ГОСТ 10444.11-89 Продукты пищевые. Методы определения молочнокислых микроорганизмов Стр. 1 из 19.
У
Группа Н09
ДК 663/.665.3.001.4:006.354ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ СОЮЗА ССР
ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ
М
ГОСТ
104 4 4 11 ******** sq Ж лнГ Ж лк Ж Л .Ж
етоды определенияFood products. Methods for determination of the lactic acid bacteria
ОКСТУ 9109
Срок действия с 01.01.91
до 01.01.96
Настоящий стандарт распространяется на пищевые и кисломолочные продукты, закваски, бактериальные концентраты и бактериальные препараты молочно-кислых бактерий и устанавливает метод определения жизнеспособных молочнокислых микроорганизмов и их наиболее вероятного числа (НВЧ), а также методы определения в пищевых продуктах (кроме кисломолочных продук-’ ТОВ, заквасок, бактериальных концентратов и бактериальных пре- паратов молочно-кислых бактерий) бактерий родов Lactobacillus, Leuconostoc, стрептококков группы N рода Streptococcus, Pedio- coccus, S. thermophilus и определение наиболее вероятного числа (НВЧ) бактерий рода Lactobacillus.
Метод основан на высеве определенного количества продукта и (или) его разведений в жидкие или агаризованные селективные питательные среды, культивировании посевов при оптимальных условиях и, при необходимости, определении морфологических и биохимических свойств обнаруженных микроорганизмов и их подсчете.
Метод предназначен для:
установления соответствия микробиологических показателей качества пищевых и кисломолочных продуктов, заквасок, бактериальных концентратов и бактериальных препаратов молочно-кислых бактерий требованиям нормативно-технической документации;
установления промышленной стерильности консервов;
выяснения причин возникновения дефектов пищевых продуктов.
П
Издание официальное
ерепечатка воспрещенаГОСТ 10444.11—89 С. 2
ОТБОР И ПОДГОТОВКА ПРОБ
Отбор и подготовка проб пищевых продуктов, кроме кисломолочных, — по ГОСТ 26668, 26669.
Отбор проб кисломолочных продуктов (сухих и жидких), заквасок, бактериальных концентратов и бактериальных препаратов молочно-кислых бактерий и подготовка их к анализу — по ГОСТ 9225.
Консервы проверяют на герметичность — по ГОСТ 8756.18.
Полные консервы, нормальные по внешнему виду, перед испытанием термостатируют при 30^37 °С в таре вместимостью до 1 дм3 включительно не менее 5 сут, в таре вместимостью свыше 1 дм3 — не менее 7 сут.
Пищевые продукты, в которых нормируется количество молочно-кислых микроорганизмов, термостатированию не подлежат.
Разведения продуктов готовят на пептонно-солевом растворе по ГОСТ 26669.
Исходные разведения продуктов с массовой долей NaCl более 5% готовят с использованием пептонной воды; исходные разведения рыбных и мясных продуктов готовят с использованием физиологического раствора.
АППАРАТУРА, МАТЕРИАЛЫ И РЕАКТИВЫ
Для проведения испытания применяют аппаратуру, материалы, реактивы по ГОСТ 10444.1, ГОСТ 9225 и указанные ниже:
весы лабораторные общего назначения с метрологическими характеристиками по ГОСТ 24104, с наибольшим пределом взвешивания до 200 г и пределом допускаемой погрешности ±2 мг (для взвешивания реактивов);
весы лабораторные общего назначения с метрологическими характеристиками по ГОСТ 24104, с наибольшим пределом взвешивания до 200 г и пределом допускаемой погрешности ±15 мг (для взвешивания продукта);
микроскоп световой биологический с приспособлением для фазово-контрастного микроскопирования по ГОСТ 8284 или других аналогичных марок;
стекла покровные по ГОСТ 6672;
стекла предметные по ГОСТ 9284;
термостат с диапазоном рабочих температур 28—55°С, позволяющий поддерживать заданную температуру с погрешностью ± 1 °С;
пробки корковые по ГОСТ 5541;
лупа складная карманная, дающая увеличение в 4—10 раз по ГОСТ 25706;
панкреатин для бактериальных и вирусологических препаратов по ТУ 49619
;С. 3 ГОСТ 10444.11 — 89
хлороформ технический по ГОСТ 20015;
молоко обезжиренное кислотностью не более 19 °Т, получаемое из молока коровьего, заготовляемого не ниже 2-го сорта па ГОСТ 13264 или молоко сухое обезжиренное по ГОСТ 10970;
L-аргинин гидрохлорид;
бензидин основной или соляно-кислый;
калия цитрат;
карбоксилметилцеллюлоза;
твин-80;
натрия ацетат;
аммония цитрат; ?
