Страница 2: ГОСТ 30726-2001. Продукты пищевые. Методы выявления и определения количества бактерий вида Escherichia coli (67043)

После инкубирования посевов к 1 см отобранной культуральной жидкости прибавляют 0,6 см раствора -нафтола, приготовленного по 6.1.3, и 0,2 см раствора гидроокиси калия, приготовленного по 6.1.5. После прибавления каждого реактива пробирку встряхивают. Проявление розового окрашивания через 15-60 мин указывает на положительную реакцию.

E. coli не образует ацетоин.

7.4.3 Определение утилизации цитрата

Культуру высевают в пробирки со средой Козера, приготовленной по 6.2.9, или на поверхность среды Симмонса, приготовленной по 6.2.10. Посевы инкубируют при температуре (36±1) °С в течение 24-48 ч. Изменение оливково-зеленого цвета сред на васильковый, синий указывает на положительную реакцию.

E. coli утилизирует цитрат.

7.4.4 Определение интенсивности ферментации углеводов с образованием кислоты (реакция с метил-рот)

Культуру высевают в пробирки с глюкозо-фосфатным бульоном или средой Кларка или используют посевы после отбора 1 см культуральной жидкости по 7.4.2. Посевы инкубируют при температуре (36±1) °С в течение 48 ч. К 5 см культуральной жидкости прибавляют 5-10 капель реактива Кларка, приготовленного по 6.1.1. Появление через 1 мин красного цвета культуральной жидкости указывает на ферментацию углеводов до рН ниже 5,0.

E. coli интенсивно ферментирует углеводы (реакция с метил-рот положительная).

7.4.5 Определение ферментации сорбита, глюкозы и лактозы

Культуру высевают в среды Гисса с сорбитом или глюкозой, или лактозой приготовленные по 6.2.11. Посевы инкубируют при температуре (36±1) °С в течение 24 ч, а на среде Гисса с лактозой при температуре (44±1) °С в течение 24 ч.

E. coli ферментирует глюкозу, лактозу и сорбит.

При ферментации глюкозы образуется газ. Ферментацию глюкозы можно учитывать в засеянных косяках трехсахарного агара или среды Клиглера по изменению цвета столбика среды и образованию в нем газа.

Ферментацию лактозы учитывают по изменению цвета скошенной поверхности среды Клиглера.

Ферментацию сорбита учитывают по изменению цвета среды.

У культур типичных для Е. соli по всем изученным признакам, но не ферментирующим сорбит, изучают возможность ферментации целлобиозы на среде, приготовленной по 6.2.11, при температуре (36±1) °С в течение 24 ч. Е. соli не ферментирует целлобиозу, цвет среды не меняется.

7.4.6 Определение образования сероводорода

Образование сероводорода учитывают в посевах на среду Клиглера или трехсахарный агар после инкубирования посевов при температуре (36±1) °С в течение 24 ч. Почернение в столбике среды указывает на образование сероводорода.

Е. соli не образует сероводород.

7.4.7 Для биохимической идентификации выявленных бактерий допускается использование тест-систем промышленного производства.

8 Обработка результатов анализа

8.1 Результаты оценивают по каждой пробе отдельно.

8.2 К бактериям Е. соli относят оксидазоотрицательные не образующие спор грамоотрицательные палочки, обладающие способностью ферментации лактозы при температуре (44±1) °С, ферментирующие глюкозу и сорбит, дающие положительную реакцию с метил-рот, образующие индол, необразующие ацетоин и не утилизирующие цитрат. Бактерии не ферментирующие сорбит и целлобиозу, но по другим биохимическим признакам давшие типичные для Е. соli реакции, относят к сорбитотрицательным штаммам Е. соli. Основные дифференцирующие признаки видов рода Escherichia приведены в приложении А.

8.3 Посевы навески продукта в жидкие среды считают положительными, если при последующем пересеве и подтверждении характерных колоний хотя бы в одной колонии будут обнаружены Е. соli.

8.4 НВЧ Е. соli в 1 г (см ) продукта определяют по количеству положительных колб (пробирок) по ГОСТ 26670.

8.5 Если при подтверждении характерных колоний (при определении количества Е. соli посевом "в" или "на" агаризованные среды) в 66% случаев, то есть не менее чем в 2 из 3 колоний, подтвержден рост Е. соli, то считают, что все характерные колонии, выросшие на чашке Петри (см. 7.3), принадлежат к Е. соli. В остальных случаях количество Е. соli определяют, исходя из процентного отношения подтвержденных колоний к общему количеству характерных колоний, взятых для подтверждения.

Пересчет количества Е. соli, определенного посевом в (или "на") агаризованные среды, на 1 г (см ) продукта проводят по ГОСТ 26670.

8.6 Результаты определения количества Е. соli и выявления их в определенной навеске продукта записывают по ГОСТ 26670.

ПРИЛОЖЕНИЕ

(рекомендуемое)

Основные дифференцирующие признаки видов рода Escherichia

Текст документа сверен по:

официальное издание

Консервы. Методы микробиологического анализа:

Сб. ГОСТов. - М.: ИПК Издательство стандартов, 2002