С в течение (150±5) мин.
Стерильную посуду хранят в сухом помещении в отдельном шкафу в ■бумаге не более 10 сут.
Мелкий металлический инструмент (ножницы, пинцеты и т. п.) стерилизуют и хранят в соответствии с пп. 4, 5.ПРИГОТОВЛЕНИЕ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД
СРЕДА ЧАПЕКА-ДОКСА
В состав среды Чапека-Докса входят следующие реактивы:
калий фосфорнокислый однозамещенный — 0,7 г;
калий фосфорнокислый двузамещенный 3-водный — 0,3 г;
магний сернокислый 7-водный — 0,5 г;
натрий азотнокислый — 2,0 г;
калий хлористый — 0,5 г;
железо (II) сернокислое 7-водное — 0,01 г;
сахароза — 30 г;
вода дистиллированная — до 1000,0 см3.
Массы компонентов, указанные в п. 1.1, последовательно растворяют в колбе с 500 см3 дистиллированной воды, тщательно перемешивают и добавляют дистиллированную воду до 1000 см3.
pH питательной среды должен быть 6±0,5. При отклонении от заданного значения pH снижают до требуемого значения добавлением 0,01 моль/дм3' раствора соляной кислоты или повышают добавлением щелочей (едкого натра^, гидроокиси калия).
СРЕДА ЧАПЕКА-ДОКСА С АГАРОМ
Среду готовят в соответствии с требованиями п. 1.2, но без добавления сахарозы.
В раствор добавляют 20 г микробиологического агара и нагревают на водяной бане до полного расплавления агара. При нагревании колбу со средой взбалтывают.
В полученную однородную массу добавляют сахарозу и тщательно перемешивают содержимое колбы.
pH среды Чапека-Докса с агаром должен быть 6±0,5.
СРЕДА СУСЛО-АГАР
Неохмеленное пивное сусло разбавляют дистиллированной водой до содержания сахара от 5 до 6°Б или 3,5’Б. Содержание сахара определяют сахаромером. В разбавленное сусло добавляют 2% агара и содержимое колбы нагревают на водяной бане до полного его расплавления.
pH среды сусло-агар должен быть 6+0,5.
СРЕДА СУСЛО-АГАР С САХАРОЗОЙ
В неохмеленное неразбавленное сусло с содержанием сахара 16% добавляют 60% сахарозы, 2% агара и содержимое колбы нагревают на водяной бане до полного расплавления агара.
СРЕДА САБУРО
20 г микробиологического агара заливают 1000 см3 дистиллированной воды и нагревают на водяной бане до полного расплавления агара. Затем добавляют 40 г глюкозы и 10 г пептона.
КАРТОФЕЛЬНО-МОРКОВНАЯ СРЕДА
200 г очищенного сырого картофеля и 200 г очищенной сырой моркови •отваривают вместе в течение 1 ч в 1 дм3 водопроводной воды. Отвар процеживают через марлю в чистую колбу, доливают до 1 дм3 водопроводной водой и добавляют 20 г агара. Содержимое колбы нагревают на водяной бане до полного расплавления агара.
КАРТОФЕЛЬНО-ГЛЮКОЗНАЯ СРЕДА
200 г очищенного картофеля отваривают в течение 1 ч в 1 дм3 водопроводной воды, отвар процеживают через марлю в сухую чистую колбу, доливают до 1 дм3 водопроводной водой, добавляют в отвар 20 г глюкозы и 20 г агара. Содержимое колбы нагревают на водяной бане до полного расплавления агара.
СТЕРИЛИЗАЦИЯ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД
Среды в расплавленном состоянии разливают в пробирки на 2/3 их объема для последующего разлива в чашки Петри и на '/з их объема для выращивания грибов в пробирках. Жидкие среды разливают в колбы. Пробирки и колбы закрывают ватными пробками и стерилизуют в автоклаве.
Среды, содержащие сахарозу и пивное сусло, стерилизуют при давлении 50 кПа в течение 20—30 мин, не содержащие сахарозу и пивное сусло — при давлении 100 кПа в течение 15—20 мин.
После стерилизации пробирки, заполненные на ]/з объема, размещают под углом 25°±5° к горизонтальной поверхности для получения скошенной поверхности при застывании среды.
