Из вторых разведений кисломолочных продуктов, заквасок* бактериальных концентратов и бактериальных препаратов молочно-кислых бактерий готовят следующие разведения в соответствии с количеством молочно-кислых бактерий, указанным в нормативно-технической документации, пользуясь табл. 1.
Посев для подсчета количества молочно-кислых стрептококков проводят в агаризованную или жидкую питательную среду, приготовленную в соответствии с пп. 3.3.2 и 3.3.3, а посев для подсчета количества молочно-кислых палочек — в жидкую среду, приготовленную ^соответствии с п. 3.3.3.
Для посева в агаризованную питательную среду выбирают те разведения, при посеве которых на чашках вырастает от 15 до 150 колоний.
Из каждой пробы делают посев, по ГОСТ 9225 1 см3 соответствующих разведений продукта (см. табл. 1) на чашки Петри,С. 13 ГОСТ 10444.11—89
|
|
Таблица 1 |
|
Наименование продукта |
Разведения, используемые для посев» |
|
Кисломолочные напитки,, закваски жидкие и сухие, творог, сметана Бактериальные концентраты, бактериальные препараты молочно-кислых бактерий Сухие кисломолочные продукты |
10-е; 10-123; 10-4; 10"5 10-9; Юг6; Ю-и 10-6; IO"7; 10-8 |
При посеве в жидкую питательную среду из трех-четырех последних разведений (см. табл. 1) вносят по 1 см3 каждого разведения в две параллельные пробирки со стерильным обезжиренным молоком,
Пробирки или чашки Петри с посевами помещают в термостат и инкубируют при температуре (30±1)°С для подсчета мезофильных молочно-кислых бактерий,при температуре (40± 1) °С для подсчета термофильных молочно-кислых бактерий и при (32±1)°С для совместного подсчета мезофильных и термофильных молочно-кислых бактерий. Посевы инкубируют в течение 72 ч.
ГОСТ 10444.11—Bfi С. 14
бактерий рода Streptococcus группы N обнаружены неспоро- образующие, грамположительные, неподвижные, каталазоотрицательные, не дающие роста в питательных средах с pH 9,6 и 6,5% NAC1, кокки, то дают заключение о том, что обнаруженные микроорганизмы относятся к роду Streptococcus группы N;
бактерий, рода Pediococcus обнаружены неспорообразующие, грамположительные, неподвижные, каталазоотрицательные (или каталазоположительные, но дающие отрицательный бензидиновый тест) или псевдокаталазоположительные кокки, то дают заключение о том, что обнаруженные микроорганизмы относятся к роду Pediococcus;
бактерий вида S. thermophilus обнаружены неспорообразующие, грамположительные, неподвижные, каталазоотрицательные, термофильные кокки, не дающие роста в питательных средах с pH 9,6 и 6,5% NaCl, то дают заключение о том, что обнаруженные микроорганизмы относятся к виду Streptococcus thermophilus.
Если при подтверждении характерных колоний в 80% случаев, то есть не менее чем в 4 из 5 колоний подтвержден рост определенных групп или родов микроорганизмов, то считают, что все характерные колонии, выросшие на чашке, принадлежат к этой группе, роду или виду. В остальных случаях количество микроорганизмов определяют, исходя из процентного отношения подтвержденных колоний к общему количеству характерных колоний, взятых для подтверждения.
При определении НВЧ или при Посеве продукта на жидкие среды пробирки считаются положительными, если при последующем пересеве на агаризованные среды и подтверждении характерных колоний хотя бы в одной характерной колонии обнаружены микроорганизмы определяемых групп, родов или видов.
Наиболее вероятное число (НВЧ) микроорганизмов определяют по количеству положительных пробирок по ГОСТ 10444.3.
Если десятикратные разведения, выбранные для посева были более высокими, например 10“3, 10-4 и 10~5, то табличное значение НВЧ умножают на разницу между выбранными и табличными десятикратными разведениями, то есть на 100.
Если десятикратные разведения, выбранные для посева, были более Низкими, например 10° (1г), 10~1, 10~2, то табличное значение НВЧ делят на разницу между выбранными и табличными десятикратными оазвепениями то есть на 10
Результаты определения количества микроорганизмов методом посева в чашки Петри или методом НВЧ или с применением метода мембранной фильтрации пересчитывают на 1 г или 1 см3 продукта и записывают в соответствии с требованиями ГОСТ 26670.