магния сульфат (MgSO4 * 7Н2О) ;
марганца сульфат (AlnSO4* 2Н2Г1);
марганца сульфат (MnSO4»4H2O);
кислота сорбиновая;
нигрозин;
фенол.
ПОДГОТОВКА к ИСПЫТАНИЮ
Приготовление растворов реактивов и индикаторов для испытания пищевых продуктов (кроме кисломолочных продуктов, заквасок, бактериальных концентратов и • бактериальных препаратов м ол очно-кислых бактерий)
ЗЛЛ. Бромкрезоловый пурпурный, индикатор, раствор массовой концентрацией 1 г/дм3: ОД г бромкрезолового пурпурного с соблюдением правил асептики переносят, смывая стерильной дистиллированной водой, в мерную посуду вместимостью 100 см3, доводят объем этой же водой до метки. Раствор хранят не более З мес при комнатной температуре.
Кальций углекислый, водная суспензия массовой концентрацией 30 г/дм3: 3 г углекислого кальция, простерилизован- ного по ГОСТ 10444.1, переносят, смывая дистиллированной водой, в мерную посуду вместимостью 100 см3, доводят объем до метки. Суспензию стерилизуют при температуре (121 ±1) °С в течение, 20 мин. Суспензию хранят не более 3 мес при комнатной температуре.
Карболфуксин, концентрированный раствор: 1 г фуксина смешивают с 10 см3 96%-ного этилового спирта и 100 см3 раствора фенола массовой концентрацией 50 г/дм3.
Для приготовления рабочего раствора карболфуксина к 10 см3 концентрированного раствор# карболфуксина добавляют 90 см3 дистиллированной воды.
Кристаллический фиолетовый раствор массовой концентрацией 10 г/дм3: 1 г кристаллического фиолетового переносят*.
116
С
12.06.2007 16:08:16
І
истема NormaCS®ГОСТ 10444. Н—89 С. 4
смывая дистиллированной водой, в мерную посуду вместимостью 100 см®, объем доводят до метки. Раствор хранят не более 3 мес при комнатной температуре.
Нигрозина суспензия массовой концентрацией 100 г/дм3: 10 г нигрозина переносят, смывая дистиллированной водой, в мерную посуду' вместимостью 100 см3, объем доводят до метки, нагревают до температуры 45—50 °С на водяной бане, затем фильтруют через ватно-марлевый фильтр.
Пептонно-солевой раствор готовят по ГОСТ 26669.
Пептонную воду готовят по ГОСТ 26669.
Сорбиновая кислота, щелочной раствор: 1 г сорбиновой кислоты переносят, смывая раствором гидроокиси натрия с NaOH^l моль/дм3, в мерную посуду вместимостью 100 см3, объем доводят до метки тем же раствором. Полученный раствор стерилизуют методом мембранной фильтрации по ГОСТ 26670.
Допускается готовить' раствор сорбиновой кислоты без фильтрации с соблюдением правил асептики, при этом раствор гидроокиси натрия готовят на стерильной дистиллированной воде.
