ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
СОЮЗА ССР
ЕДИНАЯ СИСТЕМА ЗАЩИТЫ ОТ КОРРОЗИИ И СТАРЕНИЯ
ФУНГИЦИДЫ
■'f МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ
у;
Издание официальное
БЗ 9-88/680
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ ССС
Москва
^-Не-еТАНДА РТАМ
УДК 632.952:620.197:006.354 Группа Т97
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ СОЮЗА ССР
Е
ГОСТ
9.803-88
Метод определения эффективности
Unified system of corrosion and ageing protection.
Fungicides. Efficiency determining method
ОКСТУ 0009
Дата введения 01.01.90
Несоблюдение стандарта преследуется по закону
Настоящий стандарт распространяется нд вещества, обладающие фунгицидной и (или) фунгистатической активностью (далее — фунгициды), предназначенные для защиты материалов и изделий от повреждения плесневыми грибами (далее — грибами) и устанавливает метод испытаний эффективности фунгицидов.
Стандарт не распространяется на газообразные фунгициды, а также водонерастворимые фунгициды, разлагающиеся при температуре менее 90°С.
Сущность метода заключается в культивировании грибов на питательной среде, содержащей фунгициды, и оценке их эффективности по кинетическим параметрам развития грибов.
ОТБОР ОБРАЗЦОВ
В качестве образцов для испытаний водорастворимых фунгицидов применяют их растворы в среде Чапека-Докса. Среду Чапека-Докса готовят по ГОСТ 9.048. Концентрации водорастворимых фунгицидов выбирают из ряда: 2Х10'7; 4Х10'7; 8Х 10~7-. 2Х10’6- 4Х10'6- 8Х10'6- 2Х10-5; 8Х ХЮ'5; 2Х10'4; 4Х10"4; 2Х10"3; 4Х10'3; 8Х10'3 моль/дм”
В качестве образцов для испытаний водонерастворимых фунгицидов применяют пленки этих веществ, осажденных на синтезированных гидрогелевых подложках.
Концентрация водонерастворимых фунгицидов на поверхности подложки должна составлять: 1Х10'7; 2Х10'7; 5Х10'7; 8Х10"7; 1Х1СГ6; 2Х10'6; 5Х10'6; 8Х10'6; IX10"5; 2Х10"5; 5Х10'5 моль/см2.
Концентрация водонерастворимых фунгицидов в растворе органических растворителей, применяемых для осаждения на поверхность подложки, соответственно выбирают из ряда: 1.57Х10'3; ЗД4Х10'3; 7,85Х10'3; 10,56Х10'3; 1.57Х10'2; 3,14Х10'2; 7,85Х10'2; 12,50Х10'2; 1,57X10'*; 3,14X10'*; 7,85X10'* моль/дм3.
Издание официальное Перепечатка воспрещена
* ©Издательство стандартов, 1989Метод изготовления гидрогелевой подложки с осажденной на ней пленкой водонерастворимого фунгицида приведен в приложении 1.
Количество исследуемых концентраций каждого фунгицида должно быть не менее 10.
Контрольными образцами для водорастворимых фунгицидов является среда Чапека-Докса, не содержащая фунгицидов, а для водонерастворимых — гидрогелевая подложка без пленки фунгицидов.
Количество проб (А) для каждого из отборов каждой из концентраций фунгицидов и для контрольных образцов рассчитывают по ГОСТ 9.707, приложение 3. Если относительная ошибка и вероятность попадания среднего арифметического значения в доверительный интервал не заданы, количество проб на один отбор должно быть не менее семи.
ВИДЫ ГРИБОВ
Виды грибов для испытаний фунгицидов, применяемых для защиты:
полимерных материалов — по ГОСТ 9.049;
лакокрасочных покрытий — по ГОСТ 9.050;
тканей - по ГОСТ 9.802;
других типов материалов и изделий — по ГОСТ 9,048.
АППАРАТУРА, МАТЕРИАЛЫ И РЕАКТИВЫ
Аппаратура, материалы и реактивы по ГОСТ 9.048,
Подложки гидрогелевые (см. приложение 1).
Колба с тубусом исполнения 1 номинальной вместимостью 1000 см3 по ГОСТ 25336.
Фильтр обеззоленный — синяя лента диаметром 5,5 см.
Воронка Бюхнера № 1 по ГОСТ 9147.
Насос водоструйный по ГОСТ 25336,
Эксикатор исполнения 1 диаметром корпуса 250 мм по ГОСТ 25336.
Лупа четерехкратная по ГОСТ 25706.
Пипетка исполнения 2 1-го класса точности вместимостью 2 см3 по ГОСТ 20292.
