За результат вимірювання беруть середнє арифметичне з двох результатів паралельних визначань, розходження між якими (збіжність вимірювань) не повинно перевищувати 1,5 %. Абсолютна похибка вимірювання за довірчої ймовірності Р = 0,95 не повинна перевищувати ± 3,5 %.
Метод полягає у хроматографічному розділенні олії, що досліджують, на компоненти, масову частку яких розраховують методом нормалізації.
Хроматограф газовий з полуменево-іонізаційним детектором — згідно з чинним нормативним документом.
Колонка хроматографічна з нержавкої сталі або скла завдовжки від 200 см до 300 см, із внутрішнім діаметром 0,3 см.
Колонка хроматографічна капілярна кварцова завдовжки 5000 см, із внутрішнім діаметром 3,2-10-2см.
Мікрошприц типу МШ-1 чи газохром-101 місткістю 1-10-3 см3 (1 мкл) з ціною поділки 0,02 10-3 (0,02 мкл) згідно з чинним нормативним документом.
Лінійка вимірювальна металева — згідно з ГоСт 427.
Лупа вимірювальна — згідно з ГОСТ 25706 або інтегратор будь-якого типу.
Ваги лабораторні загального призначення 2-го і 4-го класу точності з найбільшою межею зважування 200 г і 500 г — згідно з ГОСТ 24104.
Набір гир — згідно з ДСТУ ГОСТ 7328.
Термометр скляний, діапазон вимірювання температури від 0 оС до 150 оС, ціна поділки 1 оС — згідно з ГОСТ 28498.
Витратовимірювач пінний будь-якого типу — згідно з чинним нормативним документом.
Піч муфельна з діапазоном автоматичного регулювання температури від 550 оС до 1000 оС — згідно з чинним нормативним документом.
Сушильна шафа з діапазоном регулювання температури в робочій камері від 50 оС до 150 оС — згідно з чинним нормативним документом.
Піпетки 1—2—5 — згідно з ГОСТ 29227.
Циліндр 1—100 — згідно з ГОСТ 1770.
Колби Кн—2—250—29/32 ХС, Кн—2—100—29/32 ТС — згідно з ГОСТ 25336.
Баня водяна чи колбонагрівач будь-якого типу — згідно з чинним нормативним документом.
Повітря стиснене — згідно з ГоСт 17433. Дозволено застосовувати повітряні компресори будь-якого типу, які забезпечують тиск і частоту повітря відповідно до інструкції з експлуатування газового хроматографа.
Водень технічний марки А — згідно з ГОСТ 3022 чи аналітичний, що виробляє генератор водню типу СГС-2.
Газ-носій — азот — згідно з ГОСТ 9293, що стиснено у балоні, або гелій газоподібний вищої очистки 99,0 % — 99,5 % — згідно з чинним нормативним документом [6].
Носій твердий Хроматон N-AW-DMCS, розмір часток (від 0,20 мм до 0,25 мм) від 60 меш до 80 меш — згідно з чинним нормативним документом.
Нерухлива фаза: ХЕ-60 (5 % від маси твердого носія) — згідно з чинним нормативним документом.
Нерухлива фаза: ПЕГ-20М (3 % від маси твердого носія) — згідно з чинним нормативним документом.
Нерухлива фаза OV-101 — згідно з чинним нормативним документом.
Хлороформ — згідно з ГОСТ 20015.
Кислота соляна — згідно з чинним нормативним документом [7].
Ацетон — згідно з ГОСТ 2603.
Гексан — згідно з чинним нормативним документом [8].
Спирт етиловий ректифікований — згідно з ДСТУ 4221.
Вода дистильована (рН 7) — згідно з ГОСТ 6709.
Універсальний індикаторний папір — згідно з чинним нормативним документом [9].
Дозволено використовувати інші засоби вимірювання з аналогічними чи вищими технічними та метрологічними характеристиками, а також реактиви, що за якістю не гірші зазначених. Усі засоби вимірювань повинні бути перевірені.
Твердий носій (хроматон) заливають концентрованою соляною кислотою. Через (1—2) год носій відмивають спочатку водопровідною, а потім дистильованою водою до рН 7. Контроль водневого показника здійснюють за допомогою індикаторного паперу.
Після промивання носій сушать у сушильній шафі за температури від 140 оС до 150 оС протягом (2,5—3,0) год, а потім прожарюють у муфельній печі за температури від 850 оС до 900 оС протягом (5—6) год.