Реактив для определения цитохромов: 1 г бензидина основного или солянокислого растворяют в 20 см3 99,8%-ной ледяной уксусной кислоты, добавляют 30 см3 дистиллированной воды и медленно нагревают, после охлаждения в раствор вносят 50 см3 96% * ного этилового спирта. Раствор хранят в холодильнике в течение 1 мес.
Физиологический раствор готовят по ГОСТ 10444.1.
Приготовление питательных сред для испытания пищевых продуктов (кроме кисломолочных продуктов, заквасок, бактериальных концентратов и бактериальных препаратов м о- л о ч н о-к ислых бактерий)
Среду Бликфельдта плотную готовят по ГОСТ 10444.1.
Среда Бликфельдта жидкая: в 950 см3 дистиллированной воды растворяют 10 г лактозы, 10 г глюкозы, 5 г пептона, кипятят и фильтруют через бумажный фильтр. К фильтру добавляют 20 см3 дрожжевого экстракта, 32 см3 раствора бромкрезолового пурпурного по п. 3.1.1, устанавливают pH 7,3 —0,1, разливают в стерильные пробирки и стерилизуют при температуре (117±1) °С в течение 20 мин.
Среда Бригс, в модификации Шарп:
в 875 см® дистшушрованной воды вносят 15 г пептона, 20 г глюкозы, 25 см® дрожжевого экстракта, 5 г уксусно-кислого натрия, 5 г калия фосфорно-кислого однозамещенного, 2 г аммония лимонно-кислого, 100 см® томатного сока (в расчете на то, что в соке содержится не менее 4,5% растворимых сухих веществ, если в томатном соке содержится другое количество сухих веществ, то делают пересчет на содержание сухих веществ 4,5%), 1 см®С. 5 ГОСТ 10444.11—89
твина— 80, 5 см3 раствора солей (MgSO4*7H2O — 11,5 г, MnSO4*4H2O— 2,86 г, FeSO4 * 7Н2О— 0,68 г, дистиллированная вода до 100 см3), 15 г агара.
Смесь кипятят на слабом огне до полного растворения агара. Устанавливают pH таким образом, чтобы после стерилизации он составлял при 25°С (6,5±0,1). Среду стерилизуют при температуре (115± 1) °С в течение 15 мин.
Среда дрожжевая: в 100 см3 дрожжевого экстракта, приготовленного по ГОСТ 10444.1, добавляют 900 см3 дистиллированной воды, 10 г простерилизованного по ГОСТ 10444.1 углекислого кальция и 100 г сахарозы. Смесь нагревают до растворения сахарозы, устанавливают pH таким образом, чтобы после стерилизации он составлял при 25°С (7,1 ±0,1), разливают в пробирки по 10 см3 и стерилизуют при температуре (121±1)$С в течение 15 мин.
Среду капустный агар готовят по ГОСТ 10444.Г
Среда МРС жидкая: в мерную колбу вместимостью 1,0 дм3 помещают 10 г пептона, 20 см3 дрожжевого экстракта, 20,0 г глюкозы, 1,0 см3, тви-н—80, 2,0 г калия фосфорно-кислого двузамещенного, 5,0 г натрия ацетата, 2,0 г триаммония цитрата, 0,2 г сульфата магния, 0,05 г сульфата марганца (MnSO4*4H2O), доливают до метки мясную воду; растворяют компоненты нагреванием на водяной бане и устанавливают pH таким образом, чтобы после стерилизации он составлял при 25°С (6,2±0,1). Среду разливают по 10 см3 в стерильные пробирки и стерилизуют в автоклаве при температуре (121± 1) °С в течение 15 мин. Пробирки с питательной средой хранят при температуре (4±1)°С не бо- лее 30 сут.
Среду МРС агаризованную готовят по рецептуре, указанной в и. 3.2.6, с добавлением 15—18 г агара. После растворения компонентов среду разливают в стерильные колбы и стерилизуют в автоклаве при температуре (121 ± 1) °С в течение 15 мин. Готовую среду хранят при температуре (4±1) °С не более 30 сут.
