---

ГОСТ 10444.14-91 Консервы. Метод определения содержания плесеней по Говарду Стр. 1 из 10.

УДК 664.841/.851.001.4:006.354

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ СОЮЗА ССР

Консервы

М

ГОСТ
10444,14—91

ЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ
ПЛЕСЕНЕЙ ПО ГОВАРДУ

Canned foods,
Method of Howard mould count

ОКСТУ 9109

Дата введения 01.01,93

Настоящий стандарт распространяется на томатные продукты, плодовые пюре и соки с мякотью, в которых отсутствуют видимые признаки плесневения, и устанавливает метод подсчета количества гифов плесеней по Говарду.

Требования настоящего стандарта являются обязательными.

1. СУЩНОСТЬ МЕТОДА

Метод основан на микроскопировании продуктов в определен­ных условиях и заключается в определении числа Говарда: про­цента полей зрения с плесенями, устанавливаемого в препаратах продуктов при непосредственном микроскопировании.

2. ОТБОР И ПОДГОТОВКА ПРОБ

Метод отбора проб — по ГОСТ 26668, подготовка проб — по ГОСТ 26669.

3. АППАРАТУРА, МАТЕРИАЛЫ, РЕАКТИВЫ И РАСТВОРЫ

Весы лабораторные общего назначения с наибольшим преде­лом взвешивания 1 кг и пределом допускаемой погрешности ±10,00 мг по ГОСТ 24104.

Рефрактометр, шкала которого градуирована в единицах по­казателя преломления, с ценой деления не более 0,001 и пределом основной допускаемой погрешности ±0,0002.

П

Издание официальное

ерепечатка воспрещена

С. 2 ГОСТ 10444.14—91

Баня водяная.

Центрифуга лабораторная типа ЦЛН-2 или центрифуга друго­го аналогичного типа, осуществляющая центрифугирование при факторе разделения около 5500, с центрифужными пробирками из полимерных материалов вместимостью 10 см³ по ГОСТ 25336.

Термометр ртутный стеклянный с пределами измерений темпе­ратуры 0”-100°С, погрешностью измерения не более ±1,0°С по ГОСТ 28498.

Сито с сеткой диаметром отверстий 0,4 мм по ГОСТ 6613.

Микроскоп биологический с оптической системой, обеспечива­ющей просмотр препарата в плоском поле зрения диаметром 1,382 мм, с передвижным столиком, снабженным нониусом и пре- наратоводителем.

Камера Говарда, имеющая плоскую поверхность, опущенную на 0,1 мм, окруженную канавками и имеющую выгравированный круг диаметром 1,382 мм, либо две параллельные линии на таком же расстоянии друг от друга.

Допускается применять камеры Горяева, Тома, Бюргера и дру­гие, имеющие плоские поверхности, ограниченные канавками, опу­щенные на 0,1 мм относительно общей плоскости, на которые на­несены сетки из квадратов со стороной 0,05 мм.

Стаканы вместимостью 250 и 400 см³ по ГОСТ 25336.

Пипетки 1—2—10 по ГОСТ 20292.

Палочки из химико-лабораторного стекла по ГОСТ 21400.

Стекла покровные для камеры по ГОСТ 6672.

Мыло хозяйственное.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Спирт этиловый по ГОСТ 5962.

Эфир или ацетон по ГОСТ 2603.

Сода кальцинированная техническая по ГОСТ 5100.

Метиленовый голубой, раствор с массовой концентрацией 10 г/дм³.

Допускается применение аппаратуры с техническими характе­ристиками не ниже указанных.

4. ПОДГОТОВКА К АНАЛИЗУ

   1. Продукты перед анализом не термостатируют.

Каждую единицу продукции анализируют отдельно.

Томатные продукты, содержащие целые или дробленые тома­ты, перед анализом протирают через сито.

