---

ГОСТ 25179-90 Молоко. Методы определения белка Стр. 1 из 9.

Группа Н19

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ СОЮЗА ССР

М

ГОСТ
25179—90

ОЛОКО

Методы определения белка

Milk. Methods for determination of protein

ОКСТУ 9209

Дата введения 01.01.91

Настоящий стандарт распространяется на непастеризованное молоко с кислотностью не выше 20 ’Т и устанавливает следующие методы измерения массовой доли белка: колориметрический, рефрактометри­ческий и формольного титрования.

1. МЕТОДЫ ОТБОРА ПРОБ

Отбор проб и подготовка их к испытаниям — по ГОСТ 13928. Консервирование проб не допускается.

2. КОЛОРИМЕТРИЧЕСКИЙ МЕТОД

Колориметрический метод основан на способности белков молока при pH ниже изоэлектрической точки связывать кислый краситель, образуя с ним нерастворимый осадок, после удаления которого изме­ряют оптическую плотность исходного раствора красителя относитель­но полученного раствора, которая уменьшается пропорционально мас­совой доле белка.

Весы лабораторные 4-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г по ГОСТ 24104.

Центрифуга для измерения массовой доли жира молока по норма­тивно-технической документации.

Колориметр фотоэлектрический лабораторный со светофильтром для выделения спектральной области 590 нм с кюветами рабочей длины 10 мм или спектрофотометр с выделяемой длиной волны 590 нм.

П

Издание официальное

ерепечатка воспрещена

ГОСТ 25179—90

Анализатор потенциометрический с диапазоном измерения 2—3 ед. pH с ценой деления 0,05 ед. pH.

Термометр ртутный стеклянный с диапазоном измерения 0—100 °С, с ценой деления 0,5 или 1,0 °С, с пределом допустимой погрешности ±1 °С по ГОСТ 28498.

Пробки резиновые конусные № 16 или 19 по нормативно-техни­ческой документации.

Штатив для пробирок.

Фильтры бумажные.

Пробирки П1, П2, П4-25 по ГОСТ 25336.

Воронки В или ВФ по ГОСТ 25336.

Пипетки 1-2-1, 2-2-1, 4-2—1, 5-2-1, 2—2-20 по ГОСТ 29169.

Колбы 1—2—50, 1—2—200, 1—2—500, 1—2—2000, 2-2—50, 2-2- 200, 2—2—500, 2-2-2000 по ГОСТ 1770.

Бутыль темного стекла вместимостью 2000 см³ по нормативно-тех­нической документации.

Краситель «Амидо черный 10 Б» (1-амино-2,7-бис (и-нитрофенила- зо)-8-оксинафталин-3,6-дисульфокислоты динатриевая соль) по ТУ 6— 09—05—557, ч. д. а.

Кислота лимонная по ГОСТ 3652, х. ч. или ч. д. а.

Натрий ортофосфат двузамещенный, 12-водный по ГОСТ 4172, х. ч. или ч. д. а. или натрий отофосфат двухзамещенный, х. ч. или ч. д. а.

Кислота серная по ГОСТ 4204, х. ч. или ч. д. а.

Натрия гидроксид по ГОСТ 4328, х. ч. или ч. д. а.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Допускается применение других средств измерений с метрологичес­кими характеристиками и оборудования с техническими характерис­тиками не хуже, а также реактивов по качеству не ниже вышеуказан­ных.

Взвешивают 31,70 г лимонной кислоты и 8,40 г ортофосфата на­трия. Результат взвешивания записывают с округлением до 2-го деся­тичного знака. Реактивы помещают в колбу вместимостью 500 см³ и добавляют в нее 400 см³ воды. Колбу нагревают до температуры выше 70 °С. Затем содержимое колбы перемешивают до полного растворения веществ и охлаждают до температуры (20±2) °С.

Навеску 4,60 г красителя, взвешенного с отсчетом до 0,01 г, поме­щают в колбу вместимостью 500 см³ и добавляют в нее 200 см³ воды. Колбу нагревают до температуры не выше 70 °С и затем перемешива­ют содержимое ее до растворения красителя.

Раствор отфильтровывают через бумажный фильтр в мерную колбу вместимостью 2000 см³. Фильтр промывают водой до удаления следов красителя.

В эту же колбу переносят буферный раствор, приготовленный по п. 2.2.1.

Содержимое колбы охлаждают до температуры (20±2) °С. Колбу доливают водой до метки, закрывают резиновой пробкой и перемеши­вают ее содержимое путем переворачивания колбы не менее шести раз.

Раствор должен иметь (2,3±0,1) ед. pH. Если pH раствора не соот­ветствует данному значению, исправляют его добавлением концентри­рованной серной кислоты или гидроксида натрия. Раствор, разбавлен­ный в 50 раз, должен иметь оптическую плотность (0,82±0,02) на длине волны 590 нм в кювете с рабочей длиной 10 мм. Если оптичес­кая плотность раствора не соответствует данному значению, то исправ­ляют ее добавлением буферного раствора или раствора красителя.

Раствор следует использовать только после 12 ч выдержки.

Раствор должны хранить в холодильнике в бутыли из темного стек­ла не более 4 мес, еженедельно проверяя и исправляя значения pH и оптической плотности.

Следует избегать встряхивания, так как при этом образуется труд­норазрушимая пена.

ГОСТ 25179-90

Х-7,78 Z)—1,34,

где D — измеренная оптическая плотность, ед. оптич. плотности;

1,34 — эмпирический коэффициент, %.

За окончательный результат измерения принимают среднее ариф­метическое значение результатов вычислений двух параллельных на­блюдений, округляя результат до второго десятичного знака.

