Не допускается смачивать края пробирки и ватную пробку.ВЫРАЩИВАНИЕ, ПЕРЕСЕВ И ХРАНЕНИЕ КУЛЬТУР ПЛЕСНЕВЫХ ГРИБОК
Получение чистых культур плесневых грибов
Чистые культуры плесневых грибов получают один раз в 3 года в институте биохимии и физиологии микроорганизмов АН СССР. При выборе штаммов руководствуются «Каталогом культур микроорганизмов, поддерживаемых в учреждениях СССР».
Выращивание и пересев культур грибов
Культуры грибов, полученные в запаянных ампулах, восстанавливают согласно прилагаемой инструкции и определяют сохранение их морфолого-культуральные признаки.
Восстановленные культуры грибов пересевают в пробирки со скошенной питательной средой с агаром. Количество партий должно быть не менее двух. Одна'партия является музейной и используется для длительного хранения чистых культур грибов (далее — музейная). Другая партия является неходкой для получения рабочих партий культур грибов (далее — исходная).
Количество исходных и рабочих партий зависит от объема испытании.
.Исходная партия культур грибов обновляется один раз в 3 мес.
Рабочие партии культур грибов выращивают за 14 сут до начала испытаний и используют для получения споровой суспензии грибов.
Культуры грибов пересевают в пробирки на скошенную твердую питательную среду в пылезащитном боксе, предварительно продезинфицированном (п. 5.3.5).
.На пробирках обозначают виды грибов и дату пересева, которую зано>- сят в журнал регистрации пересева культур грибов.
Культуры грибов пересевают в пробирки при помощи бактериологической петли, прокаленной над пламенем спиртовой горелки. Петлю изготовляют- из проволоки (платиновой, хромовой, никелевой, молибденовой) диаметром* (0,6+°'1) мм, длиной (120+20) мм. Проволоку укрепляют в стеклянном или металлическом держателе.
Пробирки, засеянные спорами грибов, помещают в термостат при температуре (29±2)°С на 10—14 сут до появления зрелого спороношения;
Культуры грибов проверяют на соответствие пересеянному виду и чистоту.
Хранение культур грибов методом периодических пересевов
Музейную партию культур грибов хранят в пробирках на скошенной» питательной среде с агаром и пересевают один раз в 6 мес.
Не допускается более семи последовательных пересевов этой партии в течение 3 лет.
Пробирки с чистыми культурами грибов хранят в холодильнике при» температуре (7±3)°С.
Хранение культур грибов в стерильной почве
Для хранения музейной партии грибов используют стерильную садовую плодородную почву.
Почву просеивают через сито, рассыпают по пробиркам по 5 г п стерилизуют в автоклаве при давлении 100' кПа по 30 мин в течение 3 сут. После- автоклавирования пробирки с почвой подсушивают при комнатной температуре- в течение 2—3 сут.
Культуры грибов выращивают на скошенной поверхности среды Чапека- Докса с агаром и с помощью бактериологичёской петли переносят в пробирки со стерильной почвой.
Ватные пробки обрезают вровень с краями пробирки и заливают парафином.
Культуры грибов в стерильной почве хранят в холодильнике при температуре (7±3)°С или при комнатной температуре в- течение 3 лет без пересева..
Для восстановления культур грибов комочки почвы стерильно перенос- сят в пробирки со средой Чапека-Докса с агаром и выращивают по п. 2.10.
Рекомендуется иметь несколько музейных партий культур грибов в стерильной почве и использовать их для получения исходных партий.
Питательные среды для выращивания и хранения культур грибов
Для выращивания всех культур грибов используют среду Чапека-Докса с агаром или сусло-агар с содержанием сахара 6°Б.
Для выращивания и хранения Aureobasidium pullulans используют среду Сабуро с агаром.
Для выращивания и хранения Aspergillus penicilloides используют сусло- агар с 60% сахарозы.
Для длительного хранения остальных культур, грибов используют обедненные среды: картофельно-морковную, картофельно-глюкозную и сусло-агар с содержанием сахара 3,5°Б.ПРИЛОЖЕНИЕ 5
Рекомендуемое
ПРИГОТОВЛЕНИЕ СУСПЕНЗИИ И КОНТРОЛЬ ЖИЗНЕСПОСОБНОСТИ
СПОР ГРИБОВ
Приготовление суспензии спор грибов
Для испытаний используют суспензию с концентрацией спор каждого вида гриба 1—2 млн/см3.