При необходимости, для повышения селективности, после стерилизации к 1 дм3 агаризованной или жидкой среды добавляют 1 см3 щелочного раствора сорбиновой кислоты по п. 3.1.8.
Среда мясо-пептонный бульон с pH 9,6:
в мясо-пептонном булйоне, приготовленном по ГОСТ 10444.1,. устанавливают pH с помощью растворов щелочи и кислоты по ГОСТ 10444.1 таким образом, чтобы после стерилизации он составлял при 25°С 9,6. Среду стерилизуют при температуре (121 ±1) °С в течение 20 мин.
Среду мясо-пептонный бульон с содержанием хлористого натрия 6,5% готовят по ГОСТ 10444.1, но при приготовлении уве-
Система NormaCS® www.normacs.ru 12.06.200716:08:17ГОСТ 10444.11 — 89 С. 6
личивают количество добавляемого хлористого натрия до 65 г на 1 дм3 среды.
Среда питательный агар с сахарозой:
100,0 г сахарозы, 15,0 г агара добавляют в 1 дм3 мясо-пептон- ного бульона, периодически перемешивая, смесь нагревают до кипения и полного растворения всех компонентов.
Среду охлаждают до 45—55°С и устанавливают pH таким образом, чтобы после стерилизации он составлял при 25*С (7,1 ±0,1).
Среду разливают в колбы и стерилизуют в течение 15 мин при температуре (121±1)°С. После стерилизации и проверки pH среду хороша перемешивают и разливают в чашки Петри, хранят при температуре (4±1) °С не более 14 сут.
Среда Редди: основа среды — в колбу, содержащую 500 см3 дистиллированной воды, добавляют 15,0 г агара и нагревают на водяной бане до растворения агара. В другую колбу, содержащую 500 см3 дистиллированной воды, добавляют 10,0' г цитрата калия и 15,0 г карбоксилметилцеллюлозы и растворяют при нагревании. Содержимое обеих колб смешивают и добавляют 3,0 г пептона, 25 см3 дрожжевого экстракта, 1,25 г калия фосфорнокислого двузамещенного, 5,0 г L-аргинин гидрохлорида, нагревают на водяной бане до полного растворения компонентов, охлаждают до температуры 45—55°С и устанавливают pH таким образом, чтобы после стерилизации он составлял при 25°С (6,3 ±0,2). Основу среды стерилизуют при температуре (121±1) °С в течение 15 мин и хранят при температуре (4±1)°С не более 30 сут.
Для приготовления питательной среды к 1 дм3 расплавленной и охлажденной до 45—55 °С основы добавляют 5,0 см3 стерильного обезжиренного молока, 100 см3 суспензии углекислого кальция массовой концентрацией 30 г/дм3 и 2 см3 раствора бромкрезолового пурпурного массовой концентрацией 1 г/дм3.
Среда Рогоза жидкая: в мерную колбу вместимостью 1,0 дм3 помещают 10,0 г пептона, 25,0 см3 дрожжевого экстракта, 20,0 г глюкозы, 1,0 см3 твина—80, 6,0 г калия фосфорно-кислого однозамещенного, 2,0 г цитрата аммония, 25,0 г ацетата натрия, 1,32 см3 ледяной уксусной кислоты, 0,575 г сульфата магния, 0,12 г сульфата марганца (MnSO4 • 2Н2О), 0,034 г сульфата железа, доливают до метки дистиллированную воду, растворяют компоненты нагреванием на водяной бане и устанавливают pH таким образом, чтобы после стерилизации он составлял -при 25°С (5,4±0,1). Среду разливают по 10«см3 в стерильные пробирки и стерилизуют в автоклаве при температуре (121±1) °С в течение 15 мин. Пробирки с питательной средой хранят при температуре (4±1)°С не более 30 сут.