При расхождении между результатами измерений, полученными в разных лабораториях более чем на 0,1 % массовой доли белка, измере­ние проводят по ГОСТ 23327.

3. РЕФРАКТОМЕТРИЧЕСКИЙ МЕТОД

Рефрактометрический метод основан на измерении показателей пре­ломления молока и безбелковой молочной сыворотки, полученной из того же образца молока, разность между которыми прямо пропорцио­нальна массовой доле белка в молоке.

водяной бани закрытого типа для флаконов.

Центрифуга для измерения массовой доли жира в молоке по норма ­тивно-технической документации.

Электроплитка номинальной мощностью 1000 Вт по ГОСТ 14919.

Колбы 1-1000-2, 2-1000-2 по ГОСТ 1770.

Пипетки 1-2-1, 2-2-1, 2-2-5, 4-2-1, 5-2-1 по ГОСТ29169.

Флаконы из стеклянной трубки для лекарственных средств, типа ФО, вместимостью 10 см³ по ТУ 64—2—10.

Пробки резиновые по нормативно-технической документации.

Кальций хлористый 2-водный по ТУ 6—09—5077.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Допускается применение других средств измерений с метрологичес­кими характеристиками и оборудования с техническими характеристи­ками нс хуже, а также реактивов по качеству нс ниже вышеуказанных.

Навеску 40,0 г хлористого кальция помещают в колбу вместимос­тью 1000 см³, приливают к ней 500 см³ воды и перемешивают до полного растворения соли. Содержимое колбы нагревают до темпера­туры (20±2) °С и доводят водой до метки.

Помещают флаконы в водяную баню, наливая в баню воду так, чтобы ее уровень достигал половины высоты флаконов. Баню закры­вают, помещают на электроплитку, доводят воду в бане до кипения и кипятят не менее 10 мин. Не открывая бани, сливают горячую воду через отверстия в крышке, наливают в баню холодную воду и выдер­живают в ней не менее 2 мин.

Открывают баню, извлекают флаконы и разрушают белковый сгу­сток путем энергичного встряхивания флаконов.

Флаконы помещают в центрифугу и центрифугируют не менее 10 МИН. Образовавшуюся прозрачную сыворотку отбирают пипеткой и наносят на измерительную призму рефрактометра 1—2 капли. Закры­вают измерительную призму осветительной.

Наблюдая в окуляр рефрактометра, специальным корректором уби­рают окрашенность границы света и тени. Для улучшения резкости іранйцы измерение проводят через 1 мин после нанесения сыворотки На призму, так как за это время из пробы удаляется воздух и лучше смачивается поверхность осветительной призмы.

х=x-x_v

где X — среднее арифметическое значение результатов наблюдения по шкале «Белок» для молока, %

;ГОСТ 25179-90

.Г, — среднее арифметическое значение результатов наблюдения по шкале «Белок» для сыворотки, %.

За окончательный результат измерения принимают среднее ариф­метическое значение результатов двух параллельных вычислений мас­совой доли белка, округляя результат до второго десятичного знака.

При расхождении между результатами измерений, полученными в разных лабораториях более чем на 0,1% массовой доли белка, измере­ние проводят по ГОСТ 23327.

4. МЕТОД ФОРМОЛЬНОГО ТИТРОВАНИЯ

Метод применяют при условии согласия с поставщиком.

Метод формольного титрования основан на нейтрализации кар­боксильных групп моноаминодикарбоновых кислот белков раствором гидроксида натрия, количество которого, затраченное на нейтрализа­цию, пропорционально массовой доле белка в молоке.

Анализатор потенциометрический с диапазоном измерения от 4 до 10 ед. pH с ценой деления 0,05 ед. pH.

Блок автоматического титрования, аппаратурно совместимый с по­тенциометрическим титратором и имеющий дозатор раствора (бюрет­ку) вместимостью не менее 5 см³ с ценой деления не более 0,05 см³.

Секундомер механический типа СОПир 3-го класса.

Колбы 1—1000—2, 2-1000-2 по ГОСТ 1770.

Пипетки 2-2—5, 2-2-20 по ГОСТ29Д69.

Воронки ВК по ГОСТ 25336.

Стаканы В-1—50, В-2—50 по ГОСТ 25336.

Натрия гидроксид, стандарт-титр по ТУ 6—09—2540, раствор с мо­лярной концентрацией 0,1 моль/дм³.

Формальдегид, водный раствор с массовой долей формальдегида 30% по ГФ СССР, № 619.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Допускается применение других средств измерений с метрологичес­кими характеристиками и оборудования с техническими характеристи­ками не хуже, а также реактивов по качеству не ниже вышеуказанных.

Э7Я www.normacs.ruПодключают блок автоматического титрования к анализатору со­гласно инструкции, прилагаемой к блоку. Затем подключают блок и анализатор к сети и прогревают их в течение 10 мин.

Заполняют дозатор блока автоматического титрования раствором гидроксида натрия.

Согласно инструкции, прилагаемой к потенциометрическому ана­лизатору, настраивают последний на такой диапазон измерения pH, который включал бы в себя рН=9.

Согласно инструкции, прилагаемой к блоку автоматического титро­вания, настраивают его на точку эквивалентности, равную 9 единицам pH, подачу раствора по каплям начиная с рН=4 и 30-секундную вы­держку после достижения точки эквивалентности.

Для определения поправки к результатам измерения массовой доли белка методом формольного титрования проводят одновременное из­мерение массовой доли белка в одном и том же образце молока мето­дом формольного титрования и по ГОСТ 23327.

Измерения проводят на средней пробе молока, полученной путем смешивания равных по массе образцов молока, полученных от разных хозяйств. При этом средняя проба должна быть образована не менее чем от 75 % всех хозяйств — сдатчиков молока.