ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
СОЮЗА ССР
ЕДИНАЯ СИСТЕМА ЗАЩИТЫ ОТ КОРРОЗИИ И СТАРЕНИЯ
ЖИДКОСТИ
СМ АЗОЧ НО-ОХЛ АЖДАЮЩИ Е
МЕТОДЫ ИСПЫТАНИЙ НА БИОСТОЙКОСТЬ
Издание официальное
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР по СТАНДАРТАМ
МоскваУДК 621.9.079:621.892:620.193.8:006.354 Группа Т99
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ СОЮЗА ССР жяпмквяпяаамевмянаемввпаамш.'оааввммпжпе
Е
ГОСТ
9.085-78
ЖИДКОСТИ СМАЗОЧНО-ОХЛАЖДАЮЩИЕ.
Методы испытаний на биостойкость
Single corrosion and ageing protectiol system.
Cooling lubricant. Bioresistance test methods
Постановлением Государственного комитета стандартов Совета Министров СССР от 27 июня 1978 г. № 1699 срок действия установлен
с 01.07.1979 г.
до 01.07.1984 г.
Несоблюдение стандарта преследуется по закону
Настоящий стандарт распространяется на смазочно-охлаждающие жидкости (в дальнейшем СОЖ) и устанавливает методы лабораторных испытаний на стойкость к воздействию бактерий и плесневых грибов.
МЕТОД ИСПЫТАНИЙ НА СТОЙКОСТЬ К ВОЗДЕЙСТВИЮ
АЭРОБНЫХ БАКТЕРИЙ
Сущность метода
Сущность метода заключается в выдерживании СОЖ, зараженных культурами бактерий в условиях, оптимальных для их развития, с последующей оценкой биостойкости.
Отбор проб
Пробы СОЖ отбирают по ГОСТ 2517—69 массой 50 г.
Пробами являются СОЖ в состоянии поставки без специальной очистки и стерилизации.
Проб должно быть не менее трех.
Виды бактерий
Для испытаний применяют смесь чистых культур следующих видов бактерий:
Escherichia cdi (Migyla) Castellani and Chalmers;
Mucobacterium phlei Lehman and Neum;
P
Издание официальное
Перепечатка воспрещена
Pseudomonas oleovorans Lee and Chandler;
Staphulococcus aureus Rosenbach.
Кроме чистых культур допускается применять смесь накопительных культур, выделенных из испытуемых СОЖ.
Чистые культуры бактерий получают во Всесоюзной коллекции микроорганизмов института микробиологии АН СССР, поддерживают периодическим пересевом и выращивают непосредственно перед испытаниями. Культуры бактерий обновляют один раз в год—два.
Пересев, выращивание и хранение культур бактерий ь производят, как указано в ГОСТ 9.082—77.
Аппаратура, материалы и реактивы — по ГОСТ 9.048—75 со следующим дополнением:
термостат, обеспечивающий поддержание постоянной температуры 30±2°С;*
электроплитка с закрытой спиралью;*
потенциометр по ГОСТ 11921—66;
горелки газовые;*
цилиндры металлические, изготовленные из коррозионностойкой или нержавеющей стали по ГОСТ 5949—75, внутренним диаметром 7 мм, высотой 10 мм;
трубки металлические, изготовленные из коррозионностойкой или нержавеющей стали по ГОСТ 5949—75, диаметром 10 мм, высотой 100 мм;
чашки кристаллизационные стеклянные по ГОСТ 10973—75;
груша резиновая;*
доска для сушки посуды;
аппарат для встряхивания колб и пробирок;
стандарты мутности;
pH-метр лабораторный типа ЛПУ-01, pH-340 или другого типа с погрешностью не более 0,05 pH;
ножницы, пинцеты, скальпели;*
штативы лабораторные;*
бульон мясо-пептонный (МПБ) по ГОСТ 9.082—77;
агар мясо-пептонный (МПА) по ГОСТ 9.082—77;
спирт этиловый ректификованный технический по ГОСТ 18300—72, высшего сорта;
кислота соляная по ГОСТ 3118—77;
кислота серная по ГОСТ 4204—77;
калий двухромовокислый по ГОСТ 4220—75;
натрий углекислый по ГОСТ 83—63, безводный;
яйца куриные.
Подготовка к испытаниям
Посуда и материалы — по ГОСТ 9.048—75.
Среды для выращивания и хранения чистых культур бактерий и для испытаний готовят по ГОСТ 9.082—77.
