Приготовление раствора лимоннокислого натрия для приготовления разведений сыра
Состав:
лимоннокислый натрий — 20 г;
дистиллированная вода — 1000 см3.
В 1000 см3 дистиллированной воды растворяют 20 г лимоннокислого натрия, разливают в пробирки по 10 см3 и колбы по 93 см3 и стерилизует при (121 ±2) °С в течение (15± 1) мин.
Приготовление раствора двууглекислого натрия для нейтрализации проб кисломолочных продуктов и закваски
В 100 см3 дистиллированной воды растворяют 10 г двууглекислого натрия, разливают по 10—20 см3 в пробирки и стерилизуют при (121І2) °С в течение 15 мин.
Приготовление питательной среды для определения количества мезофильных аэробных и факультативи о-a н а- эробных микроорганизмов
Состав:
гидролизованное молоко — 25 г;
агар — 15 г;
питьевая вода — до 1000 см3.
г сухой питательной среды помещают в колбу и доливают питьевой водой до 1000 см3. Смесь перемешивают, нагревают до полного раствбрения агара (при наличии осадка профильтровывают), устанавливают pH 6,8—7,0. Разливают в пробирки или колбы и стерилизуют при (121±2) °С в течение (15±1) мин.
(Измененная редакция, Изм. № 3).
Приготовление среДьт Кесслер (модифицированной)
Состав:
пептон — 10 г;
стерильная желчь ~ 50 см3;
лактоза — 2,5 г;
раствор кристаллического фиолетового
с массовой концентрацией 10 г/дм3 — 2 см3;
дистиллированная вода — ДО Ю00 см3.
г сухой среды Кесслер помещают в колбу и доливают питьевой водой до 1000 см3. Смесь размешивают и кипятят при помешивании (25±5) мин. Объем доводят питьевой водой до 1000 см3 и фильтруют через вату. Разливают в пробиркй с поплавками по 5 см3 или колбочки с поплавками по 40—50 см3 и стерилизуют при (121 ±2) °С в течение (Ю±1) мин.
Готовая среда должна иметь темно-фиолетовый цвет.
Допускается приготовление среды КессДер из отдельных ингредиентов.
Для этого к 1000 см3 питьевой воды прибавляют 10 г пептона и 50 см3 стерильной желчи (желчь бычья или других сельскохозяйственных животных), кипятят смесь при помешивании (25±5) мин и
ГОСТ 9225-84 С. 6
фильтруют ее через вату. В полученном фильтрате растворяют 2,5 г лактозы и доводят объем питьевой водой до 1000 см3, устанавливают реакцию среды (pH 7,4—7,6), после чего добавляют 2 см3 раствора кристаллического фиолетового с массовой концентрацией 10 г/дм3, разливают в пробирки с поплавками по 5 см3 или колбочки с поплавками по 40—50 см3 и стерилизуют при (121±2) °С в течение (10± 1) мин. Готовая среда должна иметь темно-фиолетовый цвет.
3.2.12. (Исключены, Изм. № 3).
Приготовление раствора сычужного фермента
0,5 г сычужного порошка растворяют в 100 см3 воды, нагретой до (30±2) °С.
Приготовление реактивов из метиленового голубого
Приготовление спиртового раствора метиленового голубого для окраски препаратов
10 г метиленового голубого смешивают со 100 см3 96%-ного раствора этилового спирта. Раствор ставят в термостат при температуре (37±1) °С на 24 ч, а затем фильтруют в термостате при той же температуре.
Срок хранения раствора метиленового голубого в термостате при температуре (37± 1) °С не более З мес.
(Измененная редакция, Изм. № 2).
(Исключен. Изм. № 2).
Приготовление краски для препаратов
К 30 см3 спиртового раствора метиленового голубого прибавляют 100 см3 дистиллированной воды и 1 см3 раствора гидроокиси калия с массовой концентрацией 10 г/дм3.
(Измененная редакция, Изм. № 2).
. Для проведения редуктазной пробы с метиленовым голубым готовят водный раствор с массовой концентрацией метиленового голубого 0,005 г/см3. Для этого 0,5 г метиленового голубого переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3 и доводят до метки прокипяченной и охлажденной до (25±2) °С дистиллированной водой. Смесь тщательно перемешивают до полного растворения. Срок хранения приготовленного раствора не более 12 мес в банках, защищенных от света.