Нерухливу фазу (НФ) наносять таким чином: носій масою від 7,00 г до 8,00 г засипають у круглодонну колбу місткістю 250 см3 та підігрівають на водяній бані з температурою води від 45 оС до 50 оС протягом 10 хв. НФ у кількості від 0,35 г до 0,40 г зважують у колбі місткістю 100 см3 і розчиняють у (60—70) см3 хлороформу. Зважування проводять із записом результату до другого десяткового знака. Розчин НФ доливають до твердого носія. Розчинник випарюють за допомогою колбонагрівача чи водяної бані з температурою води від 90 оС до 95 оС за умови безперервного обертання колби у нахиленому положенні.
Готовий сорбент повинен бути сипучим та не мати грудок.
Колонку перед заповненням сорбентом промивають послідовно водним розчином соляної кислоти з масовою часткою кислоти 10 %, водопровідною, дистильованою водою до нейтральної реакції за індикаторним папером (рН 7), потім хлороформом, гексаном і ацетоном. Після закінчення промивання колонку сушать, пропускаючи через неї струмінь сухого повітря протягом однієї години.
Заповнення колонки сорбентом здійснюють згідно з ГОСТ 14618.5.
Заповнену колонку закріплюють у термостаті хроматографа, не приєднуючи до детектора, підвищують температуру термостата зі швидкістю 1 оС/хв від 35 оС до (170 ± 5) оС та витримують протягом 3 год. Потім температуру знижують до (150 ± 5) оС і продувають потоком газу-носія з витратою від 10 см3/хв до 15 см3/хв протягом від 3 год до 4 год. Підготовлену таким чином колонку приєднують до детектора і перевіряють стабільність нульової лінії.
Монтування, налагоджування та введення хроматографа у робочий режим здійснюють згідно з інструкцією до приладу.
Таблиця 2 — Умови хроматографування ефірної олії з кропу на різних колонках
Хроматографічні колонки
Набивна полярна
Капілярна неполярна
Набивна середньої полярності
Колонка сталева 300 см, внутрішній діаметр 0,3 см. Твердий носій Хроматон N-AW-DMCS (60—80) меш. Детектор полуменево-іонізаційний.
Нерухлива фаза: ХЕ-60 (5 % від маси твердого носія).
Температура термостата: програмування температури від 80 °С до 160 °С зі швидкістю 3 °С/хв. Температура випарника: 230 оС. Температура детекторного блока:
230 °С.
Газ-но сій — азот, швидкість потоку:
40 см3/хв.
Нерухлива фаза: ПЕГ-20М (3 % від маси твердого носія). Температура термостата: програмування температури від 80 °С до 160 °С зі швидкістю 3 °С/хв.
Температура випарника: 180 °С. Температура детекторного блока: 200 °С.
Газ-носій — азот, швидкість потоку: 40 см3/хв.
Колонка кварцова завдовжки 5000 см, діаметр 3,210-2 см. Детектор полуменево-іонізаційний. Нерухлива фаза — OV-101. Температура термостата: початкова ізотермічна температура 80 °С впродовж 5 хв, далі — зі швидкістю 1,5 °С/хв до 120 °С, далі — зі швидкістю 3 °С/хв до 160 °С.
Температура випарника: 250 °С. Температура детектора: 260 °С. Газ-носій — азот, тиск на вході у колонку — 150,0 кПа.
Розподіл потоку: 1/52.
Пробу ефірної олії вводять у випарник хроматографа мікрошприцом, проколюючи ґумову прокладку, що самоущільнюється.
Типові хроматограми ефірної олії кропу наведені у додатку Б.
С-^к-
(1)
Ск n
Z Si
2
i-1
де 8к — площа піка карвону, мм
І Si —
i-1
сума площ піків усіх компонентів, мм2.
S = h • d0,5,(2)
де h — висота піка, мм;
do,5 — ширина піка, яку вимірюють на половині його висоти, мм.
Обчислювання проводять із точністю до другого десяткового знака з наступним округленням до першого десяткового знака. Результат записують у робочому журналі у вільній формі.
