1. Приготовление раствора лимоннокислого натрия для приготовления разведений сыра

Состав:

лимоннокислый натрий — 20 г;

дистиллированная вода — 1000 см3.

В 1000 см3 дистиллированной воды растворяют 20 г лимоннокислого натрия, разливают в пробир­ки по 10 см3 и колбы по 93 см3 и стерилизует при (121 ±2) °С в течение (15± 1) мин.

  1. Приготовление раствора двууглекислого натрия для нейтрализации проб кисломолочных продуктов и закваски

В 100 см3 дистиллированной воды растворяют 10 г двууглекислого натрия, разливают по 10—20 см3 в пробирки и стерилизуют при (121І2) °С в течение 15 мин.

  1. Приготовление питательной среды для определения количества мезофильных аэробных и факультативи о-a н а- эробных микроорганизмов

Состав:

гидролизованное молоко — 25 г;

агар — 15 г;

питьевая вода — до 1000 см3.

  1. г сухой питательной среды помещают в колбу и доливают питьевой водой до 1000 см3. Смесь перемешивают, нагревают до полного раствбрения агара (при наличии осадка профильтровывают), устанавливают pH 6,8—7,0. Разливают в пробирки или колбы и стерилизуют при (121±2) °С в течение (15±1) мин.

(Измененная редакция, Изм. № 3).

  1. Приготовление среДьт Кесслер (модифицированной)

Состав:

пептон — 10 г;

стерильная желчь ~ 50 см3;

лактоза — 2,5 г;

раствор кристаллического фиолетового

с массовой концентрацией 10 г/дм3 — 2 см3;

дистиллированная вода — ДО Ю00 см3.

  1. г сухой среды Кесслер помещают в колбу и доливают питьевой водой до 1000 см3. Смесь размешивают и кипятят при помешивании (25±5) мин. Объем доводят питьевой водой до 1000 см3 и фильтруют через вату. Разливают в пробиркй с поплавками по 5 см3 или колбочки с поплавками по 40—50 см3 и стерилизуют при (121 ±2) °С в течение (Ю±1) мин.

Готовая среда должна иметь темно-фиолетовый цвет.

Допускается приготовление среды КессДер из отдельных ингредиентов.

Для этого к 1000 см3 питьевой воды прибавляют 10 г пептона и 50 см3 стерильной желчи (желчь бычья или других сельскохозяйственных животных), кипятят смесь при помешивании (25±5) мин и

ГОСТ 9225-84 С. 6

фильтруют ее через вату. В полученном фильтрате растворяют 2,5 г лактозы и доводят объем питьевой водой до 1000 см3, устанавливают реакцию среды (pH 7,4—7,6), после чего добавляют 2 см3 раствора кристаллического фиолетового с массовой концентрацией 10 г/дм3, разливают в пробирки с поплав­ками по 5 см3 или колбочки с поплавками по 40—50 см3 и стерилизуют при (121±2) °С в течение (10± 1) мин. Готовая среда должна иметь темно-фиолетовый цвет.

  1. 3.2.12. (Исключены, Изм. № 3).

  1. Приготовление раствора сычужного фермента

0,5 г сычужного порошка растворяют в 100 см3 воды, нагретой до (30±2) °С.

  1. Приготовление реактивов из метиленового голубого

    1. Приготовление спиртового раствора метиленового голубого для окраски препаратов

10 г метиленового голубого смешивают со 100 см3 96%-ного раствора этилового спирта. Раствор ставят в термостат при температуре (37±1) °С на 24 ч, а затем фильтруют в термостате при той же температуре.

Срок хранения раствора метиленового голубого в термостате при температуре (37± 1) °С не более З мес.

(Измененная редакция, Изм. № 2).

  1. (Исключен. Изм. № 2).

  2. Приготовление краски для препаратов

К 30 см3 спиртового раствора метиленового голубого прибавляют 100 см3 дистиллированной воды и 1 см3 раствора гидроокиси калия с массовой концентрацией 10 г/дм3.

(Измененная редакция, Изм. № 2).

  1. . Для проведения редуктазной пробы с метиленовым голубым готовят водный раствор с массовой концентрацией метиленового голубого 0,005 г/см3. Для этого 0,5 г метиленового голубого переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3 и доводят до метки прокипяченной и охлажденной до (25±2) °С дистиллированной водой. Смесь тщательно перемешивают до полного растворения. Срок хранения приготовленного раствора не более 12 мес в банках, защищенных от света.