Для приготовления раствора метиленового голубого с массовой концентрацией метиленового голубого 0,00015 г/см3 берут 6 см3 раствора с массовой концентрацией 0,005 г/см3 и смешивают со 194 см3 дистиллированной воды. Срок хранения приготовленного раствора не более 30 сут в холодильнике.
(Введен дополнительно, Изм. № 2).
(Измененная редакция, Изм. № 3).
Приготовление раствора резазурина
Основной раствор резазурина-натриевой соли для редуктазной пробы готовят следующим образом: 100 мг резазурина-натриевой соли переносят в мерную колбу вместимостью 200 см3 и доводят до метки прокипяченной и охлажденной до (25±2) °С дистиллированной водой. Смесь тщательно перемешивают.
Срок хранения основного раствора резазурина-натриевой соли не более 30 сут при температуре 8-10 °С.
Рабочий раствор резазурина-натриевой соли готовят разбавлением основного раствора прокипяченной и охлажденной до (25±2) °С дистиллированной водой в соотношении 1:2,5 (например, к 10 см3 основного раствора прибавляют 25 см3 воды). Массовая доля резазурина в рабочем растворе 0,014 %.
При использовании резазурина в таблетках (производства ГДР) для приготовления рабочего раствора 1 таблетку растворяют в 50 см3 прокипяченной и охлажденной до (25±2) °С дистиллированной воды. Массовая доля резазурина в этом растворе 0,01 %.
Срок хранения рабочего раствора резазурина не более 3 сут при температуре 0—5 °С.
Основной и рабочий раствор хранят в банках, защищенных от света.
Определение pH среды
Определение pH питательной среды проводят с помощью pH-метра по прилагаемым к ним инструкциям.
Ориентировочное определение pH питательных сред может проводиться с помощью индикаторных бумажек или готового универсального индикатора.
Подготовка проб к анализу
Молоко, сливки, сметана
Отобранные пробы перед исследованием тщательно перемешивают.
2*
С. 7 ГОСТ 9225-84
Кисломолочные нзпитки и продукты, закваски
Отобранные пробы перед исследованием перемешивают и нейтрализуют. Для этого отбирают стерильной пипеткой 10 см3 исследуемого продукта или закваски в стерильную пробирку или колбочку и добавляют 1 см3 стерильного раствора двууглекислого натрия массовой концентрации 100 г/дм3, содержимое перемешивают.
Мороженое
Отобранные пробы фасованного мороженого развертывают и помещают в стерильную посуду с притертой или ватной пробкой.
Перед исследованием посуду с пробой нагревают в водяной бане при температуре 40—45 °С до расплавления пробы.
Сыр, творог, творожные изделия
10 г сыра, творога или творожных изделий взвешивают на стерильном часовом стекле, чашке Петри, в бюксе, переносят в стерильную иди профламбированную ступку, прикрытую крышкой от чашки Петри, и тщательно растирают.
Масло
Перед исследованием пробу расплавляют на водяной бане при температуре 40—45 °С и перемешивают до получения однородной эмульсии.
Сгущенные молочные консервы
Банки с продуктом тщательно промывают щеткой в чистой теплой воде и вытирают.
Перед вскрытием крышку банки, пробку бочки и часть днища вокруг пробки фламбируют.
Открывают банки стерильным консервным ножом, а пробку бочки пробойником. После вскрытия отверстия банки и бочки немедленно закрывают стерильным пергаментом, профламбированной жестяной крышкой или крышкой чашки Петри. Содержимое банки тщательно перемешивают стерильной ложкой. Затем взвешивают стерильную сухую колбу и в нее помещают 10 г продукта.
Сухие молочные продукты
Отобранную пробу тщательно перемешивают стерильной ложкой, взвешивают 10 г продукта на кусочке стерильного пергамента, на чашке Петри, в бюксе, затем взвешенную пробу помещают в стерильную колбу или другую посуду.
Приготовление разведения продуктов для посева
Перед посевом готовят десятикратные разведения продукта в стерильных растворах хлористого натрия, лимоннокислого натрия (для сыров) или фосфатного буфера. Для приготовления разведений готовят все необходимые стерильные материалы и посуду в соответствии со спецификой анализа исследуемого продукта: пробирки с 9 см3 или колбы с 90 см3 растворов хлористого натрия или фосфатного буфера.