За результат вимірювання беруть середнє арифметичне з двох результатів паралельних визначань, розходження між якими (збіжність вимірювань) не повинно перевищувати 1,5 % для набивної колонки та 0,3 % для капілярної колонки. Абсолютна похибка вимірювання не повинна перевищувати ± 2,5 % для набивної колонки та ± 1,0 % для капілярної колонки за довірчої ймовірності Р = 0,95.
11 ПРАВИЛА ПРИЙМАННЯ
ДОДАТОКА (довідковий)
ХРОМАТОГРАФІЧНИЙ ПРОФІЛЬ ЕФІРНОЇ ОЛІЇ З КРОПУ
Хроматографічний профіль, наведений у таблиці А.1, складено згідно з ДСТУ ISO 11024-1 на підставі хроматографічного аналізу зразків ефірної олії з кропу, що виготовлені за останні 10 років. Профіль відбиває кількісну оцінку олії за характерними складовими, масову частку яких розраховано за методом нормалізації. Компонентний склад ефірної олії з кропу визначають за вимогою споживача.
Таблиця А.1 — Хроматографічний профіль ефірної олії з кропу
|
Компоненти |
Мінімум, % |
Максимум, % |
|
Феландрен |
11,0 |
35,0 |
|
Лимонен |
9,5 |
30,0 |
|
Карвон |
26,0 |
46,0 |
ДОДАТОК Б (довідковий)
ТИПОВІ ХРОМАТОГРАМИ ЕФІРНОЇ ОЛІЇ З КРОПУ
3
Ідентифіковані піки
1 — a-пінен;
9 — карвон.
Умови хроматографування
Колонка сталева 300 см, внутрішній діаметр 0,3 см. Твердий носій Хроматон N-AW-DMCS (60—80) меш. Нерухлива фаза: ХЕ-60 (5 % від маси твердого носія). Температура термостата: програмування температури від 80 °С до 160 °С зі швидкістю 3 °С/хв. Температура випарника: 230 °С.
Температура детекторного блока: 230 °С.
Газ-носій — азот, швидкість потоку: 40 см3/хв. Детектор полуменево-іонізаційний.
Рисунок Б.1 — Типова хроматограма ефірної олії з кропу на набивній колонці середньої полярності
0
10
20
15
25
30
35 хв
Ідентифіковані піки
1 — a-пінен;
10 — карвон.
Умови хроматографування
Колонка сталева 300 см, внутрішній діаметр 0,3 см. Твердий носій Хроматон N-AW- DMCS (60—80) меш. Нерухлива фаза: ПЕГ-20М (3 % від маси твердого носія). Температура термостата: програмування температури від 80 °С до 160 °С зі швидкістю 3 °С/хв.
Температура випарника: 180 °С.
Температура детекторного блока: 200 °С.
Газ-носій — азот, швидкість потоку: 40 см3/хв.
Детектор полуменево-іонізаційний.
Рисунок Б.2 — Типова хроматограма ефірної олії з кропу на набивній полярній колонці
4 5
13
8
3
1
10
17
9
20
2
11
b
І 12
Iw
14 15
23
.IL
EJi
-UL
-1_
10
20
30
40 хв
0
Умови хроматографування
Колонка кварцова, завдовжки 5000 см, діаметр 3,210-2 см.
Нерухлива фаза — OV-101.
Температура термостата: початкова ізотермічна температура 80 °С впродовж 5 хв, далі — зі швидкістю 1,5 °С/хв до 120 °С, далі — зі швидкістю 3 °С/хв до 160 °С Температура випарника 250 °С.
Температура детектора 260 °С.
Газ-носій — азот, тиск на вході у колонку 150,0 кПа.
Розподіл потоку 1/52.
Детектор полуменево-іонізаційний.
Рисунок Б.3 — Типова хроматограма ефірної олії з кропу на капілярній неполярній колонці
Ідентифіковані піки
1 — a-пінен;
3 — лимонен;
5 — феландрен;
13 — карвон.
ДОДАТОК В (довідковий)
БІБЛІОГРАФІЯ
Код УКНД 71.100.60
Ключові слова: ефірна олія з кропу, карвон, метод нормалізації, метод парової дистиляції, хроматограма, хроматографічний профіль.
Редактор О. Чихман Технічний редактор О. Марченко Коректор І. Копацька Верстальник Ю. Боровик
Підписано до друку 20.11.2007. Формат 60 х 84 1/8. Ум. друк. арк. 1,39. Зам.Цінадоговірна.
