---

Для определения Cl. botulinum готовят препараты-отпечатки по п. 3.3.1 и окрашивают по Граму и метиленовым синим, после чего микроскопируют.

Обнаружение в препаратах-отпечатках грамположительных толстых палочек с закругленными концами, палочек со спорами, имеющих вид пламени свечи или теннисной ракетки, указывает на возможность Cl. botulinum.

Взвесь готовят по п. 4.1.1 и делают посев в две пробирки со средой Китт-Тароцци. Среду предварительно кипятят в течение 20 мин. Взвесь вносят в каждую пробирку по 2—3 см³. После посева одну из пробирок прогревают в течение 15 мин при темпе­ратуре 80°С для уничтожения вегетативной микрофлоры. Посевы помещают на 24—92 ч в термостат при температуре 37°С. За ростом бактерий наблюдают ежедневно. Если возбудители боту-

20.06.2007 16:42:05 Система NormaCS® www.normacs.r

Условные обозначения: «+» — подвижные;

<—» — неподвижные.

лизма находятся в вегетавной форме, то будет наблюдаться рост в непрогретой пробирке. В случае наличия споровых форм рост будет наблюдаться как в прогретой пробирке, так и в непрогретой.

Рост Cl. botulinum характеризуется газообразованием и помут- нєниєм среды»

Для приготовления мазков пастеровской пипеткой берут куль­туру со дна пробирки. Мазки окрашивают по Граму и микроско- пируют.

Возбудитель ботулизма имеет вид палочек с закругленными концами различной длины и ширины (в зависимости от типа), часто коротких цепочек. Клетки со спорой имеют вид ракетки, отделившиеся споры — овальные. Клетки в молодом возрасте грамположительные. При старении культуры (четырех и более суток) появляются грамотрицательные палочки.

Для проведения биологической пробы при определении ботули­нического токсина анализируемый материал растирают в ступке со стерильным физиологическим раствором 1 :4 и оставляют при комнатной температуре на 1—2 ч, после чего центрифугируют при 3000 об/мин в течение 15—20 мин. Полученную надосадочную жидкость можно хранить в холодильнике при температуре 4±2°С и испытывать по мере необходимости. Пробы ставят на мышах.

Анализ на ботулинический токсин в мясе проводят следующим образом. Вначале ставят реакцию нейтрализации со смесью про- тивоботулинических сывороток. Смешивают разные объемы моно­валентных сывороток типа А, В, С, Е, F и 0,6 см³ полученной сме­си добавляют в пробирку к 2,4 см³ исследуемого центрифугата. В другую (контрольную) прбирку к 2,4 см³ исследуемого центрифу­гата добавляют 0,6 см³ физиологического раствора. Содержимое пробирок перемешивают и выдерживают в течение 30 мин при тем­пературе 18—24°С. Для биологической пробы анализируемый цент- рифугат вначале отбирают из контрольной, а затем из опытной пробирки по 1 см³ и вводят двум белым мышам массой по 16—18 г каждая. Осадок центрифугата сохраняют в холодильнике для дальнейшего исследования.

Наблюдение за животными ведут на протяжении 2, 4, 6, 24 ч в течение четырех суток.

При наличии ботулинического токсина две контрольные мыши (которым вводился несмешанный с сывороткой центрифугат) бо­леют, а иногда погибают, у мышей, которым вводился смешанный с сыворотками центрифугат, признаков заболевания ботулизмом не наблюдается.

В случае гибели контрольных и опытных мышей реакцию ней­трализации повторяют с экстрактом мяса, разведенным в 5, 10, 20 раз, что дает возможность избавиться от веществ, вызываю­щих нехарактерную гибель мышей.

43;

20.06.2007 16:42:06

Стр. 33 ГОСТ 20235.2—74

Если в центрифугате обнаружен ботулинический токсин, то для определения типа токсина ставят развернутую реакцию ней­трализации с моновалентными типоспецифическими антитоксиче­скими диагностическими сыворотками.

Для этого в шесть пробирок разливают по 2,4 см³ фильтрата, затем в каждую пробирку добавляют по 0,6 см³ сыворотки типа А, В, С, Е и F, а в шестую контрольную пробирку добавляют 0,6 см3 физиологического раствора. Приготовленную смесь выдер- живают в течение 30 мин при температуре 18—24 или 37°С, после чего вводят по 1 см³ каждой смеси внутрибрюшно двум мышам. Для взятия пробы из каждой пробирки используют ЧИСТЫЙ шприц. Результаты учитывают в течение четырех суток через 4—6 ч, затем через 24 ч. Выживают мыши, получившие смесь токсина и гомо­логической сыворотки, остальные мыши погибают.

Типовую принадлежность определяют по типам сывороток, нейтрализующих токсин.

Обнаружение палочек, типичных по морфологии для Cl. botu­linum и ботулинического токсина, указывает на заражение мяса кролика возбудителем ботулизма.&с

V

Редактор Г. И. Василенко
Технический редактор Э, В. Митяй
Корректор Г. Я. Чуйко

Сдано в наб. 29.11.85 Подп. в’печ. 29.01.86 2,75 усл. п. л. 3,0 усй.-кр.-отт. 2,92 уч.-изд. л.
Тираж 10 000 Цена 15 коп.

Ордена <3нак Почета» Издательство стандартов, 123840, Москва, ГСП,
НоводресненскиЙ пер., д. 3.

Вильнюсская типография Издательства стандартов, ул. Миндауго, 12/14. Зак. -5334.

Система NormaCS® www.normacs.ru 20.06.200716:41:55