Для приготовления суспензии спор используют рабочую партию культур грибов возрастом от 14 до 28 сут, считая со дня пересева. Рабочую партию каждого вида гриба используют не более трех раз.
В зависимости от метода испытаний суспензию готовят в стерильной дистиллированной воде или среде Чапека-Докса.
Суспензию спор готовят отдельно для каждого вида гриба. Для этого в пробирку или колбу, содержащую (25±5) см3 стерильной дистиллированной воды или среды Чапека-Докса, переносят споры гриба из пробирки с чистой культурой. -
Споры переносят при помощи бактериологической петли, прокаленной над пламенем спиртовой горелки. При взятии спор из пробирки не следует касаться петлей питательной среды.
Суспензию спор каждого вида гриба тщательно перемешивают встряхиванием до разделения всех комочков спор и отфильтровывают через четыре слоя стерильной марли от кусочков мицелия, агара и комочков спор.
Концентрацию спор каждого вида гриба подсчитывают при помощи счетной камеры Горяеза или фотоэлектрического концентрационного колориметра (КФК-2).
Концентрацию спор грибов с помощью камеры Горяева определяют по •соответствующей инструкции.
Определение концентрации спор грибов с помощью прибора КФК-2 — •по МУ 2.853.013.
Для определения концентрации спор грибов 1—2 млн/см3 используют свето- •фильтр Х=400 нм и кювет /=(50±0,5) мм.
Оптическая плотность растворов, соответствующих концентрации 1—2 млн/см’ ■каждого вида гриба, приведена в табл. 2.
Таблица 2
|
Вид грибов |
Оптическая плотность £> |
|
Aspergillus niger |
0,220—0,440 |
|
Aspergillus terreus |
0,190—0,380 |
|
Paecilomyces variotii |
0,280—0,550 |
|
Penicillium ochro-chloron |
0,215—0,425 |
|
Penicillium funiculosum |
0,100—0,200 |
|
Scopulariopsis brevicaulis |
0,060—1,140 |
|
Trichoderma viride |
0,235—0,470 |
Примечание. Концентрацию спор грибов Aureobasidium pullulans подсчитывают только при помощи камеры Горяева ввиду особенностей спороноше- мия данного вида.СуспейЗик) Crtop каждого вида гриба смешивают в равных объемах и используют для заражения изделий.
Срок хранения суспензии спор грибов, приготовленной на дистиллированной воде,— не бэлее 6 ч с момента приготовления.
Срок хранения суспензии, приготовленной на среде Чапека-Докса,— не более 2 ч.
Контроль жизнеспособности спор грибов
Готовят чашки Петри с агаризованой средой Чапека-Докса.
С этой целью в стерильном боксе в йашки Петри наливают 20—30 см3 среды Чапека-Докса с агаром и дают ей застыть.
Стерильной пипеткой берут суспензию одного вида ;приба, подготовленную по п. 1, и наносят в виде капли на поверхность средьь Для нанесения суспензии каждого вида гриба используют отдельную пипетку.
На питательную среду одной чашки следует наносить не более трх капель суспензии одного или разных видов грибов на расстоянии (40±5) мм друг от друга.
На внешней стороне чашки Петри отмечают место прививки каждого вида гриба.ПРИЛОЖЕНИЕ 6
Справочное
ОЦЕНКА ГРИБОСТОЙКОСТИ ИЗДЕЛИЙ ПРИ ОПРЕДЕЛЕНИИ
ИХ РАБОТОСПОСОБНОСТИ
Соответствие параметров изделий тре-
бованиям НТД при испытаниях методами
3 и (или) 4 в выборке
Результат испытания
испытательной контрольной
|
Соответствуют |
Положительный. Плесневые грибы не влияют на работоспособность изделий |
|
Не соответствуют Соответствуют |
Отрицательный. Плесневые грибы влияют на работоспособность изделий |
|
Не соответствуют |
Положительный. Плесневые грибы не влияют на работоспособность изделий. Ухудшение работоспособности изделий за счет влияния высокой относительней влажности воздуха |
ИНФОРМАЦИОННЫЕ ДАННЫЕ
ИСПОЛНИТЕЛИ
Н. К. Слепухина, А. А. Байгожин (руководители темы), С. А. Законникова, Л. В. Березниковская
УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 26.06.89 № 2019
Стандарт соответствует стандарту МЭК Публикация 68—2—10 в части общих правил проведения испытаний
Срок проверки 1995 г.
