розчині з рН 5,0 до концентрації мг/дм3: 12, 10,8, 6, 4згідно з таблицею Б.1.
Таблиця Б.1 — Концентрації основних розчинів для готування розведень нізину
Основний розчин, см3 |
Фосфатний буферний розчин, см3 |
Концентрація нізину, мг/дм3 |
1,0 |
3,0 |
12 |
1,0 |
3,8 |
10 |
1,0 |
5,0 |
8 |
1,0 |
7,0 |
6 |
0,5 |
5,5 |
4 |
Отримані розведення використовують під час будування градуйованої кривої, за якою визначають залишкову кількість нізину в продукті.
Б.2.4 Готування проби до аналізу
Згущене молоко розводять 0,02 н. розчином соляної кислоти у співвідношенні 1:4 (8 см3 молока і 32 см3 кислоти) в хімічному стакані місткістю 50 см3. Кислотність отриманої суміші доводять концентрованою соляною кислотою до рН 2,0. Суміш нагрівають до кипіння і охолоджують за температури 20 оС.
Частину суміші розводять у 5 разів фосфатним буферним розчином з рН 5,0. Отримане розведення використовують як випробовувальну пробу.
Другу частину суміші доводять 0,5 н. розчином гідроксиду натрію до рН 11,0, витримують у термостаті за температури 55 оС протягом 2 год і охолоджують за температури 20 оС. Кислотність суміші знов доводять до рН 2,0 і розводять фосфатним буферним розчином з рН 5,0 у 5 разів. У цьому разі нізин, що залишився у продукті, руйнується, а інші антибіотики, присутні у молоці, не інактивуються. Оброблена таким чином частина суміші є контрольною пробою.
Б.3 Аналізування
Б.3.1 В горизонтально встановлений стерильний металевий лоток заливають 200 см3 живильного середовища.
Б.3.2 В колбу, що містить 100 см 3 розплавленого живильного середовища додають 1 см3 твину-20 чи твину-80, охолоджують за температури 55 оС і вносять 2 см3 суспензії культури Bac.coagulans № 15, яку готують згідно з Б.2.2. Вміст колби виливають на нижній прошарок живильного середовища.
Б.3.3 Після того, як верхній прошарок живильного середовища загуснув, в ньому роблять лунки стерильним металевим стрижнем.
Б.3.4 В лунки за допомогою піпеток вносять по 0,1 см3 усіх розведень основного розчину нізину, випробовувальної і контрольної проб у трьох паралельних визначеннях.
Б.3.5 Лоток залишають на 24 год за температури від 10 оС до 12 оС, щоб надати можливості нізину дифундувати в агар. Потім лоток розміщують в термостаті на проміжок часу від 16 год до 18 год за оптимальної температури росту тест-культури 55 оС. Кількість нізину розраховують згідно з поградуйованим графіком.
Б.4 Оцінювання результатів
Б.4.1 Будування градуйованої кривої
Згідно з отриманими даними діаметрів зон відсутності росту тест-культури для усіх розведень основного розчину нізину будують градуйовану криву.
На напівлогарифмічній сітці на осі абсцис, яка виражена в лінійних координатах, відкладають діаметри зон відсутності росту тест-культури в міліметрах (середнє арифметичне трьох паралельних визначень), а на осі ординат, яка виражена в логарифмічних координатах, відповідну концентрацію нізину в розчині в мг/дм3. Крапки з’єднують і отримують поградуйовану криву.
Б.4.2 Розрахунок залишкових кількостей нізину.
На осі абсцис відмічають крапками середньоарифметичне значення діаметрів зон відсутності росту тест-культури у випробовувальній пробі, потім відновлюють перпендикуляр до перехрестя з поградуйованою кривою і проводять паралельні осі абсцис лінії до перехрестя з віссю ординат, де знаходять концентрацію нізину. Множенням цього значення на ступінь розведення 5, отримують вміст нізину в мг/дм3 у пробі, що визначають.
ДОДАТОК В (довідковий)
БІБЛІОГРАФІЯ
Ключові слова: молочні консерви, молоко згущене стерилізоване, органолептичні, фізико-хімічні показники, промислова стерильність, паковання, марковання, методи контролювання, гарантії виробника.
Редактор С. Ковалець
Технічний редактор О. Марченко Коректор І. Дьячкова Верстальник В. Ковальов
Підписано до друку 25.05.2006. Формат 60 х 84 1/8. Ум. друк. арк. 1,86. Зам.Цінадоговірна.
Відділ науково-технічного редагування та термінології нормативних документів ДП «УкрНДНЦ» 03115, м. Київ, вул. Святошинська, 2