Пипетка исполнения 7 1-го класса точности вместимостью 5 см3 по ГОСТ 20292.
Весы лабораторные общего назначения 2-го класса точности с. наибольшим пределом взвешивания 200 г по ГОСТ 24104.
Чашка исполнения 2 типа ЧБН по ГОСТ 25336..
Стаканчик типа СВ с взаимозаменяемым конусом 34/12 по ГОСТ 25336.
Силикагель технический прокаленный по ГОСТ 3956.
Колба коническая по ГОСТ 25336 вместимостью 100 см3 из стекла группы ТС.
ПОДГОТОВКА К ИСПЫТАНИЯМ
Для проведения испытаний составляют программу, в которой указывают:
объект испытаний (наименование, марка фунгицида и НТД), завод-изготовитель;
растворимость в воде и других растворителях, режим испытаний;
перечень используемых при испытаниях НТД;
метрологическое обеспечение испытаний ;
обозначение настоящего стандарта.
Посуду, применяемую при испытании, готовят по ГОСТ 9.048, приложение 1.
Питательные среды для выращивания и хранения культур плесневых грибов готовят по ГОСТ 9.048, приложение 2.
Пересев, выращивание, хранение культур плесневых грибов и оценка их жизнеспособности - по ГОСТ 9.048, приложение 3.
Суспензию спор каждого вида грибов в воде готовят по ГОСТ 9.048, приложение 4, при этом концентрация их должна быть 1,0—2,0 млн/см3.
Готовят растворы водорастворимых фунгицидов в среде Чапека- Докса по п. 1.1.
Готовят растворы водонерастворимых фунгицидов в соответствующих органических растворителях квалификации ч. и ч.д.а. по п. 1.2. Подготовленные растворы разливают в чашки ЧБН по (5,ОО±О,О5) см3 и выпаривают органический растворитель, помещая ЧБН в термостат, полки которого устанавливают горизонтально по уровню. Термостат устанавливают в вытяжном шкафу. Устанавливают температуру в термостате на (5 ±2) ° С ниже температуры кипения соответствующего растворителя и выпаривают до постоянной массы.
В чашках ЧБН синтезируют гидрогелевые подложки (см. приложение 1).
Гидрогелевые подложки стерилизуют по ГОСТ 9.048 в чашках ЧБН, устанавливая их в боксы под ртутными или ртутно-кварцевыми лампами на расстоянии (50±10) см и выдерживают (240+6) мин.
Для испытаний водонерастворимых фунгицидов подготавливают чашки ЧБН, дно которых полностью покрывают отрезками стеклянных трубок и стерилизуют по ГОСТ 9.048.
ПРОВЕДЕНИЕ ИСПЫТАНИЙ
П р о в е д е н и е испытаний водорастворимых фунгицидов
В конические колбы вместимостью 100 см3 разливают по 40 см3 растворов, приготовленных по п. 4.6, и контрольную пробу (см. п. 1.4). Количество параллельных проб в соответствии си. 1.5.
Из приготовленных суспензий спор грибов (п. 4.5) берут по 2 см3 каждого из видов и смешивают между собой.
В конические колбы, подготовленные по п. 5.1.1, наливают по 1 см3 суспензии спор грибов, подготовленной по п. 5.1.2.
Конические колбы, подготовленные по пп. 5.1.1—5.1.3, закрывают ватными пробками в стерильных условиях и помещают в термостат при температуре (29 ±2) ° С.
Промежутог времени, в течение которого не наблюдается развитие грибов (далее — лаг-фаза Ас,)> ПРИ всех концентрациях водорастворимого фунгицида и в контрольных пробах устанавливают по появлению хотя бы на одной пробе биомассы грибов, видимой невооруженным глазом. Периодичность осмотров для выявления лаг-фазы 24 ч.
Если разность минимального и максимального значений лаг-фазы в пробах в любом из отборов превышает 75 % ее минимального значения, испытания повторяют на новой серии образцов.
Для количественного определения биомассы при всех концентрациях отборы проводят один раз в 3 сут, а для контрольных проб — один раз в сутки. Общее количество отборов должно быть не менее семи. Продолжительность испытаний — не более 42 сут.
Содержимое колбы сливают на предварительно высушенный до постоянной массы при температуре (105 ±2)°С и взвешенный обеззоленный фильтр, установленный в приспособлении для вакуумного фильтрования, состоящем из воронки Бюхнера, колбы с тубусом и водоструйного насоса. Биомассу отмывают дистиллированной водой в количестве 100 см3.
