---

Состав:

лимоннокислый натрий — 20 г;

дистиллированная вода — 1000 см³.

В 1000 см³ дистиллированной воды растворяют 20 г лимоннокислого натрия, разливают в пробир­ки по 10 см³ и колбы по 93 см³ и стерилизует при (121 ±2) °С в течение (15± 1) мин.

В 100 см³ дистиллированной воды растворяют 10 г двууглекислого натрия, разливают по 10—20 см³ в пробирки и стерилизуют при (121І2) °С в течение 15 мин.

Состав:

гидролизованное молоко — 25 г;

агар — 15 г;

питьевая вода — до 1000 см³.

(Измененная редакция, Изм. № 3).

Состав:

пептон — 10 г;

стерильная желчь ~ 50 см³;

лактоза — 2,5 г;

раствор кристаллического фиолетового

с массовой концентрацией 10 г/дм³ — 2 см³;

дистиллированная вода — ДО Ю00 см³.

Готовая среда должна иметь темно-фиолетовый цвет.

Допускается приготовление среды КессДер из отдельных ингредиентов.

Для этого к 1000 см³ питьевой воды прибавляют 10 г пептона и 50 см³ стерильной желчи (желчь бычья или других сельскохозяйственных животных), кипятят смесь при помешивании (25±5) мин и

ГОСТ 9225-84 С. 6

фильтруют ее через вату. В полученном фильтрате растворяют 2,5 г лактозы и доводят объем питьевой водой до 1000 см³, устанавливают реакцию среды (pH 7,4—7,6), после чего добавляют 2 см³ раствора кристаллического фиолетового с массовой концентрацией 10 г/дм³, разливают в пробирки с поплав­ками по 5 см³ или колбочки с поплавками по 40—50 см³ и стерилизуют при (121±2) °С в течение (10± 1) мин. Готовая среда должна иметь темно-фиолетовый цвет.

0,5 г сычужного порошка растворяют в 100 см³ воды, нагретой до (30±2) °С.

10 г метиленового голубого смешивают со 100 см³ 96%-ного раствора этилового спирта. Раствор ставят в термостат при температуре (37±1) °С на 24 ч, а затем фильтруют в термостате при той же температуре.

Срок хранения раствора метиленового голубого в термостате при температуре (37± 1) °С не более З мес.

(Измененная редакция, Изм. № 2).

К 30 см³ спиртового раствора метиленового голубого прибавляют 100 см³ дистиллированной воды и 1 см³ раствора гидроокиси калия с массовой концентрацией 10 г/дм³.

(Измененная редакция, Изм. № 2).

Для приготовления раствора метиленового голубого с массовой концентрацией метиленового голубого 0,00015 г/см³ берут 6 см³ раствора с массовой концентрацией 0,005 г/см³ и смешивают со 194 см³ дистиллированной воды. Срок хранения приготовленного раствора не более 30 сут в холодиль­нике.

(Введен дополнительно, Изм. № 2).

(Измененная редакция, Изм. № 3).

Основной раствор резазурина-натриевой соли для редуктазной пробы готовят следующим обра­зом: 100 мг резазурина-натриевой соли переносят в мерную колбу вместимостью 200 см³ и доводят до метки прокипяченной и охлажденной до (25±2) °С дистиллированной водой. Смесь тщательно переме­шивают.

Срок хранения основного раствора резазурина-натриевой соли не более 30 сут при температуре 8-10 °С.

Рабочий раствор резазурина-натриевой соли готовят разбавлением основного раствора прокипя­ченной и охлажденной до (25±2) °С дистиллированной водой в соотношении 1:2,5 (например, к 10 см³ основного раствора прибавляют 25 см³ воды). Массовая доля резазурина в рабочем растворе 0,014 %.

При использовании резазурина в таблетках (производства ГДР) для приготовления рабочего раствора 1 таблетку растворяют в 50 см³ прокипяченной и охлажденной до (25±2) °С дистиллирован­ной воды. Массовая доля резазурина в этом растворе 0,01 %.

Срок хранения рабочего раствора резазурина не более 3 сут при температуре 0—5 °С.

Основной и рабочий раствор хранят в банках, защищенных от света.

Определение pH питательной среды проводят с помощью pH-метра по прилагаемым к ним инструкциям.

Ориентировочное определение pH питательных сред может проводиться с помощью индикатор­ных бумажек или готового универсального индикатора.

Отобранные пробы перед исследованием тщательно перемешивают.

2*

С. 7 ГОСТ 9225-84

Отобранные пробы перед исследованием перемешивают и нейтрализуют. Для этого отбирают стерильной пипеткой 10 см³ исследуемого продукта или закваски в стерильную пробирку или колбоч­ку и добавляют 1 см³ стерильного раствора двууглекислого натрия массовой концентрации 100 г/дм³, содержимое перемешивают.