В каждой пробе анализируемой продукции определяют массо­вую долю растворимых сухих веществ (/Ц₄) по ГОСТ 28562.ГОСТ 10444.14—91 С. 3

В стакан отбирают 50,0 г продукта с известной массовой до­лей растворимых сухих веществ.

Концентрированные томатные продукты разбавляют дистил­лированной водой и раствором метиленового голубого или только дистиллированной водой до массовой доли растворимых сухих ве­ществ (8,4±0,4) % так, чтобы показатель рефракции при темпе­ратуре (20± 1) °С составлял 1,3446—1,3460.

Необходимую суммарную массу дистиллированной воды и раст­вора метиленового голубого для получения нормативного значения массовой доли растворимых сухих веществ (m_Q) в граммах вы­числяют по формуле

т₀=т_х+т₂, zn₃(0,107 - /п₄ — 1), т₂=/и₃- 0,012

где ті — масса добавляемой дистиллированной воды, г;

т₂ — масса добавляемого раствора метиленового голубого, г; — масса навески продукта, г;

т_А— массовая доля растворимых сухих веществ, %,

При разбавлении концентрированных томатных продуктов только дистиллированной водой массу дистиллированной воды (ms) в граммах вычисляют по формуле

(0,119-m₄ — 1).

При вычислении массы воды для разбавления томатных про­дуктов с солью предварительно определяют массовую долю хлори­дов по ГОСТ 26186 и вычитают полученное значение из массовой доли растворимых сухих веществ.

Томатные продукты с массовой долей растворимых сухих ве­ществ (8,4±0,4) % и менее используют для анализа без разведе­ния.

Массовую долю растворимых сухих веществ в разбавленных продуктах контролируют по рефрактометру непосредственно перед заполнением камеры.

В каждой пробе анализируемой продукции определяют массу мякоти по ГОСТ 8756.10.

Осажденную в центрифужной пробирке мякоть разбавляют дистиллированной водой и раствором метиленового голубого до массовой доли 40%.

Необходимую суммарную массу дистиллированной воды и рас­твора метиленового голубого (т₀) в граммах для получения нор­мативного значения массовой доли мякоти вычисляют по формуле

С. 4 ГОСТ 10444,14—~91

/zz _(>= 1,5/я_0> где — масса мякоти в навеске, г.

Массу добавляемого раствора метиленового голубого (ги₂) в граммах вычисляют по формуле

Массу добавляемой дистиллированной воды (т_{) в граммах вычисляют по формуле

пг^ т₀~т₂.

Разбавленную мякоть используют для приготовления препара­та.

Непосредственно перед приготовлением препарата камеру пос­ледовательно промывают раствором детергента и дистиллирован­ной водой, спиртом, эфиром или ацетоном. Камера считается под­готовленной к анализу в том случае, если покровное стекло плот­но притирается к ней с образованием ньютоновских (радужных) колец на внешней по отношению к канавкам поверхности камеры.

Бактериологической петлей, шпателем или скальпелем отби­рают часть продукта и переносят в центр в углубление камеры между канавками. Углубление камеры заполняют анализируемым продуктом на столько, чтобы продукт полностью покрыл поверх­ность камеры между канавками, но не попал в канавки и по дру­гую сторону от них. Затем на камеру помещают ребром покров­ное стекло так, чтобы оно касалось продукта, и, плавно наклоняя, опускают его на углубление камеры, заполненное продуктом. Края покровного стекла притирают к камере до появления ньюто­новских колец.

Оптическую систему микроскопа настраивают по калибровоч­ным линиям (кругу) на камере Говарда до получения диаметра поля зрения 1,382 мм, что соответствует площади поля зрения 1,5 мм².

