5.6. Оценка результатов отбора проб
5.6.1. Общие положения
Оценка данных о биозагрязнениях должна давать достаточную информацию для проведения эффективных корректирующих действий. Дальнейшая информация об оценке данных о биозагрязнениях приведена в ИСО 14698-2.
Примечание: Контроль микробной загрязненности можно проводить, применяя косвенные индикаторы, например, такие, как количество аденозинтрифосфата (АТФ). Однако следует иметь в виду, что прямая связь между наличием таких индикаторов и биозагрязнением может отсутствовать. Поэтому большую роль играет подтверждение работоспособности документированной системы контроля биозагрязнений или аттестация (валидация) системы текущего контроля.
5.6.2. Подсчет
На количественное определение микроорганизмов, также как и в других методах, оказывают влияние приборы и методика подсчета. Поэтому подсчет жизнеспособных частиц, выделенных из проб, следует проводить только утвержденными (аттестованными) методами.
Примечания:
1. Информация о подсчете живых частиц (жизнеспособных микроорганизмов) приведена в ИСО 7218 и других источниках [8].
2. Настоящий стандарт не приводит прямого коэффициента пересчета или функциональной зависимости между количеством жизнеспособных и нежизнеспособных частиц. При необходимости контрольные уровни этих параметров могут устанавливаться раздельно.
5.6.3. Определение характеристик микроорганизмов
При проведении микробиологического контроля невозможно определить и подсчитать микроорганизмы всех видов, обнаруженные в чистых (контролируемых) зонах. Результаты оцениваются с учетом соответствующего уровня описания их свойств.
Примечание: Степень детализации свойств микроорганизмов зависит от критичности рассматриваемой зоны и от того, оправдано ли проведение дальнейших исследований по их описанию. Может оказаться достаточным использование общих характеристик, основанных на морфологии клеток, свойствах окрашивания или других характеристик. В случае необходимости при помощи лабораторных методов может быть приведена их характеристика, по крайней мере, до рода. Информацию, полученную при анализе свойств микроорганизмов, можно применять при оценке процедур очистки и дезинфекции, а также при определении источника загрязнения или проведении корректирующих действий. Идентификация изолятов, выделенных из критических зон, обычно имеет приоритет перед идентификацией микроорганизмов из некритических зон.
В зависимости от применяемого метода количественная оценка полученных результатов с использованием соответствующих единиц измерения в системе СИ (ИСО 31) приводится в виде числа жизнеспособных или колониеобразующих единиц (КОЕ). Порядок оценки полученных результатов приведен в ИСО 14698-2.
Для оценки тенденции изменения результатов следует проводить их анализ в течение достаточно длительного периода времени. На основе этого анализа и конкретных результатов исследования принимается решение о значимости необычных данных, приемлемости качества проводимых работ или пригодности продукции, изготовленной при этих условиях.
Протокол проведения контроля биозагрязнений должен включать в себя следующую информацию (или содержать соответствующие ссылки):
a) вид пробы;
b) применяемый(е) метод(ы) и, где необходимо, обозначение и наименование стандарта;
c) применяемое устройство для отбора проб;
d) точки отбора проб;
e) вид работы, выполняемой в зоне отбора проб (при отборе проб), с указанием состояния чистого помещения;
f) количество персонала в зоне отбора проб (при отборе проб);
g) дату и время отбора проб;
h) продолжительность отбора проб, при необходимости;
i) время проведения анализа проб;
j) условия и длительность инкубации;
к) отклонения от принятого метода контроля и любые факторы, которые могут повлиять на результаты;
l) результаты анализа отобранных проб после первоначальной и окончательной регистрации данных;
m) при выполнении количественной оценки - результаты, выражаемые в системе СИ;
n) описание выделенных микроорганизмов (изолятов), если проводилась их идентификация;
o) наименование организации, ответственной за подготовку и оформление протокола, и дату завершения испытаний;
p) фамилию, инициалы и подпись лица, ответственного за проведение контроля.
Для подтверждения соответствия выбранной документированной системы контроля биозагрязнений принятым методам и всем специальным требованиям результаты текущего контроля биозагрязнений следует периодически проверять (4.2, перечисление f).