ВЗАМЕН ГОСТ 9.048—75
ССЫЛОЧНЫЕ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ
|
Обозначение НТД, на который дана ссылка |
Номер пункта, подпункта |
|
ГОСТ 3—75 |
1.4.1 |
|
ГОСТ 12.4.028—76 |
1.4.1 |
|
ГОСТ 177—88 |
1.4.1 |
|
ГОСТ 307—81 |
1.4.1 |
|
ГОСТ 857—88 |
1.4.1 |
|
ГОСТ 975—88 |
1.4.1 |
|
ГОСТ 1172—75 |
1.4.1 |
|
ГОСТ 1770—74 |
1.4.1 |
|
ГОСТ 2493—75 |
1.4.1 |
|
ГОСТ 4148—78 |
1.4.1 |
|
ГОСТ 4168—79 |
1.4.1 |
|
ГОСТ 4198—75 |
1.4.1 |
|
ГОСТ 4201—79 |
1.4.1 |
|
ГОСТ 4233—77 |
1.4.1 |
|
ГОСТ 4234—77 |
1.4.1 |
|
ГОСТ 4328—77 |
1.4.1 |
|
ГОСТ 4523—77 |
1.4.1 |
|
ГОСТ 5556—81 |
1.4.1 |
|
ГОСТ 5833—75 |
1.4.1 |
|
ГОСТ 5962—67 |
1.4.1 |
|
ГОСТ 6672—75 |
1.4.1 |
|
ГОСТ 6709—72 |
1.4.1 |
|
ГОСТ 8284—78 |
1.4.1 |
|
ГОСТ 9095—83 |
1.4.1 |
|
ГОСТ 9147—80 |
1.4.1 |
|
ГОСТ 9284—75 |
1.4.1 |
|
ГОСТ 9412—77 |
1.4.1 |
|
ГОСТ 10477—75 |
1.4.1 |
|
ГОСТ 11680—76 |
1.4.1 |
|
ГОСТ 12026—70 |
1.44 |
Продолжение
|
Обозначение НТД, на который дана ссылка |
Номер пункта, подпункта |
|
ГОСТ 15150—69 |
Вводная часть |
|
ГОСТ 16317—87 |
1.4.1 |
|
ГОСТ 17206—84 |
1.4.1 |
|
ГОСТ 18300—87 с |
1.4.1 |
|
ГОСТ 18481—81 |
1.4.1 |
|
ГОСТ 19569—80 |
1.4.1 |
|
ГОСТ 20292—74 |
1.4.1 |
|
ГОСТ 20401—75 |
1.4.1 |
|
ГОСТ 23134—78 |
1.4.1 |
|
ГОСТ 23676—79 |
1.4.1 |
|
ГОСТ 23932—79 |
1.4.1 |
|
ГОСТ 24363—80 |
1.4.1 |
|
Вводная часть |
|
|
ГОСТ 24760—81 |
1.4.1 |
|
ГОСТ 25336—82 |
1.4.1 |
|
ГОСТ 25644—83 |
1.4.1 |
|
ТУ 3—3.1766—82 |
1.4.1 |
|
ТУ 6—09—1181—76 |
1.4.1 |
|
ТУ 17-РСФСР-63—9022—83 |
1.4.1 |
|
ТУ 64—1—721—79 |
1.4.1 |
|
СН—245—71 |
5.4.7 |
Редактор Р. С. Федорова
Технический редактор Э. В. Митяй
Корректор Г. И. Чуйко
Сдано в наб. 21.08.89 Подп. в печ. 27.09.89 1,5 усл. п. л. 1,5 усл. кр.-отт. 1,375 уч.-изд. л.
Тир. ,9000 Цена 5 к.
Ордена «Знак ІІо’чет!а» Издательство стандартов, 123557, Москва, ГСП,
Новопресненский пер., д. 3.
Вильнюсская типография Издательства стандартов, ул. Даряус и Гирено, 39. Зак, 1776.
