Обработка результатов
Содержание истинного пептона (Х3) в процентах вычисляют по формуле
где А — содержание истинного пептона в испытуемом растворе, определенное по градуировочному графику, %;
0,5—масса пептона (препарата), содержащаяся в 100 г 0,5%-ного раствора, г.
. За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Допускаемые расхождения между результатами параллельных определений не должны превышать 5%.
Определение содержания общего азота Содержание общего азота определяют методом Къельдаля или методом Къельдаля в сочетании с изотермической отгонкой в чашках Конвея.
Определение содержания общего азота методом Къельдаля
Аппаратура и реактивы
Для проведения испытания применяют:
весы аналитические;
колбы Къельдаля вместимостью 50—100 мл по ГОСТ 10394—72;
аппарат для отгонки аммиака;
пипетки вместимостью 1, 2, 5 мл; ,
бюретки вместимостью 25 или 50 мл с ценой деления 0,05 мл;
воду дистиллированную по ГОСТ 6709—72;
кислоту серную по ГОСТ 4204—77, концентрированную и 0,1 н. раствор;
натрия гидрат окиси по ГОСТ 4328—77, 30—33%-ный и 0,1 н. растворы, приготовленные на предварительно прокипяченной дистиллированной воде;
водорода перекись по ГОСТ 10929—76;
. метиловый красный по ГОСТ 5853—51;
метиловую синь;
спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962—67;метиловый оранжевый по ГОСТ 10816—64, 0,1%-ный раствор.
Проведение испытания
В колбу Къельдаля помещают 1 мл 5 %-ного раствора пептона и прибавляют 2 мл концентрированной серной кислоты. В горлышко колбы вставляют стеклянный грушевидный баллончик или небольшую воронку с запаянным кончиком и минерализуют пробу сначала на слабом огне, затем степень нагрева усиливают, не допуская выбрасывания кипящей смеси в узкую часть колбы. Минерализацию проводят в присутствии катализатора перекиси водорода. Катализатор добавляют после начала кипения по 0,5 мл через каждые 15—20 мин до полного обесцвечивания раствора.
После охлаждения содержимое колбы переносят с 10—12 мл дистиллированной воды в колбу для отгона. Полноту переноса проверяют по индикатору метиловому оранжевому. Последняя порция смывных вод должна остаться желтой.
В приемную колбу аппарата Къельдаля наливают 20 мл 0,1 н. раствора серной кислоты и 2 капли индикатора Таширо. Индикатор Таширо готовят путем растворения 0,4 г метилового красного и 0,2 г метиловой сини в 200 мл 96 %-ного этилового спирта.
Отгонную колбу подсоединяют к холодильнику и парообразователю. Содержимое отгонной колбы нейтрализуют по индикатору метиловому оранжевому 30—33%-ным раствором гидрата окиси натрия. Отгон проводят до тех пор, пока в приемной колбе соберется около 70 мл раствора.
Содержимое приемной колбы титруют 0,1 н. раствором гидрата окиси натрия до перехода окраски раствора от фиолетовой к зеленой. Одновременно ставят контрольный опыт на реактивы, для чего вместо раствора пептона в колбу для минерализации берут 1 мл дистиллированной воды.
Обработка результатов
Содержание общего азота (Х4) в процентах вычисляют по формуле
у _ (УК—У,К,) -Црши-110)0
' ода
где V—количество 0,1 н. раствора серной кислоты, налитое в приемную колбу, мл;
К—поправочный коэффициент к титру 0,1 н. серной кислоты;
V1 — количество 0,1 н. раствора гидрата окиси натрия, израсходованное на титрование испытуемой или контрольной пробы, мл;
К — поправочный коэффициент к титру 0,1 н. раствора гидрата окиси натрия;
{),05— масса пептона, содержащаяся в 1 мл 5 %-ного раствора, взятого на анализ, г;
0,0014 — количество азота, эквивалентное 1 мл 0,1 н. раствора серной кислоты, г.
За окончательный результат испытания принимают разность между средними арифметическими результатов двух параллельных определений в опытных и контрольных пробах. Допускаемые расхождения между результатами двух параллельных определений не должны превышать 0,2%.
Определение содержания общего азота методом Кьельдаля в сочетании с изотермической отгонкой в чашках Конвея
Аппаратура и реактивы
Для проведения испытания применяют:
микробюретки;
пипетки вместимостью 1, 2, 5, 10 мл;
чашки Конвея;
колбы Кьельдаля вместимостью 50—100 мл по ГОСТ
10394—72;
мерные колбы вместимостью 100 мл по ГОСТ 1770—74;
вазелин по ГОСТ 5774—76;
водорода перекись по ГОСТ 10929—76;
метиловый красный по ГОСТ 5853—51;
метиленовую синь;
спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962—67;
кислоту серную ГОСТ 4204—77, концентрированную и 0,025 н. раствор;
натрия гидрат окиси (натр едкий) по ГОСТ 4328—77, 40%-ный и 0,025 н. растворы;
дистиллированную воду по ГОСТ 6709—72.