Примечание: Эта проверка может потребовать проведения текущего контроля и аудита, других методов анализа и контроля, в т. ч. случайного отбора проб и их анализа. Для того чтобы удостовериться в правильности работы документированной системы контроля биозагрязнений, может потребоваться систематическое подтверждение соответствующего качества выполнения всех операций и оборудования.
Обучение персонала должно быть организовано по соответствующей программе (приложение G).
Документация должна включать в себя:
- описание документированной системы контроля - данные об оценке риска;
- план отбора проб;
- уровни предупреждения, действия и целевой уровень, при необходимости;
- методы проведения контроля и отбора проб;
- протокол проведения контроля;
- протокол подтверждения работоспособности документированной системы контроля биозагрязнений;
- протоколы обучения.
А.1 Введение
В настоящем приложении содержится руководство по определению биозагрязнений в воздухе. При этом проводится отбор представительных проб с целью обнаружения жизнеспособных частиц, которые являются предметом контроля.
Настоящий стандарт предусматривает организацию документированной системы контроля биозагрязнений в чистых помещениях.
Метод аттестации (валидации) устройства для отбора проб приведен в приложении В.
А.2. Принципы
Обнаружение и текущий контроль микробного загрязнения воздуха в зоне риска выполняются путем отбора жизнеспособных частиц с помощью соответствующих устройств по плану отбора проб, когда зона риска находится в чистом помещении в построенном или оснащенном состоянии (при необходимости), а также при текущей работе в эксплуатируемом состоянии.
А.3. Устройства для отбора проб
А.3.1. Общие положения
Существуют различные методы отбора и количественной оценки жизнеспособных частиц в воздухе [9]. Выбор метода и оборудования зависит от цели отбора проб. Эффективность различных устройств для отбора проб не одинакова. В связи с этим метод и оборудование для проведения контроля следует выбирать тщательно.
Устройства для отбора проб могут быть двух типов:
a) для пассивного отбора (например, на седиментационные чашки);
b) для активного отбора (например, импакторами, импинжерами или устройствами для отбора проб на основе фильтрации).
В комплект поставки устройства для отбора проб входят инструкция по эксплуатации и указания по ограничению его применения. Эффективность устройств для активного отбора проб рассматривается в приложении В.
А.3.2. Выбор устройства для отбора проб
Скорость и время отбора проб, а также тип устройства для отбора проб оказывают существенное влияние на жизнеспособность отбираемых микроорганизмов. Импинжеры не могут применяться для отбора жизнеспособных аэрозольных частиц из-за небольшого объема пробы, низкой скорости отбора пробы и возможности разрушения агломерата бактериальных клеток при отборе пробы.
В связи с тем, что имеется большое количество различных устройств для отбора проб, при выборе их для конкретной области применения следует учитывать, как минимум, следующие факторы:
a) тип и размеры жизнеспособных частиц;
b) чувствительность жизнеспособных частиц к отбору проб;
c) ожидаемую концентрацию жизнеспособных частиц;
d) возможность определения высокого или низкого уровня биозагрязнений;
e) применение соответствующей питательной среды (5.5.2), [10];
f) время и продолжительность отбора проб;
g) характеристики окружающей среды в зоне отбора проб;
h) нарушение однонаправленности потока воздуха устройством для отбора проб;
i) свойства пробы, такие как:
1) скорость отбора пробы (потока воздуха, поступающего в устройство) при низком уровне жизнеспособных частиц в воздухе;
2) скорость импакции (скорость потока воздуха при контакте с питательной средой);
3) точность и эффективность отбора проб;
4) удобство при транспортировании и эксплуатации (масса, размеры, легкость использования, вспомогательные принадлежности, необходимость вакуумного насоса, подачи воды, электричества и т.п.);
5) простоту очистки, дезинфекции или стерилизации;
6) возможность внесения дополнительных биозагрязнений при отборе проб.
Воздух, выходящий из устройства, не должен загрязнять окружающую среду, из которой проводится отбор проб, или повторно попадать в устройство.