Отобранные пробы фасованного мороженого развертывают и помещают в стерильную посуду с притертой или ватной пробкой.

Перед исследованием посуду с пробой нагревают в водяной бане при температуре 40—45 °С до расплавления пробы.

10 г сыра, творога или творожных изделий взвешивают на стерильном часовом стекле, чашке Петри, в бюксе, переносят в стерильную иди профламбированную ступку, прикрытую крышкой от чашки Петри, и тщательно растирают.

Перед исследованием пробу расплавляют на водяной бане при температуре 40—45 °С и перемеши­вают до получения однородной эмульсии.

Банки с продуктом тщательно промывают щеткой в чистой теплой воде и вытирают.

Перед вскрытием крышку банки, пробку бочки и часть днища вокруг пробки фламбируют.

Открывают банки стерильным консервным ножом, а пробку бочки пробойником. После вскры­тия отверстия банки и бочки немедленно закрывают стерильным пергаментом, профламбированной жестяной крышкой или крышкой чашки Петри. Содержимое банки тщательно перемешивают стериль­ной ложкой. Затем взвешивают стерильную сухую колбу и в нее помещают 10 г продукта.

Отобранную пробу тщательно перемешивают стерильной ложкой, взвешивают 10 г продукта на кусочке стерильного пергамента, на чашке Петри, в бюксе, затем взвешенную пробу помещают в стерильную колбу или другую посуду.

Масло и мороженое вносят в растворы хлористого натрия или фосфатного буфера, подогретые до 40-45 °С.

К навеске сыра 10 г постепенно добавляют 90 см³ стерильных растворов хлористого натрия или лимоннокислого натрия или фосфатного буфера, подогретых до 40—45 °С, и тщательно перемешивают до полного эмульгирования. Получают разведение 1:10.

Из первого разведения 1:10 готовят последующие 1:100 и т. д.

Для приготовления каждого разведения берут новую стерильную пипетку. При посеве на чашки Петри посевной материал вносят от большего разведения к меньшему. В этом случае пользуются одной пипеткой.

3. МЕТОДЫ АНАЛИЗА

   3. Метод определения редуктазы с метиленовым голубым

      1. Сущность метода

Метод основан на восстановлении метиленового голубого окислительно-восстановительными фер­ментами, выделяемыми в молоко микроорганизмами. По продолжительности обесцвечивания метиле­нового голубого оценивают бактериальную обсемененность сырого молока.

ГОСТ 9225-84 С. 8

В пробирки наливают по 1 см³ рабочего раствора метиленового голубого и по 20 см³ исследуемого молока, закрывают резиновыми пробками и смешивают путем медленного трехкратного переворачи­вания пробирок.

Пробирки помещают в редуктазник с температурой воды (37±1) °С.

При отсутствии редуктазника можно пользоваться водяной баней, помещаемой в термостат с температурой (37±1) °С.

Вода в редуктазнике или водяной бане после погружения пробирок с молоком должна доходить до уровня жидкости в пробирке или быть немного выше. Температуру воды поддерживают в течение всего времени определения (37± 1) °С. Для предотвращения влияния на реакцию света редуктазник должен быть плотно закрыт крышкой. Момент погружения пробирок в редуктазник считают началом анализа. Наблюдение за изменением окраски ведут через 40 мин, 2,5 и 3,5 ч с начала проведения анализа. Окончанием анализа считают момент обесцвечивания окраски молока. При этом остающийся небольшой кольцеобразный окрашенный слой вверху (шириной не более 1 см) или небольшая окра­шенная часть внизу пробирки (шириной не более 1 см) в расчет не принимаются. Появление окраши­вания молока в этих пробирках при встряхивании не учитывают.

В зависимости от продолжительности обесцвечивания молоко относят к одному из четырех клас­сов, указанных в табл. 1.

Таблица 1

Метод основан на восстановлении резазурина окислительно-восстановительными ферментами, выделяемыми в молоко микроорганизмами. По продолжительности изменения окраски резазурина оценивают бактериальную обсемененность сырого молока.

Пробу с резазурином следует проводить не ранее чем через 2 ч после доения.

В пробирки наливают по 1 см³ рабочего раствора резазурина и по 10 см³ исследуемого молока, закрывают резиновыми пробками и смешивают путем медленного трехкратного перевертывания про­бирок. Пробирки помещают в редуктазник с температурой воды (37± 1) °С.

При отсутствии редуктазника можно использовать водяную баню, помещенную в термостат с температурой (37±1) °С.

Вода в редуктазнике или водяной бане после погружения пробирок с молоком должна доходить до уровня жидкости в пробирке или быть немного выше, ее поддерживают в течение всего времени определения (37±1) °С.