Для приготовления раствора метиленового голубого с массовой концентрацией метиленового голубого 0,00015 г/см3 берут 6 см3 раствора с массовой концентрацией 0,005 г/см3 и смешивают со 194 см3 дистиллированной воды. Срок хранения приготовленного раствора не более 30 сут в холодиль­нике.

(Введен дополнительно, Изм. № 2).

(Измененная редакция, Изм. № 3).

  1. Приготовление раствора резазурина

Основной раствор резазурина-натриевой соли для редуктазной пробы готовят следующим обра­зом: 100 мг резазурина-натриевой соли переносят в мерную колбу вместимостью 200 см3 и доводят до метки прокипяченной и охлажденной до (25±2) °С дистиллированной водой. Смесь тщательно переме­шивают.

Срок хранения основного раствора резазурина-натриевой соли не более 30 сут при температуре 8-10 °С.

Рабочий раствор резазурина-натриевой соли готовят разбавлением основного раствора прокипя­ченной и охлажденной до (25±2) °С дистиллированной водой в соотношении 1:2,5 (например, к 10 см3 основного раствора прибавляют 25 см3 воды). Массовая доля резазурина в рабочем растворе 0,014 %.

При использовании резазурина в таблетках (производства ГДР) для приготовления рабочего раствора 1 таблетку растворяют в 50 см3 прокипяченной и охлажденной до (25±2) °С дистиллирован­ной воды. Массовая доля резазурина в этом растворе 0,01 %.

Срок хранения рабочего раствора резазурина не более 3 сут при температуре 0—5 °С.

Основной и рабочий раствор хранят в банках, защищенных от света.

  1. Определение pH среды

Определение pH питательной среды проводят с помощью pH-метра по прилагаемым к ним инструкциям.

Ориентировочное определение pH питательных сред может проводиться с помощью индикатор­ных бумажек или готового универсального индикатора.

  1. Подготовка проб к анализу

  1. Молоко, сливки, сметана

Отобранные пробы перед исследованием тщательно перемешивают.

2*

С. 7 ГОСТ 9225-84

  1. Кисломолочные нзпитки и продукты, закваски

Отобранные пробы перед исследованием перемешивают и нейтрализуют. Для этого отбирают стерильной пипеткой 10 см3 исследуемого продукта или закваски в стерильную пробирку или колбоч­ку и добавляют 1 см3 стерильного раствора двууглекислого натрия массовой концентрации 100 г/дм3, содержимое перемешивают.

  1. Мороженое

Отобранные пробы фасованного мороженого развертывают и помещают в стерильную посуду с притертой или ватной пробкой.

Перед исследованием посуду с пробой нагревают в водяной бане при температуре 40—45 °С до расплавления пробы.

  1. Сыр, творог, творожные изделия

10 г сыра, творога или творожных изделий взвешивают на стерильном часовом стекле, чашке Петри, в бюксе, переносят в стерильную иди профламбированную ступку, прикрытую крышкой от чашки Петри, и тщательно растирают.

  1. Масло

Перед исследованием пробу расплавляют на водяной бане при температуре 40—45 °С и перемеши­вают до получения однородной эмульсии.

  1. Сгущенные молочные консервы

Банки с продуктом тщательно промывают щеткой в чистой теплой воде и вытирают.

Перед вскрытием крышку банки, пробку бочки и часть днища вокруг пробки фламбируют.

Открывают банки стерильным консервным ножом, а пробку бочки пробойником. После вскры­тия отверстия банки и бочки немедленно закрывают стерильным пергаментом, профламбированной жестяной крышкой или крышкой чашки Петри. Содержимое банки тщательно перемешивают стериль­ной ложкой. Затем взвешивают стерильную сухую колбу и в нее помещают 10 г продукта.

  1. Сухие молочные продукты

Отобранную пробу тщательно перемешивают стерильной ложкой, взвешивают 10 г продукта на кусочке стерильного пергамента, на чашке Петри, в бюксе, затем взвешенную пробу помещают в стерильную колбу или другую посуду.

  1. Приготовление разведения продуктов для посева

    1. Перед посевом готовят десятикратные разведения продукта в стерильных растворах хлорис­того натрия, лимоннокислого натрия (для сыров) или фосфатного буфера. Для приготовления разведе­ний готовят все необходимые стерильные материалы и посуду в соответствии со спецификой анализа исследуемого продукта: пробирки с 9 см3 или колбы с 90 см3 растворов хлористого натрия или фосфат­ного буфера.

