---

b) выбор тканей;

c) выделение частиц тканями и характер их распространения;

d) барьерные свойства тканей, их фильтрующие свойства;

e) обработка, дезинфекция и стерилизация тканей;

f) эффективность удаления частиц с тканей;

g) дизайн (конструкция) одежды;

h) проницаемость тканей, свойства их поверхностей и устойчивость к трению.

При повышенном уровне биозагрязнений тканей следует определить их причину. Наиболее распространенными причинами являются:

a)плохая способность удерживать частицы, определяемая свойствами тканей, например типом волокон, их фактурой или конструктивными особенностями;

b) неправильная эксплуатация одежды, например, недостаточно частая ее смена;

c) неудовлетворительная обработка (стирка) и/или стерилизация одежды;

d) неправильно выбранные режимы обработки (стирки), не соответствующие требованиям микробиологической чистоты в зоне риска;

e) повторное загрязнение одежды после обработки (стирки, стерилизации).

Настоящее приложение не содержит руководства по определению проницаемости тканей для жизнеспособных частиц. Оно также не устанавливает специальные требования к тканям, которые могут предъявляться в некоторых областях применения (например, к стерилизуемым и безворсовым тканям), или к качеству тканей, оцениваемому визуально или на ощупь.

D.2 Общие положения

Обнаружение и текущий контроль микробного загрязнения тканей в зонах риска выполняется путем отбора жизнеспособных частиц при помощи соответствующих устройств для отбора проб согласно плану.

D.3 Контактные устройства для отбора проб

Для обнаружения жизнеспособных частиц в тканях (в т. ч. в небольших элементах тканей) могут использоваться контактные устройства для отбора проб (приложение С). По возможности, перед прикладыванием контактной пластины испытуемая ткань должна помещаться на твердую плоскую гладкую поверхность.

При использовании устройств для отбора проб, содержащих на аппликаторе обезвоженную среду, может потребоваться ее регидратация при помощи определенного количества жидкости, установленного в инструкции изготовителя. Регидратация среды может быть также проведена с использованием растворов, которые инактивируют или нейтрализуют детергирующие или дезинфицирующие средства.

Примечание: При аттестации (валидации) процессов стерилизации стерильных материалов (тканей) уровень их микробного загрязнения может быть определен удалением микроорганизмов с образцов тканей, помещенных в экстрагирующий раствор (например, с использованием отжимной машины). После этого экстрагирующий раствор следует профильтровать (мембранная фильтрация).

D.4 Оформление результатов

Уровень биозагрязнений испытуемой ткани выражается числом жизнеспособных единиц на 1дм².

Приложение Е
(справочное)
Порядок аттестации (валидации) процессов обработки одежды и тканей

Е.1 Введение

Настоящее приложение содержит методы аттестации (валидации) процессов обработки одежды и тканей для случаев, когда предусмотрен контроль биозагрязнений.

Е.2 Методы контроля

Е.2.1 Основные положения

Аттестация процессов обработки одежды и тканей проводится с использованием образцов тканей (одежды), которые подлежат обработке. Образцы загрязняются известными штаммами микроорганизмов (суспензией микроорганизмов) в концентрации, достаточной для проведения количественной оценки. Затем образцы обрабатываются согласно аттестуемому процессу, и проверяется способность этого процесса уменьшать число микроорганизмов: бактерий в 10⁵ раз, дрожжей и спор грибов - в 10⁴ раз.

Примечания:

1. Аттестация процессов обработки одежды и тканей разделяется на два этапа:

- подтверждение (аттестация) приемлемости условий проведения испытаний;

- собственно испытания и аттестация процесса.

2. Испытуемые образцы (test pieces) проходят обработку в объеме загрузки при аттестации процесса обработки.

3. Контрольные образцы (control pieces) служат для сравнения с испытуемыми образцами и проходят обработку согласно тестам В и С в порядке, отличающемся от реального.

При аттестации выполняются следующие тесты:

a) Тест А. Подсчитывается число жизнеспособных единиц в исходной суспензии микроорганизмов. Этот тест необходим для подтверждения того, что исходная концентрация микроорганизмов достаточна для оценки требуемого снижения популяции микроорганизмов.

b) Тест В. Определяется число жизнеспособных единиц на контрольных образцах, которые были загрязнены такой же суспензией микроорганизмов, что и испытуемые образцы, но не прошли процесс обработки. Этот тест предназначен для проверки того, что жизнеспособность микроорганизмов не изменяется за период проведения аттестации.

c) Тест С. Определяется число жизнеспособных единиц на контрольных образцах, которые не были загрязнены до проведения обработки, но были обработаны так же, как и испытуемые образцы. После обработки контрольные образцы загрязняются суспензией микроорганизмов. Этот тест предназначен для иллюстрации влияния различных факторов на результат оценки количества жизнеспособных микроорганизмов при проведении испытаний (время, механический эффект, температура, наличие остатков моющих веществ на ткани и пр.).