А.3.3. Устройства для отбора проб воздуха пассивного типа (устройства седиментационного типа)
Такие устройства, как седиментационные чашки, не определяют общее число жизнеспособных частиц в воздухе. Они оценивают интенсивность осаждения жизнеспособности частиц на поверхность. Поэтому седиментационные чашки могут использоваться для качественной и количественной оценки загрязнений, попадающих на продукт из воздуха. Эту оценку проводят путем определения числа жизнеспособных частиц, осевших на пластину в единицу времени. Затем по известной площади чашки и времени экспозиции может быть вычислено возможное загрязнение продукта [11], [12].
А.3.4. Устройства для отбора проб активного типа
А.3.4.1. Общие положения
Использование таких устройств в зоне риска имеет важное значение для определения микробиологической чистоты воздуха. Существует несколько типов таких устройств, причем каждый из них имеет свои ограничения.
Для зон риска с нормальным (низким) уровнем биозагрязнений можно выделить два основных типа устройств, отличающихся принципом отбора проб воздуха: импакторы и устройства на основе фильтрации.
А.3.4.2. Импакторы и импинжеры
Существуют импакторы и импинжеры многих типов, способных выявлять жизнеспособные частицы.
Выбранное для использования устройство должно иметь следующие характеристики:
a) скорость импакции (скорость потока воздуха в зоне контакта с питательной средой) должна удовлетворять двум противоречивым условиям:
1) быть достаточно высокой для улавливания частице размерами более 1мкм;
2) быть достаточно низкой для сохранения жизнеспособности частиц и предупреждения их механического повреждения или разрушения агломератов бактерий или микромицетов;
b) объем пробы должен быть достаточно большим, чтобы определить очень низкий уровень биозагрязнения, и в то же время достаточно мал, чтобы не привести к физической или химической деградации питательной среды.
В зонах с высоким уровнем биозагрязнений метод импакции и объем пробы должны быть выбраны таким образом, чтобы после культивирования могли быть различимы отдельные колонии микроорганизмов, по которым можно было бы оценить результаты.
Устройство должно соответствовать следующим минимальным требованиям:
- обеспечивать достаточную скорость потока воздуха, чтобы пропустить 1м3 воздуха в течение приемлемого времени без существенного подсушивания питательной среды в пробе;
- обеспечивать соответствующую скорость потока воздуха (скорость импакции) в зоне контакта с питательной средой.
А.3.4.3 Устройства для отбора проб на основе фильтрации (фильтрационные пробоотборники)
Фильтрационные пробоотборники широко используются при отборе проб воздуха. Выбирая соответствующие характеристики насоса, материал и размер фильтра, можно получить пробу почти любого объема в течение заданного времени ее отбора.
При конструировании и использовании устройств для отбора проб на основе фильтрации нужно учитывать следующие факторы:
a) условия фильтрации не должны влиять на жизнеспособность отбираемых микроорганизмов (например, за счет обезвоживания);
b) статическое электричество, которое препятствует осаждению жизнеспособных частиц на поверхность фильтрующей мембраны, должно быть устранено;
c) должны соблюдаться те же ограничения или требования к скорости отбора пробы, что и для импакторов (А.3.4.2);
d) фильтродержатель должен быть соединен с источником вакуума и датчиком скорости потока воздуха таким образом, чтобы не загрязнять материал фильтра;
e) фильтры должны помещаться в фильтродержатель, сниматься с него после фильтрации необходимого количества воздуха и помещаться на твердую или жидкую питательную среду с соблюдением требований асептики.
А.4 Оформление результатов
Уровень биозагрязнения воздуха выражается числом жизнеспособных частиц в 1м3 воздуха.
В.1. Ведение
Это приложение содержит методику определения эффективности устройств для отбора проб воздуха, используемых при подсчете микроорганизмов, находящихся в воздухе. Такую оценку выполняют обычно изготовители устройств или сторонние организации, специализирующиеся на проведении контроля.
При рассмотрении эффективности устройства для отбора проб воздуха может оцениваться его физическая и биологическая эффективность.
Под физической эффективностью понимается способность устройства отбирать частицы различных размеров. Физическая эффективность остается неизменной независимо от того, является ли частица микроорганизмом, носителем микроорганизма или нежизнеспособной частицей.