В случае применения камер Горяева, Тома, Бюргера и др. ми­кроскоп настраивают таким образом, чтобы в его поле зрения впи­сался квадрат со стороной, равной 0,975—0,977 мм, что соответст­вует 19,5 квадратам со стороной, равной 0,05 мм. Для этого ис­пользуют одно из сочетаний объектива 7^х, 8^х, 9^х, 10^х с окуляром 7^х, 10^х, 15^х с соответствующей механической длиной выдвижного тубуса, выставленной по шкале тубуса. Если микроскоп имеет не­подвижный тубус, то длину его, при необходимости, регулируют помещенной перед окуляром картонной или металлической насад- »л дГОСТ 10444.14—91 С. 5

кой, высота которой обеспечивает требуемый диаметр поля зрения. При работе с окуляром 10^х и объективом 9^х передвижной тубус микроскопа выдвигают до деления 165. При просмотре препарата свет должен быть сфокусирован на конденсор.

5. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА

   1. Из каждой пробы для анализа готовят четыре препарата.

   2. Препарат помещают на препаративный столик микроскопа и просматривают, передвигая его так, чтобы одно и то же место препарата не попало повторно в поле зрения микроскопа. Подсчет гиф плесеней начинают с одного из углов препарата, передвигая поле зрения на (1,5±0,1) мм с помощью нониуса, Просмотрев по­ля в одном ряду, перемещают препарат в следующий ряд. Рассто­яние между центрами полей зрения в просмотренном ряду и но­вом должно быть (1,5±0,1) мм.

Для достижения максимальной четкости отдельных структур в препарате яркость света изменяют ирисовой диафрагмой. Каждое поле зрения тщательно исследуют, просматривая препарат по всей глубине, для чего фокус микроскопа непрерывно передвигают вверх и вниз с помощью микровинта. При необходимости исследу­емое место просматривают при большем увеличении (порядка 200^х) и затем возвращаются к установленному увеличению, обес­печивающему диаметр поля зрения 1,382 мм.

Применение метиленового голубого позволяет установить на синем фоне препарата сине-зеленые нити гиф.

Поле считается отрицательным, если оно не содержит гиф пле­сеней или если общая длина одной, двух или трех гиф менее Уб диаметра поля зрения.

6. ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ

   1. Число Говарда определяют в каждой пробе продукции.

Результат определения выражают как процент полей зрения, содержащих гифы плесеней.

С. 6 ГОСТ 10444.14—91

Д'=— —- • 100,

где п — число положительных полей зрения;

Пі — число просмотренных полей зрения.

Число Говарда (X) в процентах в разбавленной мякоти вычис­ляют по формуле, приведенной в п. 6.2.

Число Говарда (G) в процентах в пробе вычисляют по форму­ле

р m_e-100 у

где ш₆ — масса мякоти в навеске, г;

— масса навески пробы, г;

X — число Говарда в разбавленной мякоти, %.

Если при просмотре первых 10 полей зрения все поля отри­цательные, то просмотр прекращают и дают заключение, что чис­ло Говарда в пробе менее 10 %.ГОСТ 10444.14—91 С. 7

Справочное

ХАРАКТЕРИСТИКА ГИФ ПЛЕСЕНЕЙ

Под микроскопом гифы плесеней имеют ряд особенностей, отличающих их от остатков ткани плодов.

Гифы плесеней сегментированы или гранулированы; нити плодов прозрач­ные, стекловидные или волокнистые. Гифы плесеней имеют характерную раз­ветвленность, образуя, как правило, острый угол; сосудисто-волокнистые ткани плодов видны под микроскопом в виде свернутых спирально пружин. Если пос­ледние разрушены, то они отличаются от гиф плесеней по характерному за­витку. Волоски, окружающие оболочку семени томатов или покрывающие повер­хность плодов, тонкостенные, длинные, суживающиеся на конус, под микроско­пом имеют вид сосульки. Гифы плесеней имеют трубчатое, цилиндрическое стро­ение и под микроскопом выглядят плоскими, с параллельными стенками.

Характерные особенности гиф плесеней и тканевых остатков плодов, позво­ляющие отличить одно от другого, приведены в таблице и на чертеже.