Из проб молока, сливок, сметаны, кисломолочных напитков и продуктов, мороженого, масла отбирают стерильной пипеткой 10 см3 и вносят в 90 см3 стерильных растворов хлористого натрия или фосфатного буфера. Получают разведение 1:10.
Масло и мороженое вносят в растворы хлористого натрия или фосфатного буфера, подогретые до 40-45 °С.
К приготовленным навескам по 10 г творога, творожных изделий; сгущенных молочных консервов и сухих молочных продуктов добавляют 90 см3 стерильных растворов хлористого натрия или фосфатного буфера, подогретых до 40—45 ’С, и взбалтывают в течение 3—5 мин до возможно более полного эмульгирования. Получают разведение 1:10.
К навеске сыра 10 г постепенно добавляют 90 см3 стерильных растворов хлористого натрия или лимоннокислого натрия или фосфатного буфера, подогретых до 40—45 °С, и тщательно перемешивают до полного эмульгирования. Получают разведение 1:10.
Из первого разведения 1:10 готовят последующие 1:100 и т. д.
Для приготовления каждого разведения берут новую стерильную пипетку. При посеве на чашки Петри посевной материал вносят от большего разведения к меньшему. В этом случае пользуются одной пипеткой.
МЕТОДЫ АНАЛИЗА
Метод определения редуктазы с метиленовым голубым
Сущность метода
Метод основан на восстановлении метиленового голубого окислительно-восстановительными ферментами, выделяемыми в молоко микроорганизмами. По продолжительности обесцвечивания метиленового голубого оценивают бактериальную обсемененность сырого молока.
ГОСТ 9225-84 С. 8
Проведение анализа
В пробирки наливают по 1 см3 рабочего раствора метиленового голубого и по 20 см3 исследуемого молока, закрывают резиновыми пробками и смешивают путем медленного трехкратного переворачивания пробирок.
Пробирки помещают в редуктазник с температурой воды (37±1) °С.
При отсутствии редуктазника можно пользоваться водяной баней, помещаемой в термостат с температурой (37±1) °С.
Вода в редуктазнике или водяной бане после погружения пробирок с молоком должна доходить до уровня жидкости в пробирке или быть немного выше. Температуру воды поддерживают в течение всего времени определения (37± 1) °С. Для предотвращения влияния на реакцию света редуктазник должен быть плотно закрыт крышкой. Момент погружения пробирок в редуктазник считают началом анализа. Наблюдение за изменением окраски ведут через 40 мин, 2,5 и 3,5 ч с начала проведения анализа. Окончанием анализа считают момент обесцвечивания окраски молока. При этом остающийся небольшой кольцеобразный окрашенный слой вверху (шириной не более 1 см) или небольшая окрашенная часть внизу пробирки (шириной не более 1 см) в расчет не принимаются. Появление окрашивания молока в этих пробирках при встряхивании не учитывают.
Обработка результатов
В зависимости от продолжительности обесцвечивания молоко относят к одному из четырех классов, указанных в табл. 1.
Таблица 1
Класс молока |
Продолжительность обесцвечивания, ч |
Ориентировочное количество бактерий в 1 см3 молока, КО Є |
Высший |
Более 3,5 |
До 300 тыс. |
I |
3,5 |
От 300 тыс. до 500 тыс. |
II |
2,5 |
От 500 тыс. до 4 млн. |
III |
40 мин |
От 4 млн. до 20 млн. |
4.1.3. (Измененная редакция, Изм. № 2).
Метод определения редуктазы с резазурином
Сущность метода
Метод основан на восстановлении резазурина окислительно-восстановительными ферментами, выделяемыми в молоко микроорганизмами. По продолжительности изменения окраски резазурина оценивают бактериальную обсемененность сырого молока.
Проведение анализа
Пробу с резазурином следует проводить не ранее чем через 2 ч после доения.
В пробирки наливают по 1 см3 рабочего раствора резазурина и по 10 см3 исследуемого молока, закрывают резиновыми пробками и смешивают путем медленного трехкратного перевертывания пробирок. Пробирки помещают в редуктазник с температурой воды (37± 1) °С.
При отсутствии редуктазника можно использовать водяную баню, помещенную в термостат с температурой (37±1) °С.
Вода в редуктазнике или водяной бане после погружения пробирок с молоком должна доходить до уровня жидкости в пробирке или быть немного выше, ее поддерживают в течение всего времени определения (37±1) °С.