---

Кислота серная по ГОСТ 4204 или кислота серная техническая по ГОСТ 2184, плотностью 1,81-1,82 г/см³.

Спирт изоамиловый по ГОСТ 5830.

(Измененная редакция, Изм. № 1).

В жиромер наливают прибором для отмеривания 10 см³ серной кислоты и по стенке жиромера осторожно приливают пипеткой 8,0—8,5 см³ воды. Взвешивают на пергаментной бумаге (3,00+0,01) г подготовленной пробы казеина. Через стеклянную сухую воронку, вставленную в горлышко жироме­ра, постепенно высыпают навеску казеина, медленно поворачивая жиромер при этом вокруг оси с целью равномерного распределения казеина и предупреждения образования комочков. Отдельные зер­на казеина, задержавшиеся на воронке, стряхивают в жиромер легким постукиванием о воронку. Приливают 1 см³ изоамилового спирта, закрывают горлышко жиромера сухой резиновой пробкой и сразу (не переворачивая жиромер) осторожным встряхиванием смешивают казеин с серной кислотой так, чтобы зерна казеина не попали в градуированную часть жиромера.

Жиромер ставят пробкой вверх в водяную баню с температурой воды (65+2) °С и выдерживают в ней, периодически встряхивая, до полного растворения казеина.

Затем жиромер два-три раза переворачивают, давая стечь кислоте из градуированной части, а при наличии нерастворившихся частиц ставят его опять в водяную баню до полного растворения казеина.

Жиромер центрифугируют два раза (5 и 8 мин) с угловой скоростью не менее 105 рад/с (не менее 1000 об/мин). После первого центрифугирования жиромер нагревают в водяной бане при темпе­ратуре (65+2) °С в течение 5 мин. При образовании «пробки» темно-бурого цвета жиромер перед вторым центрифугированием встряхивают.

После второго центрифугирования и выдержки жиромера в течение 5 мин в водяной бане при температуре (65+2) °С отсчитывают количество жира по нижней точке мениска с точностью до половины малого деления шкалы.

Столбик жира должен быть прозрачным. При наличии «пробки», занимающей более половины малого деления шкалы жиромера, или при обнаружении различных примесей в жировом слое анализ проводят повторно.

Массовую долю жира в техническом казеине (Х₁) в процентах вычисляют по формуле где а — показание жиромера в делениях шкалы;

11 — коэффициент для перевода показаний жиромера в проценты;

т — масса навески казеина, г.

Массовую долю жира в сухом веществе казеине (Х₂) в процентах вычисляют по формуле

X1

100 - X

■ 100

где X — массовая доля влаги в казеине, %;

Х₁ — массовая доля жира в казеине, %

.Массовую долю жира в казеине вычисляют до второго десятичного знака и округляют до первого.

За окончательный результат анализа принимают среднеарифметическое результатов двух парал­лельных определений, допускаемые расхождения между которыми не должны превышать 0,2 %.

Метод применяется при возникновении разногласия в оценке качества.

Весы лабораторные рычажные 1-го класса точности, наибольший предел взвешивания 200 г, цена поверочного деления 0,0001 г, по ГОСТ 24104.

Весы лабораторные рычажные 3-го класса точности, наибольший предел взвешивания 200 г, цена поверочного деления 0,002 г, по ГОСТ 24104.

Шкаф сушильный лабораторный или шкаф сушильный лабораторный электрический типа СНОЛ или шкаф вакуумный типа ВШ-0,035 А.

Баня водяная с регулируемым обогревом.

Плитка электрическая по ГОСТ 14919.

Колбы мерные для экстрагирования, исполнения 2, вместимостью 250 см³ по ГОСТ 1770, с пришлифованными пробками.

Колбы мерные, исполнения 2, вместимостью 100 и 1000 см³ по ГОСТ 1770, с пришлифованны­ми пробками.

Аппарат для перегонки: холодильник стеклянный лабораторный по ГОСТ 25336; колбы коничес­кие типа Кн исполнения 1, номинальной вместимостью 250 см³, по ГОСТ 25336 для перегонки с конусом горловины 29/32 с пришлифованными пробками; баня с регулируемым обогревом.

Цилиндры исполнения 2, вместимостью 10, 25, 50 и 1000 см³, по ГОСТ 1770.

Стаканы типа В или Н исполнения 1, номинальной вместимостью 100 см³, по ГОСТ 25336.

Эксикатор по ГОСТ 25336.

Пипетки исполнения 1 вместимостью 1 см³ и исполнения 2 вместимостью 10 см³.

Палочки стеклянные оплавленные.

Воронка делительная типа ВД, исполнения 1, номинальной вместимостью 500 см³ по ГОСТ 25336.

Термометры ртутные стеклянные лабораторные типа Б, с диапазонами измерения шкалы 0—100 и 0—250 °С, ценой деления шкалы 1 °С по ГОСТ 28498.

Материал, облегчающий кипение, обезжиренный, непористый, не ломкий при употреблении: стеклянные шарики или кусочки карборунда (применение его не обязательно).

Кальций хлористый по ТУ 6—09—4711, прокаленный, или другой гигроскопический материал.

Кислота соляная, х. ч. или ч. д. а., по ГОСТ 3118, раствор плотностью 1,125 г/см³.

Спирт этиловый ректификованный высшей очистки по ГОСТ 5962¹ или спирт этиловый ректи­фикованный технический по ГОСТ 18300.

Калий йодистый, х. ч. или ч. д. а., по ГОСТ 4232, раствор с массовой концентрацией 100 г/дм³.

Железо (II) сернокислое 7-водное закисное, х. ч. или ч. д. а. по ГОСТ 4148, раствор с массовой концентрацией 100 г/дм³.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Эфир диэтиловый для наркоза по Государственной фармакопее IX, не содержащий перекисей.

Эфир петролейный с температурой кипения 40—60 °С по нормативно-технической документа­ции.

Растворитель смешанный, приготовленный непосредственно перед использованием смешиванием равных объемов диэтилового и петролейного эфиров.

Примечание. При работе с этиловым спиртом, диэтиловым и петролейным эфирами должны быть обеспечены приточно-вытяжная вентиляция и строгое соблюдение всех действующих правил по технике безопасности.

Работу с этими реактивами следует проводить вдали от огня в вытяжном шкафу лаборатории.

(Измененная редакция, Изм. № 1).

Отмеряют цилиндром (670+10) см³ соляной кислоты (плотностью 1,18 г/см³ при 20 °С), перели­вают в мерную колбу вместимостью 1000 см³, доводят объем раствора дистиллированной водой до метки и тщательно перемешивают.

Взвешивают (10,00+0,01) г йодистого калия, количественно переносят в мерную колбу вмести­мостью 100 см³, растворяют дистиллированной водой при периодическом перемешивании. После пол­ного растворения йодистого калия объем раствора доводят дистиллированной водой до метки и тща­тельно перемешивают. Раствор готовят перед использованием.

Взвешивают (10,00+0,01) г сернокислого железа, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 см³, растворяют дистиллированной водой при периодическом перемешивании. Пос­ле полного растворения сернокислого железа объем раствора доводят дистиллированной водой до метки и тщательно перемешивают.

К 10 см³ диэтилового эфира, внесенного в цилиндр с пришлифованной пробкой (предваритель­но ополоснутый диэтиловым эфиром), добавляют 1 см³ раствора йодистого калия. Смесь встряхивают и выдерживают в течение 1 мин. Появление желтой окраски свидетельствует о наличии перекисей.

Для очистки от перекисей к 250 см³ диэтилового эфира, внесенного в делительную воронку, добавляют 10 см³ раствора сернокислого железа и встряхивают. Если водный слой окрашивается в желто-коричневый цвет, то его удаляют, добавляют еще 10 см³ раствора сернокислого железа и снова встряхивают. Добавление сернокислого железа повторяют до прекращения изменения его цвета, кото­рый должен оставаться зеленым.

Свободный от перекисей диэтиловый эфир перегоняют.

Очистку петролейного эфира производят перегонкой его в присутствии безводного молочного жира (0,5 г на 100 см³ эфира).

Конические колбы для перегонки вместе с материалом, облегчающим кипение, сушат 30—60 мин в сушильном шкафу при (102+2) °С или в вакуум-сушильном шкафу при (72+2) °С и давлении 6,66 Па, охлаждают в эксикаторе до комнатной температуры и взвешивают. Взвешивание производят с погрешностью не более 0,0001 г.

Взвешивают в химическом стакане вместимостью 100 см³ 4,99—5,01 г подготовленной пробы казеина.

К навеске казеина добавляют 30 см³ раствора соляной кислоты, отмеренного цилиндром.

Стакан ставят на электроплитку для растворения казеина, которое длится не менее 10 мин. Содержимое стакана при этом перемешивают стеклянной палочкой.

Полученный раствор казеина снимают с плитки и оставляют в покое на 5 мин.

Остывший раствор казеина переносят в колбу для экстрагирования. При этом стакан ополаски­вают 10 см³ этилового спирта, сливая спирт в колбу, аккуратно перемешивают жидкости в колбе, не закрывая ее пробкой.

Повторно ополаскивают стакан 25 см³ диэтилового эфира, сливая растворитель в колбу.

Закрывают колбу пробкой и интенсивно встряхивают, переворачивая ее в течение 30 с.

Осторожно вынимают пробку и добавляют 25 см³ петролейного эфира. При этом первыми 5 см³ ополаскивают пробку и горловину колбы так, чтобы растворитель стекал внутрь. Закрывают колбу, встряхивают, переворачивая ее в течение 30 с, и оставляют в покое на 1,5—2,0 ч, пока верхний эфирный слой не станет совершенно прозрачным и четко не отделится от водного слоя.

Вынимают пробку, ополаскивают ее и горловину колбы смешанным растворителем, сливая его внутрь колбы, и аккуратно декантируют по возможности большую часть эфирного слоя в коническую колбу для перегонки.

Для облегчения декантации в колбу для экстрагирования можно добавить дистиллированную воду с целью подъема поверхности раздела между двумя слоями.

Ополаскивают внутренний и наружный края горловины колбы для экстрагирования 5 см³ сме­шанного растворителя, сливая его в колбу для перегонки.

Из конической колбы для перегонки осторожно отгоняют максимальное количество растворите­лей.

После исчезновения запаха растворителей колбу с содержимым сушат в сушильном шкафу при (102+2) °С или в вакуумном шкафу при (72+2) °С и давлении 6,66 Па в течение 1,5 ч, охлаждают в эксикаторе до комнатной температуры и взвешивают.

Сушку (30—60 мин) и взвешивание повторяют до тех пор, пока разница между двумя последо­вательными взвешиваниями будет не более 0,0005 г.

Если при одном из взвешиваний после высушивания масса увеличится, для расчета берут резуль­таты предыдущего взвешивания.

Для определения наличия нежировых веществ в экстрагированном жире в колбу для перегонки после последнего ее взвешивания добавляют 15—25 см³ петролейного эфира, осторожно нагревают в водяной бане до 35—40 °С и взбалтывают до растворения экстрагированного жира. При этом жир полностью растворяется в петролейном эфире, а нерастворимые примеси оседают на дно. Обработку эфиром повторяют не менее трех раз и столько же раз ополаскивают растворителем наружную сторону горловины колбы.

Перед каждой декантацией колбу оставляют в покое на 1 мин для того, чтобы дать осесть нерастворимому остатку при наличии его в экстрагированном жире.

После полного удаления жира колбу сушат в сушильном шкафу при (102+2) °С или в вакуум- сушильном шкафу при (72+2) °С и давлении 6,66 Па в течение 1 ч, охлаждают в эксикаторе до комнатной температуры и взвешивают.

Разность между массой колбы и жиром и массой колбы после экстрагирования жира петролей- ным эфиром представляет массу экстрагированного жира.

Одновременно с определением массовой доли жира в кислотном техническом казеине проводят контрольную пробу (два параллельных определения) с 10 см³ дистиллированной воды способом, указанным выше. Для расчета берут среднеарифметическое результатов обоих определений.

Если масса осадка при контрольной пробе превышает 0,0005 г, то реактивы следует очистить, как указано в пп. 4.4.2.4 и 4.4.2.5, или заменить.

Массовую долю жира в кислотном техническом казеине (Х₃) в процентах вычисляют по формуле

х_з = ^{т т} )^-b . ,

■’ т

где т — масса навески казеина, г;

т₃ — масса колбы с экстрагированным жиром, г;

т₂ — масса колбы с остатком нерастворимых веществ или пустой колбы, г;

b — средняя величина двух определений контрольной пробы, г.

Массовую долю жира в сухом веществе казеина (Х₄) в процентах вычисляют по формуле

100-X '¹⁰⁰ ,

где X— массовая доля влаги в казеине, %;

Х₃ — массовая доля жира в казеине, %.

Массовую долю жира вычисляют до третьего десятичного знака и округляют до второго.

За окончательный результат анализа принимают среднеарифметическое результатов двух парал­лельных определений, допускаемое расхождение между которыми не должно превышать 0,1 %.