После вакуумного фильтрования фильтр с биомассой помещают в предварительно, высушенный при температуре (105 ±2) ° С и взвешенный до постоянной массы стаканчик СВ и сушат в термостате с открытой крышкой при температуре (105±2)°С с периодичностью взвешивания 2 ч. Стаканчик с фильтром после каждого из периодов сушки помещают в эксикатор с силикагелем на 1 ч до полного остывания, а затем взвешивают. Сушку прекращают, когда масса стаканчика с фильтром при последующем взвешивании отличается от его массы в предыдущем не более чем на ±0,4 мг.
Если в контрольном опыте по истечении 5 сут не наблюдается развития грибов, споры, использованные для заражения, считают нежизнеспособными.
Вычисляют биомассу каждой пробы каждого отбора каждой из концентраций фунгицида.
Определяют среднее арифметическое значение биомассы в каждом из отборов.
Испытания при каждой из концентраций фунгицидов прекращают, если количество биомассы в последующем отборе не увеличивается по сравнению с предыдущим.
Данные испытаний заносят в протокол, форма которого приведена в приложении 2.
Проведение испытаний водонерастворимых фунгицидов
Испытания проводят на гидрогелевых подложках с осажденным на них водонерастворимым фунгицидом различных поверхностных концентраций (пп. 4.7—4.9).
В чашки ЧБН, подготовленное по п. 4.10, наливают питательную среду Чапека-Докса, в них укладывают гидрогелевые подложки (п. 5.2.1) так, чтобы поверхность подложки, свободная от фунгицида, контактировала с питательной средой, а на поверхность, содержащую фунгицид, равномерно наносят 1 см3 суспензии спор грибов, полученной по п. 5.1.2.
Чашки ЧБН накрывают крышками, помещают в камеру или эксикатор, на дно которого налита вода. Эксикатор закрывают крышкой. Испытания проводят при температуре (29 ±2) ° С и относительной влажности более 90 %. В камере (эксикаторе) не допускают конденсации влаги, принудительной вентиляции и воздействия прямого естественного или искусственного освещения.
Не реже одного раза в 7 сут эксикаторы или камеры открывают для притока воздуха.
Лаг-фазу при всех концентрациях водонерастворимого фунгицида и в контрольных пробах определяют по времени, в течение которого хотя бы на одной из проб появляется биомасса грибов, видимая при четырехкратном увеличении. Периодичность осмотров — 24 ч.
Для количественного определения биомассы периодичность отборов и их количество - по п. 5.1.6. При каждом отборе подложку вынимают из чашки ЧБН, биомассу полностью снимают с поверхности подложки шпателем или лопаткой на предварительно высушенный до постоянной массы при температуре (105±2)°С беззольный фильтр с синей полосой, установленный в приспособлении для вакуумного фильтрования. Проводят вакуумное фильтрование. Биомассу отмывают дистиллированной водой в количестве 100 см3.
В дальнейшем испытания проводят в соответствии с пп. 5.1.8— 5.1.13.
ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ
Эффективность фунгицидов определяют по зависимости кинетических параметров уравнения, описывающего рост биомассы, от концентрации этих веществ.
Кинетические параметры (коэффициенты а,- и й,) уравнения, связывающего текущее среднее арифметическое значение удельной биомассы (й^) и среднее максимальное (wCimax) значение удельной биомассы при различных концентрациях фунгицида вычисляют по формуле
— _ „ wC,-max . .
тСт 1 + а,- ехр [-і,- (т,„ - LCj) ]
ІДО тс,тах - средняя максимальная удельная биомасса, достигнутая при развитии грибов в присутствии фунгицида каждой из концентраций и в контрольной пробе, мг/см2 илимг/дм3;
Lc. — минимальная, экспериментально полученная лаг-фаза для данной концентрации фунгицида и в контрольной пробе, ч;
Tjn — продолжительность выдержки, после которой произведен отбор, ч;
д,- — коэффициент, характеризующий способность споры образовывать биомассу при данной концентрации фунгицида и в контрольной пробе;
bi — коэффициент, характеризующий удельную скорость развития микроорганизмов на данной питательной среде (при Ай концентрации фунгицида), ч"1.
Преобразуют уравнение (1)
/ "’С.тах - mCin
1
(2)
П ( / = 1Па'' -Ьі ~ Lci>
и методом наименьших квадратов вычисляют коэффициенты д(- и Ь( по формулам:
Чі
Чіїїт - Ьс.)п In п=1 ‘
Ьі =
тС{тах ~ mCin
mCin£
Чі
- LCi) S ln' « n= 1
mС/tn ах mCjn
mcin /П
Чі S (т-Лс)’ - [ Ї (r-Lc)n]2п=1 п=1