Исходная суспензия микроорганизмов готовится в белковом растворе. На испытуемые образцы наносится определенный объем суспензии. Испытуемые образцы проходят обработку в составе загрузки, имитирующей обычную загрузку. После обработки подсчитывается число микроорганизмов на испытуемых образцах. Оценивается снижение популяции микроорганизмов и полученный результат сравнивается с приведенными выше критериями.

Одежда, которая использовалась при испытаниях в качестве имитирующей загрузки, должна пройти стерилизацию до последующего использования или быть уничтоженной.

Е.2.2 Микроорганизмы

Е.2.2.1 Бактерии

Следует использовать, как минимум, штаммы бактерий следующих видов:

a) Enterococcusfr/raeATCC 10541;

b) Escherichia coli ATCC10536.

E.2.2.2. Грибы

В случае необходимости проверки на активность грибов следует использовать, как минимум, штаммы грибов следующих видов:

a) Saccharomyces cerevisiae ATCC 9084;

b) Aspergillus niger ATCC 16404.

E.2.2.3 Споры бактерий

В случае необходимости проверки на активность спор следует использовать, как минимум, споры штамма Bacillus subtilis var. niger ATCC 6633.

E.2.3 Суспензии микроорганизмов

E.2.3.1 Среда для приготовления суспензий

В качестве среды для приготовления суспензии микроорганизмов следует использовать стерильный раствор пептона в физиологическом растворе. Для грибов в среду добавляется 0,05%-ный (объем/объем) раствор полисорбата 80 или другого аттестованного ингредиента. Для спор бактерий следует использовать стерильную дистиллированную воду.

Е.2.3.2 Среда для смыва микроорганизмов

Для смыва микроорганизмов обычно используется среда для приготовления суспензий, дистиллированная вода или любой раствор, который можно профильтровать в условиях проведения испытаний. При необходимости в эту среду можно добавлять средство для нейтрализации дезинфицирующего вещества.

Е.2.3.3 Белковые растворы

Готовятся следующие водные растворы.

Раствор А. 3%-ный (масса/объем) раствор бычьего альбумина (фракция Кона V), доведенный до рН 6,8±0,2 и, при необходимости, стерилизуемый фильтрованием.

Раствор В. 15%-ный (масса/объем) раствор экстракта дрожжей с рН 7,0±0,2, стерилизованный аттестованным методом.

Раствор С, Смесь растворов А и В в отношении 100:20, приготовленная так, что концентрация каждого белка в результирующем растворе должна составлять 2,5% (масса/объем).

Е.2.4 Контрольные и испытуемые образцы

Для контрольных и испытуемых образцов используется тот же материал, который проходил обработку в аттестуемом процессе. Эти образцы могут использоваться только однократно. Размеры образцов должны быть не менее 10×5см (в том числе загрязняемый участок размерами 5×5см) и иметь свободные края для прикрепления их к материалу в загрузке.

Е.2.5 Приготовление суспензии микроорганизмов

Готовится суспензия микроорганизмов, содержащая > 10⁸ клеток бактерий или > 10⁷ клеток грибов или спор бактерий в 1мл.

Е.2.6 Методика испытаний

Е.2.6.1 Проверка (аттестация) условий проведения испытаний

Выполняются следующие тесты (Е.2.1).

Тест А. После соответствующего разведения инокулируемой суспензии число жизнеспособных единиц в агаровой среде подсчитывается не менее двух раз. Среднее значение из двух подсчетов в растворе, содержащем от 30 до 300 жизнеспособных единиц в 1мл, обозначается N, Проверяется, что содержание микроорганизмов в исходной суспензии составляет > 10⁸ для бактерий или > 10⁷ для клеток грибов или спор бактерий в 1мл;

Тест В. Два контрольных образца загрязняются 0,5мл суспензии, содержащей от 30 до 300 жизнеспособных единиц в 1мл. Два других контрольных образца загрязняются 0,5мл суспензии, содержащей от 300 до 3000 жизнеспособных единиц в 1мл. Эти четыре контрольных образца загрязняются, а затем контролируются так же, как и испытуемые образцы, но они не проходят стадию обработки (аттестуемым процессом). Затем эти образцы помещаются в питательный агар и инкубируются. После этого подсчитывается число жизнеспособных единиц. Среднее число жизнеспособных единиц, соответствующее более загрязненным образцам, обозначается _{, а аналогичное число для менее загрязненных образцов - .}