127С. 15 ГОСТ 10444.11—89
Результаты определения присутствия микроорганизмов в определенной навеске продукта выражают следующим образом: молочно-кислые микроорганизмы (при необходимости указывается род или вид) обнаружены или не обнаружены в навеске продукта.
5.2. Обработка результатов анализа кисломолочных продуктов, заквасок, бактериальных концентратов и бактериальных препаратов м о л о ч н о-к ислых бактерий
При развитии молочно-кислых бактерий на жидкой среде- молоке оно свертывается.
Для подсчета общего количества (молочно-кислых бактерии (стрептококков и палочек) отмечают три последних разведения, в которых молоко свернулось.
Составляют числовую характеристику. Она состоит из трех цифр, указывающих число пробирок со свернувшимся молоком в Трех последних разведениях. Первая цифра числовой характери- стики соответствует тому разведению, при котором в двух пробирках молоко свернулось. Следующие цифры обозначают число пробирок со свернувшимся молоком в двух последующих разведениях.
По числовой характеристике по табл. 2 находят наиболее вероятное число молочно-кислых микроорганизмов, которое умножают на то разведение, с которого начинается первая цифра числовой характеристики.
Таблица 2
|
Чі М С Л OS о я рактеристіі |
ха- іка |
Наиболее вероятное число микроорганизмов при заражении двух параллельных пробирок |
Числовая характеристика |
Наиболее вероятное число микроорганизмов при заражении двух параллельных пробирок |
|
004 |
|
0,5 |
200 |
2,5 |
|
010 |
|
0,5 |
2О1 |
5,0 |
|
011 |
|
0,9 |
210 |
6,0 |
|
020 |
|
0,9 |
2М' |
13,0 |
|
101 |
|
1,2 |
212 |
2:0,0! |
|
110 |
|
1,3 |
220 |
25,0 |
|
120 |
|
2,0 |
221 |
70Л |
|
121 |
|
3,0 |
222 |
над |
В таблицу не вклю^ны неприемлемые комбинации.
Полученное число соответствует количеству клеток молочнокислых бактерий в 1 г или 1 см3 продукта.
Пример расчета наиболее вероятного числа микроорганизмов при заражении двух параллельных пробирок приведен в прило- jkchhh 3
128
Система NormaCS
®
ГОСТ 1044.441—89 С» 16
Если необходимо определить дифференцированно количество стрептококков и палочек, то из пробирок, в которых молоко свернулось, делают микроскопический препарат по ГОСТ 9225, просматривают его и отдельно отмечают пробирки, в которых есть палочки и стрептококки.
Подсчет количества молочно-кислых стрептококков или палочек проводят, как указано выше.
5.2.2. Подсчет количества выросших колоний молочно-кислых бактерий на агаризованной среде и пересчет их содержания в 1 г или 1 см3 продукта проводят по ГОСТ 9225.
