[EN 1659]
.3.4 Классификация культуральных сред по назначению
транспортная среда: Культуральная среда, предназначенная для сохранения и поддержания жизнеспособности микроорганизмов с момента отбора образца до начала ее анализа в лаборатории.
Примечание — Транспортные среды обычно содержат вещества, которые не допускают размножения микроорганизмов, но гарантируют их сохранение (например, транспортная среда Стюарта или среда Эймса).
[EN 1659]
среда для сохранения микроорганизмов: Культуральная среда, предназначенная для сохранения и поддержания жизнеспособности микроорганизмов в течение продолжительного периода, чтобы защищать их против неблагоприятных влияний, которые могут происходить в течение долгосрочного хранения, и позволять восстанавливать рост микроорганизма после этого периода (например, яичная среда Дорсе (Dorse)).
[EN 1659]
среда восстановления: Культуральная среда, позволяющая находящимся в состоянии стресса и ослабленным микроорганизмам восстанавливать способность для нормального роста без обязательного условия их размножения.
[EN 1659]
среда обогащения: Преимущественно жидкая культуральная среда, которая благодаря ее составу обеспечивает особенно благоприятные условия для размножения микроорганизмов.
[EN 1659]
селективная среда обогащения: Среда обогащения, которая поддерживает размножение определенных микроорганизмов, частично или полностью подавляя рост других микроорганизмов (например, среда Раппапорта-Василиадиса (Rappaport-Vassiliadis)).
неселективная среда обогащения: Среда обогащения, которая поддерживает рост большинства микроорганизмов (например, питательный «бульон»),
среда для выделения отдельных (изолированных) колоний: Плотная или полужидкая культуральная среда, которая поддерживает рост микроорганизмов.
селективная среда для выделения отдельных (изолированных) колоний: Селективная среда, которая поддерживает рост определенных микроорганизмов, при отсутствии роста других микроорганизмов (например, агар PALCAM, агар MacConkey (МакКонки)).
[EN 1659]
неселективная среда для выделения отдельных колоний: Среда выделения, которая не предназначена для избирательного подавления роста микроорганизмов (например, питательный агар).
[EN1659]
дифференциальная (культуральная) среда: Культуральная среда, с помощью которой определяют одну или более физиологических/ биохимических характеристик микроорганизмов для их идентификации (например, среда с мочевиной, агар Клиглера (Kligler)).
Примечание — Дифференциальные среды, которые можно использовать в качестве разделительных сред, называют разделительными/дифференциальными средами (например, агар на основе дезоксихо- лат-лизин-ксилозы (XLD).
[EN 1659]
среда для идентификации: Культуральная среда, предназначенная для выявления определенной реакции идентификации, которая далее не требует дальнейшего подтверждения исследования.
Примечание — Среды для идентификации, которые могут использоваться в качестве сред для выделения, относятся к средам идентификации/выделения.
[EN 1659]
культуральные среды, имеющие многоцелевое использование: Определенные культуральные среды могут принадлежать к нескольким категориям, например кровяной агар является средой восстановления согласно 3.3.4.3, средой выделения согласно 3.3.4.5 и дифференциальной средой согласно 3.3.4.6, используемой для обнаружения гемолиза.
3.3.5 Культуральные среды, классифицируемые в соответствии с методом приготовления
среда, готовая к использованию: Культуральная среда, находящаяся в контейнерах в готовой к использованию форме (например, чашки Петри или пробирки, или другие контейнеры)
культуральная среда, приготовленная из коммерческих сухих (обезвоженных) реагентов: Культуральная среда в сухой форме, которая не готова к немедленному использованию (например, порошки, гранулы, лиофилированные изделия). Повторная гидратация позволяет получить один из двух видов сред:
среда, полностью готовая к использованию;
среда, к которой добавляют неустойчивые компоненты непосредственно перед использованием.
3.4 Термины, используемые для характеристики контрольных микроорганизмов
контрольные микроорганизмы: Тест-микроорганизмы обычно используют для контроля качества и испытания эффективности культуральных сред.
контрольный (эталонный) штамм: Микроорганизм, для которого определены род и вид. Микроорганизм внесен в каталог и описан согласно его характеристикам. Предпочтительно, чтобы было установлено его происхождение.
[EN 12322]
контрольные (эталонные) культуры: Набор отдельных идентичных культур, полученных в лаборатории посредством получения от одного пересева из контрольного штамма либо имеющегося в лаборатории или полученного от поставщика.
[EN 12322]
рабочая культура: Первичная субкультура, полученная от контрольного посева контрольной культуры (см. 3.4.3).
Методы контроля качества питательных сред
Документация
Документация, предоставляемая изготовителем
Документация, предоставляемая изготовителем, включает следующее:
наименование среды, отдельных ингредиентов и всех добавок, включая ихтоварные коды;
код партии;
значение pH среды перед применением;
информацию о хранении и дату истечения срока годности;
оценку эффективности и используемый тест-(микро)организм;
техническую спецификацию;
свидетельство о контроле качества;
данные поопасности/защите (при необходимости).
Контрольная карта лаборатории
Контрольная карта лаборатории после получения среды включает следующую информацию:
наименование среды и код партии;
дату получения;
дату истечения срока годности;
состояние и целостность упаковки.
Хранение
Общие положения
Во всех случаях следуют инструкциям изготовителя, где имеются данные об условиях хранения, сроке истечения и времени использования.
Управление качеством и контроль качества сухих (обезвоженных) сред и добавок
Среды поставляют в виде обезвоженных (сухих) порошка или гранул, в герметично упакованных контейнерах, а добавки различных селективных или диагностических реагентов — в лиофилизированной или жидкой формах.
Приобретение сред следует планировать таким образом, чтобы обеспечивать регулярный поток (т. е. первым получено — первым использовано).