Подготовка к испытанию
Приготовление индикатора Таширо по п. 3.8.1.2.
Проведение испытания
5 мл 5%-ного раствора пептона минерализуют с подогревом в колбе Кьельдаля с 10 мл серной кислоты (концентрированной) • до получения бесцветного раствора. В качестве катализатора используют 0,5 мл пергидроля. После минерализации образец переносят количественно в мерную колбу на 100 мл и доводят до метки дистиллированной водой. Во внутреннюю часть чашки Конвея наливают точно 2 мл 0,025 н. раствора серной кислоты. Чтобы используемая жидкость не растекалась, чашку устанавливают наклонно. Затем закрывают крышкой, смазанной вазелином, оставляя небольшую щель, через которую пипеткой вносят в наружную часть чашки 1 мл испытуемого раствора после минерализации. Передвигают чашку так, чтобы осталась щель шириной 5—6 мм с противоположной стороны и через нее быстро вливают 4 мл раствора 40 %-ной щелочи. Чашку плотно закрывают крышкой, осторожно перемешивают круговыми движениями содержимое и оставляют на 15—18 ч. Несвязанный с аммиаком избыток кислоты оттитровывают 0,025 н. раствором едкого натра по индикатору Таширо. Параллельно ставят контрольную пробу, для чего во внешнюю часть чашки Конвея помещают вместо испытуемого раствора дистиллированную воду.
Обработка результатов
Содержание общего азота (Х5) в процентах вычисляют по формуле
V 0,00035(V— 100- 100- 1<Ю
%5 5-5-1
где V — количество 0,025 н. раствора едкого натра, израсходованное на титрование контрольной пробы, мл;
— количество 0,025 н. раствора едкого натра, израсходованное на титрование испытуемой пробы, мл;
К— поправочный коэффициент к титру 0,025 н. раствора едкого натра;
0,00035—количество азота, эквивалентное 1 мл 0,025 н. раствора едкого натра, г;
5—масса пептона, взятая для получения 5%-ного раствора, г;
5 — количество препарата, взятое для минерализации, мл;
—количество испытуемого раствора, мл.
За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Допускаемые расхождения между результатами параллельных определений не должны превышать 0,2%.
Определение содержания азота аминогрупп аминокислот и низших пептидов
Аппаратура и реактивы
Для проведения испытания применяют:
рН-метр;
стаканы лабораторные по ГОСТ 10394—72;
пипетки вместимостью 1, 2 и 20 мл;
бюретки вместимостью 5 и 10 мл с ценой деления 0,05 мл;
формалин технический по ГОСТ 1625—75;
натрия гидрат окиси по ГОСТ 4328—77, 0,1 н. раствор;
кислоту серную по ГОСТ 4204—77, 0,1 н. раствор;
фенолфталеин по ГОСТ 5850—72, 1%-ный спиртовый раствор; воду дистиллированную по ГОСТ 6709—72.
Подготовка к испытанию
Непосредственно перед работой готовят формольную смесь. Для этого к 50 мл формалина добавляют 1 мл 1 %-ного раствора фенолфталеина и 0,1 н. раствором гидрата окиси натрия доводят окраску смеси до слабо-розовой.
Проведение испытания
К 2 мл прозрачного 5%-ного раствора пептона, приготовленного в соответствии с п. 3.4.2, приливают 18 мл дистиллированной воды и доводят pH смеси до 7,0 потенциометрически 0,1 н. раствором гидрата окиси натрия или серной кислоты. Затем приливают 2 мл формольной смеси и при постоянном перемешивании потенциометрически титруют 0,1 н. раствором гидрата окиси нат- трия до pH 9,2.
Одновременно ставят контроль на реактивы, для чего вместо 2 мл 5%-ного пептона берут 2 мл дистиллированной воды.
Обработка результатов
Содержание азота аминогрупп аминокислот и низших пептидов в пептоне (Аб) в процентах вычисляют по формуле
у _ (V-Vi)K-одам-log
где V—количество 0,1 н. раствора гидрата окиси натрия, израсходованное на титрование испытуемой пробы, мл;
V1 — количество 0,1 н. раствора гидрата окиси натрия, израсходованное на титрование контрольной пробы, мл;
К — поправочный коэффициент к титру 0,1 н. раствора гидрата окиси натрия;
0,0014 — количество азота, эквивалентное 1 мл 0,1 н. раствора гидрата окиси натрия, г;
0,1—масса пептона, содержащаяся в 2 мл 5%-ного пептона, г.
