---

з найбільшою межею зважування 200 г та допустимою похибкою не

більше ;

- ваги лабораторні загального призначення 4-го класу точності

з найбільшою межею зважування та допустимою похибкою не

більше ;

- рН-метр з похибкою вимірювання до 0,01;

- стерилізатор паровий з режимами стерилізації від

температури +100 град. С (текучою парою) до 126 град. С (під

тиском);

- шафа сушильна стерилізаційна, яка забезпечує температуру

+100 - + 200 град. С;

- магнітні мішалки з підігрівом до 30 град. С для

приготування середовищ;

- дозатори для розливу поживних середовищ;

- дозатори піпеточні для використання в аналізі;

- холодильники лабораторні або побутові;

- мікроскоп біологічний;

- прилад для підрахунку колоній бактерій;

- освітлювач ОИ-19.

Примітка. Допускається використання інших засобів

вимірювальної техніки, допоміжного обладнання, які за технічними

характеристиками не поступаються зазначеним вище.

5.3. Допоміжне обладнання і витратні матеріали:

- пальники газові або спиртові;

- анатомічні пінцети;

- бактеріологічні петлі;

- вата гігроскопічна медична;

- годинник піщаний на 1, 2, 5 хвилин або таймер;

- індикаторні смужки для визначення рН у діапазоні 6 - 8 з

інтервалом 0,2;

- колби конічні об'ємом по 250, 500, 1000 куб.см;

- лабораторний посуд скляний або одноразового використання;

- лейкопластир;

- лійки скляні;

- марля медична, бинти;

- мензурки місткістю 100, 250, 500 куб.см;

- олівці чи фломастери по склу;

- папір фільтрувальний;

- пенали металеві для піпеток;

- пінцети з тупими кінцями;

- піпетки місткістю 1,0; 2,0; 5,0; 10,0 куб.см;

- піпетки Мора на 50 і 100 куб.см;

- поплавки для пробірок і флаконів;

- пробірки бактеріологічні;

- скельця предметні для мікроскопії;

- стакани лабораторні;

- флакони скляні об'ємом 250, 500 куб.см;

- фольга алюмінієва, ковпачки силіконові, металеві;

- циліндри місткістю 100, 250, 500 куб.см;

- чашки бактеріологічні (Петрі);

- штативи для пробірок.

5.4. Хімічні реактиви:

Усі хімічні реактиви повинні відповідати кваліфікації не

нижче ч.д.а. (чистий для аналізу):

- альфа - нафтол(*);

- амоній-залізо (II) сульфат;

- бромтимоловий синій;

- генціан фіолетовий (генціанвіолет)(*);

- глюкоза;

- діамантовий зелений;

- йод кристалічний;

- йодистий калій;

- калію дигідрофосфат;

- кислота соляна;

- лактоза;

- магнію хлорид;

- натрій сірчистокислий (сульфіт натрію);

- натрій хлористий;

- натрію гідроксид;

- натрію гідроселеніт;

- натрію гідрофосфат безводний;

- натрію дигідрофосфат безводний;

- натрію тіосульфат;

- сахароза;

- сечовина;

- спирт етиловий ректифікований 96%, медичний;

- феноловий червоний; - фуксин основний;

- фенілендіамінові сполуки(*) (тетраметил-п-фенілендіамін

гідрохлорид, диметил-п-фенілендіамін солянокислий,

диметил-п-фенілендіамін, дифеніл-п-фенілендіамін та ін.).

_______________

(*) Речовини мають канцерогенну та мутагенну дію. Працювати з

дотриманням вимог безпеки праці. Доцільно використовувати

стандартні препарати промислового виробництва, зареєстровані в

Україні.

5.5. Поживні середовища промислового виготовлення:

- агар сухий поживний;

- агар Ендо сухий;

- агар мікробіологічний;

- агар-агар;

- вісмут-сульфіт агар;

- дріжджовий діалізат;

- жовч великої рогатої худоби;

- магнієве середовище;

- пептон сухий ферментативний для бактеріологічних

досліджень;

- селенітове середовище;

- середовище Гіса з лактозою;

- середовище Кеслера;

- середовище Плоскірєва;

- сухий поживний бульйон.

5.6. Тест-штами мікроорганізмів

Штами E. coli М17-02, Pseudomonas fluorescens використовують

для перевірки реактивів для постановки оксидазного тесту. Їх

отримують у музеї патогенних мікроорганізмів Інституту

епідеміології та інфекційних хвороб ім. Л.В.Громашевського АМН

України.

5.7. Приготування поживних середовищ і реактивів

Усі сухі поживні середовища і реактиви повинні бути дозволені

до використання в Україні і мати сертифікат якості (паспорт)

відділу контролю організації-виробника та інструкцію з

використання.

Варто використовувати стандартизовані сухі поживні середовища

промислового виробництва. У цьому разі слід дотримуватися способу

приготування, використання, умов та терміну зберігання, указаних

на етикетці.