Для поддержания эффективного учета необходимые проверки должны включать в себя:
проверку герметичности;
проверку даты первого вскрытия сред и добавок;
визуальную оценку содержимого открытых контейнеров.
После открытия нового контейнера на качество среды может повлиять окружающая среда, в которой хранят открытые контейнеры со средами и добавками. Потеря качества сухих (обезвоженных) сред проявляется в изменении текучести порошка, гомогенности, образовании комков, изменении цвета и т. д. Любую сухую (обезвоженную) среду, которая стала влажной или проявляет очевидные изменения физических свойств, следует исключать из дальнейшей работы.
Коммерческие среды, готовые к использованию
В отношении условий хранения, времени использования сред и даты истечения срока годности необходимо соблюдать инструкцию изготовителя.
Среды, приготовленные из имеющихся в продаже доступных сухих (обезвоженных) ингредиентов и основных индивидуальных компонентов
Срок годности сред, приготовленных из имеющихся в продаже доступных сухих (обезвоженных) ингредиентов и основных индивидуальных компонентов, различен. Пользователь вправе установить общие сроки хранения приготовленных сред. Специальные международные или национальные стандарты могут предписывать конкретные условия и срок годности.
Стерилизованные среды, разлитые в чашки, пробирки или флаконы и реагенты, которые не используются немедленно, должны быть защищены от света и высыхания.
Если дата истечения срока годности не была установлена или не указана в международном стандарте, среды, к которым конечные компоненты добавляют непосредственно перед использованием, следует хранить в холодильнике не более 3 мес ил и при комнатной температуре не более одного месяца в условиях, не допускающих изменения их состава. Однако рекомендуется, чтобы среды, к которым добавляют селективные добавки, использовали в день их приготовления. Плотные среды, содержащие химически активные и/или неустойчивые вещества, следует хранить в таре, в которой осуществляют их плавление.
Следует наблюдать за любым изменением цвета, признаками появления пыли, обезвоживания или микробного роста. Партии сред, показывающие такие изменения, не следует использовать.
До использования или перед нагреванием рекомендуется доводить среды до температуры окружающей среды.
Приготовление питательных сред в лаборатории
Общие положения
Аккуратное приготовление сред — один из фундаментальных принципов в микробиологической экспертизе, и этому необходимо уделять особое внимание.
Необходимо следовать хорошей лабораторной практике и инструкциям изготовителя, касающимся работы с сухими (обезвоженными) средами и другими компонентами, входящими в их состав, особенно содержащими опасные материалы, такие как соли желчных кислот или другие селективные компоненты.
Когда среды приготовляют из сухих (обезвоженных) коммерческих составов, необходимо точно выполнять инструкции изготовителя. Документация (см. 4.1.1) дополнительно должна содержать информацию о порядке приготовления сред.
Для сред, приготовляемых из отдельных компонентов, необходимо строго соблюдать все операции, предусмотренные в инструкции изготовителя. Кроме того, до начала приготовления сред следует проверить полную идентичность (то есть код и номер партии) всех используемых компонентов.
Вода
Используемая вода должна быть дистиллированной или равноценной по качеству, то есть освобожденной от веществ, которые могут ингибировать или влиять на рост микроорганизмов при контрольных исследованиях. Если дистиллированную воду приготавливают из хлорированной воды, хлор необходимо нейтрализовать перед дистилляцией.
Дистиллированную воду следует хранить в контейнерах, изготовленных преимущественно из инертных материалов (например, нейтральное стекло, полиэтилен и т. д.), которые до их начального использования должны быть свободными от веществ, ингибирующих рост микроорганизмов.
Примечание — В некоторых случаях может быть необходимо использовать свежеприготовленную воду, свободную от растворенной в ней двуокиси углерода.
Дистиллированная вода хорошего качества должна иметь удельное сопротивление, по меньшей мере, 300000 Ом • см.
Предупреждение! Вода, пропущенная через ионообменные устройства (деионизированная), может быть обсеменена высоким количеством микроорганизмов; желательно такую воду не использовать без подтверждения низкого содержания в ней микроорганизмов. За консультацией о выборе лучшего метода минимизации заражения микроорганизмами можно обратиться к изготовителю. Значительно загрязненная микроорганизмами деионизированная вода, которая была стерилизована фильтрованием, может содержать достаточно веществ, подавляющих рост некоторых микроорганизмов.
Взвешивание и перегидратация (растворение)
Тщательно взвешивают соответствующее количество сухой (обезвоженной) среды при соблюдении мер предосторожности, чтобы не вдохнуть порошок, особенно для среды, содержащей ядовитые вещества. Для растворения постепенно добавляют требуемое количество воды, избегая образования комков.
Растворение и дисперсия
Сухие (обезвоженные) среды нуждаются в быстрой дисперсии путем постоянного перемешивания с нагреванием, если необходимо, для растворения. Средам, содержащим агар, нужно дать несколько минут для впитывания воды с перемешиванием до нагревания. Для сред, приготовляемых из отдельных компонентов, каждый компонент необходимо добавлять отдельно и полностью растворять, прежде чем окончательно довести до конечного объема.
Измерение и получение нужного значения pH
pH измеряют, используя pH-метр, и получают необходимое значение pH, если среду приготовляют из отдельных компонентов в лаборатории таким образом, чтобы после стерилизации и охлаждения до температуры 25 °С среда имела требуемое значение pH ± 0,2 единицы pH, если нет других указаний. Нужное значение pH получают с помощью гидроокиси натрия (NaOH) концентрацией приблизительно 40 г/л (приблизительно 1 мол/л) или соляной кислотой (HCI) приблизительно 36,5 г/л (приблизительно 1 мол/л).