Рецептура сред приведена в табл. 1.
|
Калий фосфорнокислый однозамещенный, г |
— |
— |
|
Калий фосфорнокислый двузамещенный, г |
— |
— |
|
Магний сернокислый, г |
— |
— |
|
Натрий азотнокислый г |
— |
—* |
|
Натрий сернокислый, г |
— |
0,5 |
|
Калий хлористый, г |
— |
— |
|
Железо сернокислое, г |
— |
— |
|
Железо лимоннокислое, г |
— |
0,5 |
|
Аммоний хлористый, г |
— |
— |
|
Спирт этиловый ректификованный, г |
— |
— |
|
Сахароза, г |
— |
— |
|
Пептон бактериологический, г |
— |
10,0 |
|
Агар микробиологический, г |
20,0 |
12,0 |
|
Мясо-пептонный бульон, мл |
до 1000 |
|
|
Сусло пивное, мл |
— |
—- |
|
Вода дистиллированная, мл |
|
1000 |
|
0,5 |
— |
0,7 |
0,7 |
|
1,0 |
— |
0,3 |
0,3 |
|
0,2 |
— |
0,5 |
0,5 |
|
— |
— |
2,0 |
2,0 |
|
— |
— |
— |
... |
|
•— |
— |
0,5 |
0,5 |
|
0,01 |
— |
0,01 |
0,01 |
|
— |
|
— |
— |
|
0,1 |
— |
—■ |
— |
|
5,0 |
— |
—— |
— |
|
— |
— |
30,0 |
— |
|
— |
— |
—• |
— |
|
— |
20,0 |
20,0 |
Выще ло- ченн ый 20,0 |
|
— |
— |
— |
— |
|
— |
до 1000 |
— |
— |
|
до 1000 |
— |
до 1000 |
до 1000 |
Таблица 1
Среда
|
Наименование реактивов |
I |
2 |
3 |
4 |
5 1 6 |
|
|
МПА |
агар индикаторный |
Сорокина |
сусло-агар |
Чапека- Докса с агаром |
иапекр- Докса С агаром оез сахарозы |
|
Чистые культуры бактерий пересевают и выращивают, как указано в ГОСТ 9.082—77.
Для приготовления бактериальных суспензий культуры, выращенные в течение суток, с помощью бактериологической петли переносят в отдельные пробирки, содержащие 10 мл водопроводной воды.
Количество бактериальных клеток определяют с помощью стандартов мутности.
Концентрация бактериальных клеток в суспензии должна быть, не менее 2 млн/мл.
Приготовленные суспензии взбалтывают и сливают в. равных объемах (1—2 мл) в стерильную пробирку.
Л 1.4.8. Срок хранения суспензии не более 3 ч.
П р о в е д е н и е испытаний
Круглую или коническую колбу вместимостью 500 мл, содержащую 200—300 мл среды 1, помещают в водяную баяю и выдерживают при температуре 100±2°С до тех пор, пока среда полностью не расплавится.
Расплавленную питательную среду охлаждают и заражают суспензией смеси бактериальных культур, внося последнюю с помощью градуированной пипетки 2 мл на 100 мл среды.
Среду после заражения разливают по 15 мл в чашки Петри.
На застывшую, строго горизонтальную поверхность среды ставят с помощью пинцета 3 стерильных полых металлических цилиндрика, в каждый из которых вносят по 0,1 мл испытуемой СОЖ.
Чашки Петри с цилиндриками закрывают крышками и помещают в термостат при 30±2°С.
Пробы выдерживают в термостате 24 ч.
■ 1.5.6. Испытания повторяют 3—4 раза.
По окончании испытаний чашки Петри извлекают из термостата и осматривают.
Оценку бактериостойкости СОЖ проводят по трехбалльной шкале, приведенной в табл. 2.
Таблица 2
Х
Балл
арактеристика баллаПри осмотре невооруженным глазом наблюдаются большие, четко выраженные эоны отсутствия роста микроорганизмов (зоны ингибирования) вокруг цилиндриков, содержащих СОЖ. Диаметр зоны ингибирования 1,5—2,0 см. Полная бактериостойкость.
При осмотре невооруженным глазом заметны зоны отсутствия роста микроорганизмов. Диаметр зоны ингибирования 0,8—1,0 см. Удовлетворительная бактериостойкость.
При осмотре невооруженным глазом не наблюдается зон отсутствия роста микроорганизмов. Небактериостойкость СОЖ
Требования безопасности — по ГОСТ 9.023—74 со следующим дополнением: необходимо осуществлять систематический контроль загрязнения микроорганизмами воздуха в производственных помещениях.