Сухі поживні середовища зберігають у сухих темних приміщеннях

за кімнатної температури. Відкриті упаковки щільно закривають.

Середовища із зміненою консистенцією (ущільнені, з грудками) або

зміненим кольором не використовують.

Приготовлення поживних середовищ проводиться згідно з ГОСТ

10444.1-84 "Консервы. Приготовление растворов реактивов, красок,

индикаторов и питательных сред, применяемых в микробиологическом

анализе".

Усі виготовлені поживні середовища маркують із зазначенням

назви середовища, дати виготовлення та терміну придатності.

Дату приготування та результати контролю якості поживних

середовищ реєструють у Журналі приготування та контролю поживних

середовищ (форма N 256/о, затверджена наказом МОЗ України від 4

січня 2001 року N 1 ( v0001282-01 ).

Для приготування розчинів, реактивів і поживних середовищ

використовують воду дистильовану за ГОСТ 6709-72 "Вода

дистилированная. Технические условия" або очищену. Готують у

посуді з інертного матеріалу.

Всі середовища, які стерилізують за температури

112 +- 2 град. С, готують у стерильному посуді і розливають у

стерильні пробірки.

Ураховуючи можливу зміну рН поживних середовищ після

кип'ятіння та стерилізації, при приготуванні середовищ

установлюють рН на 0,2 вище вказаного, що визначають дослідним

шляхом для кожного середовища. Остаточний контроль рН проводять у

готовому середовищі з використанням рН-метра (рідкі середовища)

або паперових індикаторів з шагом діапазону не більше 0,2

(агаризовані середовища). Визначення проводять згідно з

інструкцією з використання приладу або індикаторної системи.

Після стерилізації поживні середовища охолоджують за

кімнатної температури, після чого поміщують у холодильник за

температури 6 +- 2 град. С, якщо в Інструкції щодо застосування

конкретного препарату не вказано інші умови зберігання.

Готові розлиті в пробірки напіврідкі поживні середовища та

середовища з поплавками зберігають при кімнатній температурі не

більше 7 діб.

Температуру середовищ, що зберігалися у холодильнику, перед

посівом необхідно довести до кімнатної.

Температура середовища під час розливання її у чашки Петрі

повинна бути 50-60 град. С.

На поверхні розлитого в чашки Петрі середовища не повинно

бути слідів вологи. У разі наявності на поверхні середовища слідів

вологи чашки перед використанням підсушують у термостаті.

5.7.1. Фосфатно-буферний розчин

За відсутності препарату промислового виготовлення середовище

готують за таким прописом:

калію фосфат однозаміщений - ;

натрію фосфат двозаміщений - ;

вода дистильована - до 1000 куб.см.

Наважки солей розчиняють у 1 куб.дм дистильованої води,

розливають у флакони по 100 куб.см або більше, закривають

пробками і стерилізують в автоклаві за температури

121 +- 1 град. С та тиску 110 кПа протягом 20 хвилин.

5.7.2. Фізіологічний розчин 0,9%-ий

NaCl розчиняють у 1 куб.дм дистильованої води, розливають

у пробірки по 10 куб.см або у флакони по 100 куб.см, або більше,

закривають пробками і стерилізують в автоклаві за температури

121 +- 1 град. С та тиску 110 кПа протягом 20 хв. Термін

зберігання не більше двох тижнів.

Фізіологічний розчин, який готують для розведень, доцільно

стерилізувати у флаконах по 90 куб.см та в пробірках по 9 куб.см.

5.7.3. Поживні середовища промислового виробництва готують з

сухого препарату за способом, указаним на етикетці.

5.7.4. Середовище Кеслера з лактозою

За відсутності препарату промислового виготовлення середовище

готують за таким прописом:

пептон ферментативний - ;

жовч великої рогатої худоби - 100,0 куб.см;

лактоза - ;

водний розчин кристалічного фіолетового 1% - 8,0 куб.см;

вода дистильована - 1000 куб.см.

Приготування: до 1000 куб.см дистильованої води додають

пептон і жовч великої рогатої худоби. Суміш під час перемішування

протягом 20 - 30 хвилин доводять до кипіння на водяній бані. Потім

фільтрують її крізь ватно-марлевий фільтр, додають лактозу і

доводять водою об'єм до 1000 куб.см. Установлюють рН - 7,4 - 7,6,

використовуючи розчин гідроокису натрію (NaOH) або соляної кислоти

(HCl) з молярною концентрацією 1,0 моль/куб.дм. Додають 1%-ий

водний розчин індикатора кристалічного фіолетового, розливають у

флакони по 200 куб.см. Стерилізують за температури 112 +- 2 град.

С протягом 15 +- 1 хвилин.

5.7.5. Водний розчин кристалічного фіолетового з масовою

часткою 1%.

Наважку масою 1,00 +- 0,01 г індикатора кристалічного

фіолетового вміщують у мірну колбу місткістю 100 куб.см і доводять

до мітки дистильованою водою. Розчин зберігають за температури

4 +- 1 град. С протягом 7 діб.

5.7.6 Напіврідке середовище з лактозою

За відсутності препарату промислового виготовлення середовище

готують за таким прописом: в 1 куб.дм дистильованої води

розчиняють 10 г пептону, 5 г натрію хлористого, 4 - 5 г

агар-агару, доводять до кипіння, установлюють рН 7, - 7,4, додають

1 куб.см 1,6%-ого спиртового розчину бромтимолового синього.

Стерилізують за температури 121 +- 1 град. С протягом 20 хвилин. У

розплавлене середовище вносять лактози, нагрівають до кипіння,

розливають у стерильні пробірки по 3-5 куб.см і стерилізують

протягом 12 хвилин за температури 112 +- 1 град. С.

5.7.7. Селенітове середовище

За відсутності препарату промислового виробництва середовище

готують у лабораторії за таким прописом:

натрію гідроселеніт (без домішок телуриту) - ;

(NaHSeO )

3

пептон високої якості ("Діфко", "Ріхтер",

"Спофа") - ;

натрію гідрофосфат безводний (Nа НPO ) - ;

2 4

натрію дигідрофосфат безводний (Nа Н PO ) - ;

2 4

лактоза - ;

вода дистильована - 1000 куб.см.

Приготування: середовище готують з двох розчинів.

I розчин: попередньо визначають кількісне співвідношення

фосфатів для даного зразка пептону чи гідроселеніту натрію з тим,

щоб готове середовище мало рН 6,9 - 7,1. Таке визначення потрібно

проводити кожного разу при зміні серії кожного з основних

інгредієнтів, які входять до середовища.

Після встановлення співвідношення фосфатів до розчину додають

пептон та лактозу. Розливають у флакони по 200 куб.см і

стерилізують за температури 112 +- 1 град. С протягом 30 хвилин.

II розчин: розчин готують ex tempore. До 100 куб.см

дистильованої води додають гідроселеніту натрію.

Перед початком роботи в кожний флакон з 200 куб.см основного

розчину (I) додають 8 куб.см гідроселеніту натрію (II).

Стерилізація не потрібна.

Основний розчин (I) зберігають за температури 6 +- 2 град. С

протягом 1 - 2 місяців.

5.7.8. Магнієве середовище

При відсутності препарату промислового виробництва середовище

готують у лабораторії. Середовище складається з трьох розчинів.

Розчин I

пептон - ;

натрію хлорид (NaCl) - ;

калію дигідрофосфат (КН РО ) - ;

2 4

дріжджовий діалізат - 9,0 куб.см;

вода дистильована - 890 куб.см;

Розчин II

магнію хлорид (MgCl * 6H O) - ;

2 2

вода дистильована - 90 куб.см;

Розчин III

діамантовий зелений, 0,5% водний розчин - 0,9 куб.см.

Приготування: після розчинення при підігріванні інгредієнтів

усі три розчини змішують, розливають по 200 куб.см у флакони і

стерилізують за температури 112 +- 1 град. С протягом 30 хвилин.

5.7.9. Водний розчин діамантового зеленого з масовою часткою

0,5%

Наважку масою 0,50 +- індикатора діамантового зеленого

вміщують в мірну колбу місткістю 100 куб.см і доливають до мітки

дистильованою водою. Розчин зберігають за температури

4 +- 1 град. С протягом 7 діб в колбі, закритій гумовою пробкою.

5.7.10. Трицукровий агар із сечовиною (Олькеницького)

За відсутності препарату промислового виробництва середовище

готують у лабораторії за таким прописом:

агар поживний сухий - ;

лактоза - ;

сахароза - ;

глюкоза - ;

амоній-залізо (II) сульфат - ;

[FeSO * (NH ) SO * 6H O]

4 4 2 4 2

натрію тіосульфат (Na S O * 5H O) - ;

2 2 3 2

сечовина - ;

феноловий червоний (0,4% водний розчин) - 4,0 куб.см;

вода дистильована 1000 куб.см.

Приготування: солі попередньо розчиняють у невеликій

кількості дистильованої води. Вуглеводи і сечовину розчиняють

таким самим чином, але при підігріванні на водяній бані. Сухий

поживний агар розплавляють у решті води при нагріванні на вогні і

перемішуванні. Потім усі інгредієнти об'єднують, перемішують з

розплавленим агаром, фільтрують крізь марлевий фільтр,

установлюють рН 7,2 - 7,4. Додають індикатор, добре перемішують,

розливають у пробірки по 6 - 7 куб.см. Стерилізують текучою парою

3 дні поспіль по 20 хвилин або за температури 112 +- 1 град. С

протягом 15 хвилин. Скошують, залишаючи стовпчик 2,0 - 2,5 куб.см.

5.7.11. Реактив для визначення оксидазної активності бактерій