Тест С. На один контрольный образец наносится 0,5мл белкового раствора С (Е.2.3.3). Этот образец проходит полный цикл обработки. Затем он погружается в 100мл среды для смыва микроорганизмов, встряхивается в течение 15-30с, после чего помещается в чашку Петри. Затем на контрольный образец наносится 1мл суспензии, содержащей от 30 до 3000 жизнеспособных единиц. Далее образец покрывается 10мл агаровой среды, инкубируется и затем подсчитывается число проросших единиц. Это число обозначается n_у 100мл ранее использованной среды для смыва микроорганизмов фильтруется через мембранный фильтр, удерживающий микроорганизмы. После трехкратного ополаскивания на фильтр наносится 50мл новой среды для смыва микроорганизмов. К 50мл среды для смыва микроорганизмов добавляется 1мл суспензии, содержащей от 30 до 300 жизнеспособных единиц в 1мл с последующим фильтрованием. Фильтр и фильтровальное устройство ополаскиваются 50мл новой среды для смыва микроорганизмов, которая также фильтруется. После чего фильтр помещается на агаровую среду, инкубируется и подсчитывается число выросших жизнеспособных единиц. Полученное число обозначается n₂. Затем вычисляется среднее значение n = (n₁+n₂)/2.

Если _{, то условия испытаний считаются приемлемыми (аттестованными) для проведения аттестации процесса обработки.}

Если _{≤0,5N и/или ≤0,05л⁷, и/или n≤0,05N, то условия испытаний для аттестации процесса обработки неприемлемы. Следует повторить вышеприведенные операции, например, добавив соответствующие компоненты для нейтрализации остатков химических веществ в контрольных образцах, подвергаемых обработке по аттестуемому методу.}

Е.2.6.2 Испытания образцов

Смешиваются 3мл суспензии микроорганизмов (Е.2.5) и 2мл раствора белкового раствора С (Е.2.3.3) и инкубируются в течение 5мин. при комнатной температуре. На испытуемый образец наносится 0,5мл полученной суспензии. Испытания для микроорганизмов каждого вида проводятся не менее трех раз.

После обработки аттестуемым процессом контрольные образцы передаются в лабораторию как можно быстрее. Каждый образец помещается в 100мл среды для смыва микроорганизмов, которая перемешивается в течение 15-30с. После этого выполняются следующие операции:

a) 0,1 мл получившегося раствора помещается в 9,9мл среды для смыва и перемешивается. Получившиеся 10мл среды трижды смываются на фильтр 50мл новой среды для смыва. Затем фильтр помещается на агаровую питательную среду и инкубируется;

b) 1мл раствора наносится на фильтр и трижды смывается 50мл новой среды для смыва. Затем фильтр помещается на агаровую питательную среду и инкубируется;

c) оставшиеся 98,9мл раствора наносятся на фильтр и трижды смываются 50мл новой среды для смыва. Затем фильтр помещается на агаровую питательную среду и инкубируется;

d) каждый испытуемый образец помещается на чашку Петри в асептических условиях, покрывается агаром и инкубируется.

Далее подсчитываются:

_{- число жизнеспособных единиц, выявленных на фильтрах, т.е. среднее значение результатов подсчета по Е.2.6.2, перечисления а), б) и с);}

_{- среднее число жизнеспособных единиц, выявленных на испытуемых образцах согласно Е.2.6.2 d);}

R = _{+ - число микроорганизмов, оставшихся после обработки по аттестуемому процессу.}

Е.2.7 Оформление результатов

Определяется отношение величины N (числа микроорганизмов, нанесенных на контрольные образцы) к величине R. Проверяется соответствие полученных результатов условию снижения числа бактерий, по крайней мере, в 10⁵ раз и снижение числа дрожжей и спор грибов, по крайней мере, в 10⁴ раз (Е.2.1).

Приложение F
(справочное)
Методы определения биозагрязнений в жидкостях

F.1 Введение

Настоящее приложение содержит методы определения биозагрязнений в жидкостях (как водных, так и безводных) для случаев, когда предусмотрено проведение контроля биозагрязнений. Эти методы включают в себя отбор представительных проб для обнаружения жизнеспособных частиц, являющихся предметом контроля.

Биозагрязнения в жидкостях оцениваются в соответствии с основными принципами настоящего стандарта, которые требуют ведения документированной системы контроля биозагрязнений в чистых помещениях.

В дополнение к этому следует учитывать следующие факторы: