Пептон сухой ферментативный для бактериологических целей. Технические условия

Содержание истинного пептона (Х₃) в процентах вычисляют по формуле

где А — содержание истинного пептона в испытуемом растворе, определенное по градуировочному графику, %;

0,5—масса пептона (препарата), содержащаяся в 100 г 0,5%-ного раствора, г.

. За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. До­пускаемые расхождения между результатами параллельных опре­делений не должны превышать 5%.

Для проведения испытания применяют:

весы аналитические;

колбы Къельдаля вместимостью 50—100 мл по ГОСТ 10394—72;

аппарат для отгонки аммиака;

пипетки вместимостью 1, 2, 5 мл; ,

бюретки вместимостью 25 или 50 мл с ценой деления 0,05 мл;

воду дистиллированную по ГОСТ 6709—72;

кислоту серную по ГОСТ 4204—77, концентрированную и 0,1 н. раствор;

натрия гидрат окиси по ГОСТ 4328—77, 30—33%-ный и 0,1 н. растворы, приготовленные на предварительно прокипяченной дис­тиллированной воде;

водорода перекись по ГОСТ 10929—76;

. метиловый красный по ГОСТ 5853—51;

метиловую синь;

спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962—67;метиловый оранжевый по ГОСТ 10816—64, 0,1%-ный раствор.

В колбу Къельдаля помещают 1 мл 5 %-ного раствора пептона и прибавляют 2 мл концентрированной серной кислоты. В гор­лышко колбы вставляют стеклянный грушевидный баллончик или небольшую воронку с запаянным кончиком и минерализуют пробу сначала на слабом огне, затем степень нагрева усиливают, не до­пуская выбрасывания кипящей смеси в узкую часть колбы. Мине­рализацию проводят в присутствии катализатора перекиси водоро­да. Катализатор добавляют после начала кипения по 0,5 мл через каждые 15—20 мин до полного обесцвечивания раствора.

После охлаждения содержимое колбы переносят с 10—12 мл дистиллированной воды в колбу для отгона. Полноту переноса проверяют по индикатору метиловому оранжевому. Последняя порция смывных вод должна остаться желтой.

В приемную колбу аппарата Къельдаля наливают 20 мл 0,1 н. раствора серной кислоты и 2 капли индикатора Таширо. Индика­тор Таширо готовят путем растворения 0,4 г метилового красного и 0,2 г метиловой сини в 200 мл 96 %-ного этилового спирта.

Отгонную колбу подсоединяют к холодильнику и парообразо­вателю. Содержимое отгонной колбы нейтрализуют по индикатору метиловому оранжевому 30—33%-ным раствором гидрата окиси натрия. Отгон проводят до тех пор, пока в приемной колбе собе­рется около 70 мл раствора.

Содержимое приемной колбы титруют 0,1 н. раствором гидрата окиси натрия до перехода окраски раствора от фиолетовой к зе­леной. Одновременно ставят контрольный опыт на реактивы, для чего вместо раствора пептона в колбу для минерализации берут 1 мл дистиллированной воды.

Содержание общего азота (Х₄) в процентах вычисляют по формуле

_у _ (УК—У,К,) -Црши-110)0

3. ' ода

где V—количество 0,1 н. раствора серной кислоты, налитое в приемную колбу, мл;

К—поправочный коэффициент к титру 0,1 н. серной кисло­ты;

V1 — количество 0,1 н. раствора гидрата окиси натрия, израс­ходованное на титрование испытуемой или контрольной пробы, мл;

К — поправочный коэффициент к титру 0,1 н. раствора гид­рата окиси натрия;

{),05— масса пептона, содержащаяся в 1 мл 5 %-ного раствора, взятого на анализ, г;

0,0014 — количество азота, эквивалентное 1 мл 0,1 н. раствора серной кислоты, г.

За окончательный результат испытания принимают разность между средними арифметическими результатов двух параллель­ных определений в опытных и контрольных пробах. Допускаемые расхождения между результатами двух параллельных определе­ний не должны превышать 0,2%.

Для проведения испытания применяют:

микробюретки;

пипетки вместимостью 1, 2, 5, 10 мл;

чашки Конвея;

колбы Кьельдаля вместимостью 50—100 мл по ГОСТ

10394—72;

мерные колбы вместимостью 100 мл по ГОСТ 1770—74;

вазелин по ГОСТ 5774—76;

водорода перекись по ГОСТ 10929—76;

метиловый красный по ГОСТ 5853—51;

метиленовую синь;

спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962—67;

кислоту серную ГОСТ 4204—77, концентрированную и 0,025 н. раствор;

натрия гидрат окиси (натр едкий) по ГОСТ 4328—77, 40%-ный и 0,025 н. растворы;

дистиллированную воду по ГОСТ 6709—72.

Приготовление индикатора Таширо по п. 3.8.1.2.

5 мл 5%-ного раствора пептона минерализуют с подогревом в колбе Кьельдаля с 10 мл серной кислоты (концентрированной) • до получения бесцветного раствора. В качестве катализатора ис­пользуют 0,5 мл пергидроля. После минерализации образец пере­носят количественно в мерную колбу на 100 мл и доводят до мет­ки дистиллированной водой. Во внутреннюю часть чашки Конвея наливают точно 2 мл 0,025 н. раствора серной кислоты. Чтобы используемая жидкость не растекалась, чашку устанавливают на­клонно. Затем закрывают крышкой, смазанной вазелином, остав­ляя небольшую щель, через которую пипеткой вносят в наружную часть чашки 1 мл испытуемого раствора после минерализации. Передвигают чашку так, чтобы осталась щель шириной 5—6 мм с противоположной стороны и через нее быстро вливают 4 мл рас­твора 40 %-ной щелочи. Чашку плотно закрывают крышкой, осто­рожно перемешивают круговыми движениями содержимое и ос­тавляют на 15—18 ч. Несвязанный с аммиаком избыток кислоты оттитровывают 0,025 н. раствором едкого натра по индикатору Таширо. Параллельно ставят контрольную пробу, для чего во внешнюю часть чашки Конвея помещают вместо испытуемого рас­твора дистиллированную воду.

Содержание общего азота (Х5) в процентах вычисляют по фор­муле

V 0,00035(V— 100- 100- 1<Ю

%⁵ 5-5-1

где V — количество 0,025 н. раствора едкого натра, израсходо­ванное на титрование контрольной пробы, мл;

— количество 0,025 н. раствора едкого натра, израсходо­ванное на титрование испытуемой пробы, мл;

К— поправочный коэффициент к титру 0,025 н. раствора ед­кого натра;

0,00035—количество азота, эквивалентное 1 мл 0,025 н. раствора едкого натра, г;

5—масса пептона, взятая для получения 5%-ного раство­ра, г;

5 — количество препарата, взятое для минерализации, мл;

1. —количество испытуемого раствора, мл.

За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. До­пускаемые расхождения между результатами параллельных опре­делений не должны превышать 0,2%.

Для проведения испытания применяют:

рН-метр;

стаканы лабораторные по ГОСТ 10394—72;

пипетки вместимостью 1, 2 и 20 мл;

бюретки вместимостью 5 и 10 мл с ценой деления 0,05 мл;

формалин технический по ГОСТ 1625—75;

натрия гидрат окиси по ГОСТ 4328—77, 0,1 н. раствор;

кислоту серную по ГОСТ 4204—77, 0,1 н. раствор;

фенолфталеин по ГОСТ 5850—72, 1%-ный спиртовый раствор; воду дистиллированную по ГОСТ 6709—72.

Непосредственно перед работой готовят формольную смесь. Для этого к 50 мл формалина добавляют 1 мл 1 %-ного раствора фенолфталеина и 0,1 н. раствором гидрата окиси натрия доводят окраску смеси до слабо-розовой.

К 2 мл прозрачного 5%-ного раствора пептона, приготовлен­ного в соответствии с п. 3.4.2, приливают 18 мл дистиллированной воды и доводят pH смеси до 7,0 потенциометрически 0,1 н. рас­твором гидрата окиси натрия или серной кислоты. Затем прили­вают 2 мл формольной смеси и при постоянном перемешивании потенциометрически титруют 0,1 н. раствором гидрата окиси нат- трия до pH 9,2.

Одновременно ставят контроль на реактивы, для чего вместо 2 мл 5%-ного пептона берут 2 мл дистиллированной воды.

Содержание азота аминогрупп аминокислот и низших пептидов в пептоне (Аб) в процентах вычисляют по формуле

у _ (V-Vi)K-одам-log

где V—количество 0,1 н. раствора гидрата окиси натрия, израс­ходованное на титрование испытуемой пробы, мл;

V1 — количество 0,1 н. раствора гидрата окиси натрия, израс­ходованное на титрование контрольной пробы, мл;

К — поправочный коэффициент к титру 0,1 н. раствора гид­рата окиси натрия;

0,0014 — количество азота, эквивалентное 1 мл 0,1 н. раствора гидрата окиси натрия, г;

0,1—масса пептона, содержащаяся в 2 мл 5%-ного пепто­на, г.

За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. До­пускаемые расхождения между результатами параллельных опре­делений не должны превышать 0,2%.

Для проведения испытания применяют:

фотоэлектроколориметр;

пипетки вместимостью 5 и 10 мл;

пробирки стеклянные по ГОСТ 10515—75;

кислоту трихлоруксусную 20%-ный раствор.

К 5 мл фильтрата 5%-ного раствора пептона, приготовленного в соответствии с п. 3.4.2, добавляют 5 мл 20 %-ного раствора три­хлоруксусной кислоты и хорошо перемешивают. Через 5 мин опре­деляют оптическую плотность смеси на фотоэлектроколориметре при длине волны 630 нм (красный светофильтр) в кюветах с ра­бочей длиной 10 мм против того же раствора пептона, разведен­ного 1 : 1 дистиллированной водой.

За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. До­пускаемые расхождения между результатами параллельных опре­делений не должны превышать 0,05%.

Для проведения испытания применяют:

весы технические с погрешностью взвешивания не более 0,01 г; элемент нагрева (горелку, плитку);

пипетки вместимостью 1, 2, 10, 20 и 25 мл;

бюретки вместимостью 25 мл с ценой деления 0,05 мл;

стаканы лабораторные по ГОСТ 10394—72;

воду дистиллированную по ГОСТ 6709—72;

серебро азотнокислое по ГОСТ 1277—75, 0,1 н. раствор;

квасцы железоаммониевые по ГОСТ 4205—77, насыщенный раствор;

калий роданистый по ГОСТ 4239—77 или аммоний роданистый по СТ СЭВ 222—75, 0,1 н. раствор;

кислоту азотную по ГОСТ 4461—77, концентрированную.

К 20 мл 1 %-ного раствора пептона, приготовленного в соот­ветствии с п. 3.4.2, добавляют 30 мл дистиллированной воды, 1 мл концентрированной азотной кислоты и 10 мл 0,1 н. раствора азот­нокислого серебра. Раствор нагревают до начала кипения и быст­ро охлаждают путем погружения стакана с раствором в сосуд с водой комнатной температуры. После охлаждения смеси добавля­ют 2 мл насыщенного раствора железоаммониевых квасцов (инди­катор) й титруют 0,1 н. раствором роданистого калия (или рода­нистого аммония) до появления кирпично-красного окрашивания.

Содержание хлоридов (ЛГ₇) в процентах вычисляют по формуле _v(VK-ViKi) -0,003545- 100

⁷ 0„2

где V—количество 0,1 н. раствора азотнокислого серебра, взя­тое в стакан с пробой, мл;

К— поправочный коэффициент к титру 0,1 н. раствора азот­нокислого серебра;

Vi — количество 0,1 н. раствора роданистого калия или ро­данистого аммония, израсходованное на титрование пробы, мл;

Ki — поправочный коэффициент к титру 0,1 н. раствора ро­данистого калия или роданистого аммония;

0,003545— количество хлоридов (хлор-иона), эквивалентное 1 мл 0,1 н. раствора азотнокислого серебра, г;

0,2— масса пептона, содержащаяся в 20 мл 1 %-ного раство­ра, г

.За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. До­пускаемые расхождения между результатами параллельных опре­делений не должны превышать 0,1%.

Для проведения испытания применяют:

весы технические с погрешностью взвешивания не более 0,01 г; элемент нагрева (плитку, горелку);

печь муфельную;

тигли фарфоровые по ГОСТ 9147—73;

цилиндры мерные вместимостью 10 мл по ГОСТ 1770—74;

кислоту серную по ГОСТ 4204—77, концентрированную;

аммоний уксуснокислый по ГОСТ 3117—78, насыщенный рас­твор;

воду дистиллированную по ГОСТ 6709—72;

кислоту уксусную по ГОСТ 61—75, 10%-ный раствор;

натрий сернистый по ГОСТ 2053—77, насыщенный раствор;

натрия гидрат окиси по ГОСТ 4328—77, 10%-ный раствор; лакмус или универсальный индикатор.

Навеску пептона массой 1 г, взвешенную с погрешностью не более 0,02 г, помещают в тигель, смачивают 2 мл концентрирован­ной серной кислоты и осторожно озоляют сначала на плитке или горелке, а затем в муфельной печи при 500—600°С до получения однородной золы светло-серого цвета.