ГОСТ 9.052-88. Единая система защиты от коррозии и старения. Масла и смазки. Методы лабораторных испытаний на стойкость к воздействию плесневых грибов (70308)

УДК 621.892.001.4:006.354 Группа Т99

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ СОЮЗА ССР

Единая система защиты от коррозии и старения
МАСЛА И СМАЗКИ.

Методы лабораторных испытаний на стойкость ГОСТ

к воздействию плесневых грибов 9.052—88

Unified system of corrosion and ageing protection.
Oils and greases.

Laboratory test methods for mould resistance

ОКСТУ 0009

Дата введения 01.01.89

Настоящий стандарт распространяется на масла и смазки и устанавливает методы лабораторных испытаний на стойкость к воздействию плесневых грибов:

1. — для установления грибостойкости масел и смазок при • отсутствии минеральных и органических загрязнений;

2. — для установления грибостойкости смазок в условиях, имитирующих минеральные загрязнения;

3. — для установления грибостойкости масел в условиях, имитирующих минеральные загрязнения;

4. — для установления грибостойкости масел и смазок в условиях, имитирующих минеральные и органические загрязнения.

Смазки, применяемые для оптических приборов, испытывают только методом 1.

Методы применяют при испытании масел и смазок, к которым в стандартах или технических условиях предъявляют требования грибостойкости.

1. МЕТОД 1

   1. Сущность метода заключается в выдерживании образцов зараженных водной суспензией спор грибов, в условиях оптимальных для развития грибов, без дополнительного источника минерального и органического питания.

   2. П

      Издание официальное

      ерепечатка воспрещенаОтбор образцов

      1. Масла и смазки отбирают по ГОСТ 2517—85 массой 10 — 15 г.

      2. Образцами являются масла и смазки в состоянии поставки, без специальной очистки и стерилизации.

      3. Количество параллельных образцов должно быть не менее пяти.

   3. Виды грибов

      1. Для испытаний применяют чистые культуры следующих видов плесневых грибов:

Aspergillus niger van Tieghem

Penicillium chrysogenum Thom

Penicillium cyclopium Westling

Scopulariopsis brevicaulis (Sacc.) Bainier

Paecilomyces varioti Bainier

Рецептура сред приведена в таблице.

Образцы смазок наносят на предметные стекла, покрывая всю поверхность слоем 1,5—2,0 мм, и помещают в чашки Петри.

Для контроля жизнеспособности спор грибов в чашку Петри наливают среду 1 или 4 в количестве 20—30 см³ и дают ей застыть.

1. 6. Проведение испытаний

      1. Водную суспензию спор грибов готовят по ГОСТ 9.048—89, используя грибы, выращенные, как указано в п. 1.5.3.

      2. Предметные стекла в чашках Петри, чашки Петри с образцами масел помещают в бокс. Поверхность образцов заражают водной суспензией спор грибов с помощью пульверизатора, не допуская слияния капель.

      3. Образцы масел и смазок после заражения выдерживают 1—2 ч при температуре (25 ± 10) °С.

      4. Предметные стекла в чашках Петри и чашки Петри с зараженными образцами и средами помещают в эксикатор, на дно которого налита вода. Эксикатор устанавливают в термостат с температурой (29 ± 2) °С.

      5. Образцы выдерживают в термостате 56 сут.

      6. Через 3—7 сут после начала испытаний осматривают контрольную чашку Петри. Если на поверхности среды развитие грибов не наблюдается, споры грибов считают нежизнеспособными. Испытания прекращают и повторяют их на новых образцах с вновь приготовленной суспензией спор из новой партии грибов.

      7. Через 28 сут производят промежуточый осмотр образцов. Испытания образцов, на которых обнаруживают развитие грибов, прекращают.

      8. По окончании испытаний предметные стекла в чашках Петри и чашки Петри извлекают из эксикатора и осматривают образцы.

   7. Обработка результатов

      1. Образцы смазок и масел осматривают под Микроскопом при 50—60-кратном увеличении.

      2. Масла и смазки считают грибостойкими при отсутствии развития грибов на всех испытанных образцах.

2. МЕТОД 2

   1. Сущность метода заключается в выдерживании образцов, зараженных суспензией спор грибов в водном растворе минеральных солей, в условиях, оптимальных для развития грибов, на среде с дополнительным источником минерального питания.

   2. Отбор образцов — по п. 1.2.

   3. Виды грибов — по п. 1.3.

   4. Аппаратура, материалы и реактивы — по ГОСТ 9.048—89.

   5. Подготовка к испытаниям — по пп. 1.5.1—1.5.3, 1.5.5.

      1. Для размещения образцов смазок среду 2 наливают в чашку Петри в количестве 20—30 см³ и дают ей застыть.

   6. Проведение испытаний.

      1. Суспензию спор грибов в среде 5 готовят по ГОСТ 9.048—89.

      2. Смазки наносят скальпелем в количестве пяти образцов размером 10x10 мм толщиной 1,5—2,0 мм на поверхность среды в чашку Петри, подготовленную, как указано в п. 2.5.1.

      3. Дальнейший порядок проведения испытаний соответствует требованиям пп. 1.6.2—1.6.4.

      4. Образцы выдерживают в течение 28 сут.

      5. Дальнейший порядок проведения испытаний — по пп. 1.6.6—1.6.8 с промежуточным осмотром образцов через 14 сут.

   7. Обработка результатов — по тш. 1.7.1, 1.7.2.

3. МЕТОД 3

   1. Сущность метода заключается в выдерживании образцов, зараженных суспензией спор грибов в водном растворе минеральных солей, в условиях, оптимальных для развития грибов, на среде с дополнительным источником минерального питания.

   2. Отбор образцов — по п. 1.2.

   3. Виды грибов — по п. 1.3.

   4. Аппаратура, материалы и реактивы — по ГОСТ 9.048—89.

   5. Подготовка к испытаниям — по пп. 1.5.1 —1.5.3 и 1.5.5.

      1. Для размещения образцов масел готовят пробирки с 2—3 см³ суспензии спор грибов в среде 5.

      2. Контролем служит суспензия спор грибов в среде 5.

   6. Проведение испытаний.

      1. Суспензию спор грибов в среде 5 готовят по ГОСТ 9.048—89.

      2. Образцы масел в количестве 2 см³ вносят не менее чем в пять пробирок, приготовленных, как указано в п. 3.5.1.

      3. Пробирки помещают в наклонном положении под углом 30° и выдерживают в термостате при температуре (29 ± 2) °С.

      4. Пробирки с образцами выдерживают в термостате 10- сут.

      5. Через 5 и 7 сут осматривают образцы. Допускается отбирать пробы минеральной среды из пробирок для оценки грибостойкости биолюминесцентным методом, при этом пробирки с образцами выдерживают в термостате 3 и 5 сут.

При появлении признаков развития грибов в образцах испытания прекращают.

1. 1. 6. По окончании испытаний пробирки с образцами извлекают из термостата и осматривают невооруженным глазом или с помощью лупы при 2,5—5,0-кратном увеличении.

   2. Обработка результатов.

      1. Масла считаются грибостойкими, если отсутствует развитие грибов на всех испытанных образцах (отсутствует пленка на границе раздела среда — масло, в пробирках среда прозрачна и не пигментирована, нет осадка).

      2. Масла считаются не стойкими к плесневым грибам, если на образцах наблюдается развитие грибов, признаком которого служит образование пленки на границе раздела среда — масло, помутнение и пигментация среды, образование осадка.

      3. Допускается оценивать грибостойкость масел биолюминес­центным методом, приведенным в приложении.

2. МЕТОД 4

   1. Сущность метода заключается в выдерживании образцов, зараженных суспензией спор грибов в водном растворе минеральных солей, в условиях, оптимальных для развития грибов, на среде с дополнительным источником минерального и органического питания.

   2. Отбор образцов — по п.1.2.

   3. Виды грибов — по п. 1.3.

   4. Аппаратура, материалы и реактивы — по ГОСТ 9.048—89.

   5. Подготовка к испытаниям — по пп. 1.5.1—1.5.3, 1.5.5.

      1. Для размещения образцов смазок готовят чашки Петри, как указано в п. 2.5.1, используя среду 1 или 4.

      2. Для размещения образцов масел готовят лунки, как указано в п. 1.5.4, используя среду 1 или 4.

   6. Проведение испытаний — по п. 2.6.

      1. Образцы выдерживают в термостате в условиях, приведен­ных в п. 1.6.4, 14 сут.

      2. Промежуточный осмотр образцов производят через 7 сут после начала испытаний.

   7. Обработка результатов — по пп. 1.7.1. и 1.7.2.

ТРЕБОВАНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ — по ГОСТ 9.048—89.ПРИЛОЖЕНИЕ

Обязательное

БИОЛЮМИНЕСЦЕНТНЫЙ МЕТОД ОЦЕНКИ ГРИБОСТОЙКОСТИ

Сущность метода заключается в определении количества внутриклеточной аденоЗин-5'-трифосфорной кислоты динатриевой соли (АТФ) в минеральной среде после испытания масел на грибостойкосгь (п. 3.6 5) с помощью специфической ферментативной хемилюминесцентной реакции с использованием люциферин-люци- феразной системы светляков. Интенсивность излучаемого свечения прямо пропорцио­нальна концентрации АТФ. Концентрация АТФ пропорциональна количеству живых клеток, так как ее содержание зо всех типах живых клеток примерно одинаково и составляет 1 —10 мг/г сухого веса. Этот факт является основой биолюминесцентного метода определения биомассы.

1. Аппаратура, материалы и реактивы

Хемилюминометр медицинский ДЛИ 31.560.000, предназначенный для измерения интенсивности сверхслабого свечения в области спектра .400—600 нм. Допускается использовать другие приборы аналогичного назначения, обеспечивающие измерение световых потоков от 10⁴ до !0⁸ квант/с.

Весы для статического взвешивания по ГОСТ 29329—92.

Термостат, обеспечивающий температуру нагрева до 200 “С.

Холодильник бытовой электрический по ГОСТ ! 6317—87.

Дозатор для отбора проб 0,1 см³.

Лабораторный рН-метр.

Пробирки стеклянные по ГОСТ 25336—82.

Колбы цилиндрические мензурные вместимостью 25 см³ по ГОСТ 1770—74.

Пипетки вместимостью 1, 10 см³ по ГОСТ 29169—91.

Аденозин-5'-трифосфорной кислоты динатриевая соль, 3-водная (АТФ).

Люцифераза светляков.

Люциферин.

.Диметилсульфоксид (ДМСО), х.ч.

Трис-(оксиметил) -аминометан, х.ч.

Кислота уксусная, х.ч. по ГОСТ 61—75.

Магний сернокислый, 7-водный, х.ч. по ГОСТ 4523—77.

Соль динатриевая этилендиамин — A, N,. N', N' — тетрауксусной кислоты, 2-водная (трилон Б) (ЭДТА) по ГОСТ 10652—73.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709—72

2. Подготовка к испытаниям

   1. Стерилизуют посуду по ГОСТ 9.048—89.

   2. Готовят раствор АТФ 1 ммоль/дм³: 13,8 мг АТФ помещают в мерную колбу вместимостью 25 см³, доводят до метки дистиллированной водой и перемешивают до полного растворения. Раствор АТФ 1 ммоль/цм³ разливают на порции объемом 1 см³ и хранят при температуре минус 20 "С. В замороженном виде раствор АТФ допускается хранить не более 3 месяцев.

   3. Готовят стандартный раствор АТФ 10 мкмоль/дм³: порцию раствора АТФ 1 ммоль/дм³ (по п. 2.2) размораживают, отбирают с помощью дозатора 0,1 см раствора и помещают его в пробирку, содержащую 10 см³ дистиллированной воды. Растйор АТФ 10 мкмоль/дм³ готовят непосредственно перед применением.

   4. Готовят 20 %-ный раствор уксусной кислоты: 10 см³ уксусной кислоты разбавляют 40 см³ дистиллированной воды.

   5. Готовят 0,1 моль/дм³ трис-ацетатный буферный раствор с рН-7, б, содержащий 10 ммоль/дм³ сернокислого магния, 2 ммоль/дм³ ЭДТА: в мерную колбу вместимостью 50 см³ загружают 0,605 г трис-(оксиметил)-аминометана, 0,123 г сернокислого магния, 0,036 г ЭДТА, доводят до метки дистиллированной водой и перемешивают до полного растворения. Затем все содержимое колбы переносят в стакан вместимостью 100 см³ и титруют 20 %-ным раствором уксусной кислоты до РН-7,8. .

   6. Готовят раствор люциферазы: 10 мг люциферазы растворяют в 10 см 0,1 моль/дм³ трис-ацетатном буферном растворе- (п. 2.5). Приготовленный раствор люциферазы хранят во льду.

   7. Готовят • раствор люциферина: 3 мг люциферина растворяют в 10 см³ 0,1 моль/дм³ трис-ацетатного буферного раствора (п. 2.5).

   8. Готовят экстракт клеток: отбирают из пробирок с образцами после выдержки их в термостате 3 и 5 сут (п. 3.6.5) пробу минеральной среды объемом 0,1 см³ и добавляют ее в пробирку к 0,9 см³ диметилсульфоксида (ДМСО). Смесь перемешивают встряхиванием в течение 1—2 мин. Экстракт пригоден для анализа в течение 1 сут.

3. Проведение испытаний

   1. Помещают в кювету люминометра с помощью дозатора последовательно 0,1 см³ раствора люциферина, 0,1 см³ раствора люциферазы, 0,7 см³ трис-ацетатного буферного раствора и регистрируют интенсивность фонового свечения /фон в милливольтах.

   2. Добавляют в ту же кювету дозатором 0,1 см³ экстракта клеток (п. 2.8), перемешивают и регистрируют сигнал интенсивности люминесценции /і.

   3. Добавляют в ту же кювету 0,02 см³ стандартного раствора АТФ (п. 2.3) и регистрируют сигнал интенсивности люминесценции /2.

4. Обработка результатов

   1. Интенсивность люминесценции образца (/_обр) в милливольтах вычисляют по формуле