    2. Из проб молока, сливок, сметаны, кисломолочных напитков и продуктов, мороженого, масла отбирают стерильной пипеткой 10 см3 и вносят в 90 см3 стерильных растворов хлористого натрия или фосфатного буфера. Получают разведение 1:10.

Масло и мороженое вносят в растворы хлористого натрия или фосфатного буфера, подогретые до 40-45 °С.

  1. К приготовленным навескам по 10 г творога, творожных изделий; сгущенных молочных консервов и сухих молочных продуктов добавляют 90 см3 стерильных растворов хлористого натрия или фосфатного буфера, подогретых до 40—45 ’С, и взбалтывают в течение 3—5 мин до возможно более полного эмульгирования. Получают разведение 1:10.

К навеске сыра 10 г постепенно добавляют 90 см3 стерильных растворов хлористого натрия или лимоннокислого натрия или фосфатного буфера, подогретых до 40—45 °С, и тщательно перемешивают до полного эмульгирования. Получают разведение 1:10.

Из первого разведения 1:10 готовят последующие 1:100 и т. д.

Для приготовления каждого разведения берут новую стерильную пипетку. При посеве на чашки Петри посевной материал вносят от большего разведения к меньшему. В этом случае пользуются одной пипеткой.

  1. МЕТОДЫ АНАЛИЗА

    1. Метод определения редуктазы с метиленовым голубым

      1. Сущность метода

Метод основан на восстановлении метиленового голубого окислительно-восстановительными фер­ментами, выделяемыми в молоко микроорганизмами. По продолжительности обесцвечивания метиле­нового голубого оценивают бактериальную обсемененность сырого молока.

ГОСТ 9225-84 С. 8

  1. Проведение анализа

В пробирки наливают по 1 см3 рабочего раствора метиленового голубого и по 20 см3 исследуемого молока, закрывают резиновыми пробками и смешивают путем медленного трехкратного переворачи­вания пробирок.

Пробирки помещают в редуктазник с температурой воды (37±1) °С.

При отсутствии редуктазника можно пользоваться водяной баней, помещаемой в термостат с температурой (37±1) °С.

Вода в редуктазнике или водяной бане после погружения пробирок с молоком должна доходить до уровня жидкости в пробирке или быть немного выше. Температуру воды поддерживают в течение всего времени определения (37± 1) °С. Для предотвращения влияния на реакцию света редуктазник должен быть плотно закрыт крышкой. Момент погружения пробирок в редуктазник считают началом анализа. Наблюдение за изменением окраски ведут через 40 мин, 2,5 и 3,5 ч с начала проведения анализа. Окончанием анализа считают момент обесцвечивания окраски молока. При этом остающийся небольшой кольцеобразный окрашенный слой вверху (шириной не более 1 см) или небольшая окра­шенная часть внизу пробирки (шириной не более 1 см) в расчет не принимаются. Появление окраши­вания молока в этих пробирках при встряхивании не учитывают.

  1. Обработка результатов

В зависимости от продолжительности обесцвечивания молоко относят к одному из четырех клас­сов, указанных в табл. 1.

Таблица 1

Класс молока

Продолжительность обесцвечивания, ч

Ориентировочное количество бактерий в 1 см3 молока, КО Є

Высший

Более 3,5

До 300 тыс.

I

3,5

От 300 тыс. до 500 тыс.

II

2,5

От 500 тыс. до 4 млн.

III

40 мин

От 4 млн. до 20 млн.



    1. 4.1.3. (Измененная редакция, Изм. № 2).

  1. Метод определения редуктазы с резазурином

    1. Сущность метода

Метод основан на восстановлении резазурина окислительно-восстановительными ферментами, выделяемыми в молоко микроорганизмами. По продолжительности изменения окраски резазурина оценивают бактериальную обсемененность сырого молока.

  1. Проведение анализа

Пробу с резазурином следует проводить не ранее чем через 2 ч после доения.

В пробирки наливают по 1 см3 рабочего раствора резазурина и по 10 см3 исследуемого молока, закрывают резиновыми пробками и смешивают путем медленного трехкратного перевертывания про­бирок. Пробирки помещают в редуктазник с температурой воды (37± 1) °С.

При отсутствии редуктазника можно использовать водяную баню, помещенную в термостат с температурой (37±1) °С.

Вода в редуктазнике или водяной бане после погружения пробирок с молоком должна доходить до уровня жидкости в пробирке или быть немного выше, ее поддерживают в течение всего времени определения (37±1) °С.