Количество 'микроорганизмов не должно превышать 5000— 7000 кл/м3 воздуха.
МЕТОД ИСПЫТАНИЙ НА СТОЙКОСТЬ К ВОЗДЕЙСТВИЮ АНАЭРОБНЫХ (СУЛЬФАТРЕДУЦИРУЮЩИХ] БАКТЕРИЙ
Сущность метода
Сущность метода заключается в способности анаэробных бактерий восстанавливать соединения серы с образованием сероводорода и сульфидов металлов.
Микроорганизмы образуют черные зоны сульфида железа, которые учитываются при оценке бактериостойкости СОЖ.
Отбор проб — по пп. 1.2.1—1.2.3.
Виды бактерий — культуры представителей рода Desulfovibrio.
Допускается использование ассоциативных культур этих бактерий с представителями других родов — Pseudomonas, Achro- mobacter и др.
Аппаратура, материалы и реактивы по п. 1.3 со следующим дополнением:
аммоний хлористый по ГОСТ 3773—72;
натрий сернокислый кристаллический по ГОСТ 4171—76;
железо лимоннокислое, .кристаллическое, ч.д.а.*;
пептон бактериологический*;
Подготовка к испытаниям — по пп. 1.4.1—1.4.4.
Для приготовления бактериальной суспензии используют накопительные культуры сульфатредуцирующих бактерий, выделенные в производственных условиях из пораженных СОЖ.
Для выращивания культуры используют среду 3.
Выращенную культуру в количестве 0,1—0,2 мл переносят пипеткой в отдельные пробирки, содержащие 10 мл водопроводной воды.
Количество бактериальных клеток определяют с помощью камеры Горяева.
Концентрация бактериальных клеток в суспензии должна быть не менее 2 млн/мл,
Срок хранения суспензии не более 1 ч.
Проведение испытаний
Испытуемые СОЖ разливают мерной пипеткой по 8— 9 мл в стеклянные пробирки, добавляют по 0,5—1 мл суспензии, тщательно перемешивают и закрывают притертыми пробками.
Пробирки помещают в термостат и выдерживают при температуре 30±2°С в течение 20—24 ч.
По истечении указанного срока проводят заражение среды 2 испытуемой СОЖ. Для этого 1 мл зараженной СОЖ вносят в стерильную пробирку и заливают 10 мл предварительно расплавленной и охлажденной до 40—45°С средой 2.
Для контроля жизнеспособности бактерий в стерильные пробирки вносят 1 мл бактериальной суспензии и 10 мл среды 2.
Пробирки с зараженными пробами и контрольные пробирки закрывают притертыми пробками, перемешивают содержимое и помещают в термостат с температурой 30±2°С.
Пробирки выдерживают в термостате 4 сут.
По окончании испытаний пробирки извлекают из термостата и осматривают.
Если среда 2 остается бесцветной, культуры бактерий считают нежизнеспособными. Испытания прекращают и повторяют их на новых пробах с вновь приготовленной суспензией бактерий из новой партии бактерий.
Оценку бактериостойкости СОЖ проводят по трехбалльной шкале, приведенной в табл. 3.
Таблица 3
|
Балл |
Характеристика балла |
|
0 |
Цвет индикаторного агара не меняется, что соответствует отсутствию роста сульфатредуцирующих бактерий. Полная бакте- рностойкость СОЖ. |
|
I |
Появляются единичные черные колонии с индикаторным агаром. Удовлетворительная бактериостойкость СОЖ. |
|
II |
По всей толщине индикаторного агара образуются многочисленные черные ікіолониіи. Небактеріиостойкость СОЖ. |
2.7. Требования безопасности по п. 1.7.
3. МЕТОД ИСПЫТАНИЙ НА СТОЙКОСТЬ К ВОЗДЕЙСТВИЮ ПЛЕСНЕВЫХ ГРИБОВ
Сущность метода
Сущность метода заключается в выдерживании СОЖ, зараженных культурами грибов в условиях, оптимальных для их развития, с последующей оценкой грибостойкости.
Отбор проб — по пп. 1.2.1—1.2.3.
Виды грибов
Aspergillus niger van Thieghem;
Chaetomium globosum Kunze;
Cladosporium gossipicola Pidopl ct Deniak
;’ Cladosporium resinae Albida;
Penicillium chrysogenum Thom;