За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Допускаемые расхождения между результатами параллельных определений не должны превышать 0,2%.
Определение содержания свободного белка
Аппаратура и реактивы
Для проведения испытания применяют:
фотоэлектроколориметр;
пипетки вместимостью 5 и 10 мл;
пробирки стеклянные по ГОСТ 10515—75;
кислоту трихлоруксусную 20%-ный раствор.
Проведение испытания
К 5 мл фильтрата 5%-ного раствора пептона, приготовленного в соответствии с п. 3.4.2, добавляют 5 мл 20 %-ного раствора трихлоруксусной кислоты и хорошо перемешивают. Через 5 мин определяют оптическую плотность смеси на фотоэлектроколориметре при длине волны 630 нм (красный светофильтр) в кюветах с рабочей длиной 10 мм против того же раствора пептона, разведенного 1 : 1 дистиллированной водой.
Обработка результатов
За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Допускаемые расхождения между результатами параллельных определений не должны превышать 0,05%.
О п р е д е л е н и е содержания хлоридов
Аппаратура и реактивы
Для проведения испытания применяют:
весы технические с погрешностью взвешивания не более 0,01 г; элемент нагрева (горелку, плитку);
пипетки вместимостью 1, 2, 10, 20 и 25 мл;
бюретки вместимостью 25 мл с ценой деления 0,05 мл;
стаканы лабораторные по ГОСТ 10394—72;
воду дистиллированную по ГОСТ 6709—72;
серебро азотнокислое по ГОСТ 1277—75, 0,1 н. раствор;
квасцы железоаммониевые по ГОСТ 4205—77, насыщенный раствор;
калий роданистый по ГОСТ 4239—77 или аммоний роданистый по СТ СЭВ 222—75, 0,1 н. раствор;
кислоту азотную по ГОСТ 4461—77, концентрированную.
Проведение испытания
К 20 мл 1 %-ного раствора пептона, приготовленного в соответствии с п. 3.4.2, добавляют 30 мл дистиллированной воды, 1 мл концентрированной азотной кислоты и 10 мл 0,1 н. раствора азотнокислого серебра. Раствор нагревают до начала кипения и быстро охлаждают путем погружения стакана с раствором в сосуд с водой комнатной температуры. После охлаждения смеси добавляют 2 мл насыщенного раствора железоаммониевых квасцов (индикатор) й титруют 0,1 н. раствором роданистого калия (или роданистого аммония) до появления кирпично-красного окрашивания.
Обработка результатов
Содержание хлоридов (ЛГ7) в процентах вычисляют по формуле v(VK-ViKi) -0,003545- 100
7 0„2
где V—количество 0,1 н. раствора азотнокислого серебра, взятое в стакан с пробой, мл;
К— поправочный коэффициент к титру 0,1 н. раствора азотнокислого серебра;
Vi — количество 0,1 н. раствора роданистого калия или роданистого аммония, израсходованное на титрование пробы, мл;
Ki — поправочный коэффициент к титру 0,1 н. раствора роданистого калия или роданистого аммония;
0,003545— количество хлоридов (хлор-иона), эквивалентное 1 мл 0,1 н. раствора азотнокислого серебра, г;
0,2— масса пептона, содержащаяся в 20 мл 1 %-ного раствора, г
.За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Допускаемые расхождения между результатами параллельных определений не должны превышать 0,1%.
Определение солей тяжелых металлов
Аппаратура и реактивы
Для проведения испытания применяют:
весы технические с погрешностью взвешивания не более 0,01 г; элемент нагрева (плитку, горелку);
печь муфельную;
тигли фарфоровые по ГОСТ 9147—73;
цилиндры мерные вместимостью 10 мл по ГОСТ 1770—74;
кислоту серную по ГОСТ 4204—77, концентрированную;
аммоний уксуснокислый по ГОСТ 3117—78, насыщенный раствор;
воду дистиллированную по ГОСТ 6709—72;
кислоту уксусную по ГОСТ 61—75, 10%-ный раствор;
натрий сернистый по ГОСТ 2053—77, насыщенный раствор;
натрия гидрат окиси по ГОСТ 4328—77, 10%-ный раствор; лакмус или универсальный индикатор.
Проведение испытания
Навеску пептона массой 1 г, взвешенную с погрешностью не более 0,02 г, помещают в тигель, смачивают 2 мл концентрированной серной кислоты и осторожно озоляют сначала на плитке или горелке, а затем в муфельной печи при 500—600°С до получения однородной золы светло-серого цвета.