ПРИЛОЖЕНИЕ 1
Справочное
Характеристика микроорганизмов
Наименование микроорганизмов
Характеристика
Молочно-кислые микроорганизмы (за исключением рода Sporolactobaci- lius идентифицируемого по ГОСТ 10444.3)
Бактерии рода Lactobacillus
Слизеобразующие бактерии рода Leuconostoc
Стрептококки группы N рода Streptococcus
Бактерии рода Pedioco- ccus •
Стрептококки вида
S. thermophilus
Неспорообразующие, грамположительные, неподвижные, каталазоотрицательные палочки или неспорообразующие, грамположительные, неподвижные, каталазоотрицательные или образующие псевдокаталазу кокки
Грамположительные, неспорообразующие короткие или длинные, неподвижные, каталазоотрицательные палочки
Грамположительные, неспорообразующие, имеющие сферическую или овальную форму, располагающиеся попарно или в цепочках, окруженные капсулой, которая по Граму не окрашивается, неподвижные каталазоотрицательные кокки
Грамположительные, неспорообразующие, располагающиеся в виде коротких и длинных цепочек, неподвижные, каталазоотрицательные, не* дающие роста в питательных средах с pH 9,6 № 6,5 % NaCl кокки
Грамположительные, неспорообразующие, располагающиеся парами и тетрадями, неподвижные, каталазоотрицательные или образующие пвсевдокаталазу кокки
Грамположительные, располагающиеся парами или в виде коротких или длинных цепочек, неподвижные, каталазоотрицательные, термофильные, не дающие роста в питательных средах с pH 9,6 и 6,5 % NaCl кокки
С 17 ГОСТ 10444.11—89
ПРИЛОЖЕНИЕ 2
Справочное
Характеристика колоний молочно-кислых микроорганизмов на агаризованных и характер роста на жидких средах
|
Микроорганизмы |
Питательная среда |
Характеристика колоний или характер роста на жидкой среде |
|
|
Молочно-кислые ганизмы |
микроор- |
Бликфельдта жидкая |
Изменение цвета среды от фиолетового до желтого, помутнение среды или образование осадка, возможно выделение газа |
|
|
|
Бликфельдта ага- ризованная, среда из томатного сока |
Колонии мелкие гладкие или шероховатые |
|
|
|
Капустный агар |
Колонии окружены прозрачной зоной |
|
Молочно-кислые бактерии рода Lactobacillus или молочнокислые микроорганизмы |
Рогоза и МРС ага- ризованные |
Колонии бесцветные диаметром от 1 до 3 мм линзовидной или звездообразной формы |
|
|
|
> |
Рогоза и МРС жидкие |
Помутнение среды |
|
Молочно-кислые рода Le.uconostoc |
бактерии |
Агар питательный с сахарозой |
Колонии выпуклые, округлые, слизистые. При удалении колоний иглой или бактериологической петлей обнаруживаются волокна слизи |
|
Мелочно-кислые бактерии рода Streptococcus груп- Ш N |
Редди |
S. lactis образует колонии белые, Мелкие, КруГЛЫе, ВО' круг колоний могут быть зоны просветления |
|
|
|
|
|
S. cremoris колонии мелкие, желтые, эллипсовидные |
|
Молочно-кислые рода Pediococcus |
бактерии |
Среда Бригс в модификации Шарп |
Колонии мелкие, гладкие или шероховатые |
|
Молочно-кислые стрептококки вида S. thermophilus |
Среда Lee |
Колонии желтые, круглые или эллипсовидные, вокруг которых наблюдаются зоны просветления |
|
ЕЗО
ГОСТ 1044441—33 С ІІ
ПРИЛОЖЕНИЕ 3
Справочное
Пример расчета наиболее вероятного числа молочно кислых
бактерий методом предельных разведений
Пример 1.
Взяты разведения ........ 1 : 10
Число пробирок с посевами .... 2
Число пробирок со свернувшимся молоком . . м jt ......... . 2
1 : 100 1 : 1000 1 : 10000
2 2 2
2 1 Ї
Составляют числовую характеристику. Она состоит из трех цифр, указывающих число пробирок со свернувшимся обезжиренным молоком в трех последних разведениях. Первая цифра (слева) числовой характеристики — 2 (свернулись 2 пробирки разведения 1 : 100), вторая — 1 и третья— 1.
Следовательно, числовая характеристика будет 211. Она соответствует по табл. 2 числу 13,0. Это число надо умножить на то разведение, с которого начиналась первая цифра числовой характеристики (в примере это разведение равно 1 :100).
Таким образом, в 1 см3 содержится 1300 молочнокислых бактерий (13,0X100=1300).
Пример 2.
|
Взяты разведения ........ |
1 : 10 |
1 : 100 |
1 :1000 |
1 : 18000 |
|
Число пробирок с посевами .... |
2 |
2 |
2 |
2 |
|
Число пробирок со свернувшимся МО- |
|
|||
|
локом .............. |
2 |
2. |
2 |
I |
|
Стрептококки обнаружены в микроско- |
|
|||
|
пических препаратах следующих разведе- |
~г |
+ |
Ч- |
|
|
НИЙ ........ |
|
і |
|
|
|
Молочно-асислые палочки обнаружены |
|
|||
|
в микроскопических, препаратах следующих |
|
|
—— |
|
|
разведений . |
|
|
— |
— |
