---

3.1.24. жизнеспособная единица (viable unit, VU): Одна или более жизнеспособных частиц, определяемых как отдельная единица.

Примечание: В случаях, когда количество жизнеспособных единиц определяется как число колоний на агаровой питательной среде, их называют, как правило, колониеобразующими единицами (КОЕ). Одна КОЕ может состоять из одной или более жизнеспособных единиц.

3.2. Состояния чистого помещения

4. Принципы контроля биозагрязнений

4.1. Для чистых помещений и связанных с ними контролируемых сред следует разработать, ввести и поддерживать документированную систему контроля биозагрязнений. Эта система предназначается для оценки и контроля факторов, которые могут влиять на микробиологическую чистоту процесса или продукции.

С этой целью могут использоваться методы оценки риска согласно ИСО 14971 и [1]. Обычно используется система анализа риска в критических контрольных точках согласно ИСО 15161 и [2]-[4]. Могут использоваться также методы анализа с помощью дерева отказов по ИСО 61025, анализа ошибок и результатов по МЭК 60812 и другие общепринятые (аттестованные) методы.

Указанные методы рассматривают опасности любых видов.

4.2. Документированная система контроля биозагрязнений должна предусматривать:

a) определение потенциальной опасности для процесса или продукта, оценку вероятности наступления этой опасности и выбор методов ее предупреждения или контроля;

b) определение зон риска и точек в каждой зоне, процессов, технологических операций и условий окружающей среды, которые могут контролироваться для исключения опасности или сведения к минимуму вероятности ее появления;

c) установление предельных значений параметров, подлежащих контролю;

d) установление порядка проведения текущего контроля;

e) определение порядка действий, предпринимаемых, когда по результатам контроля параметров в какой-либо точке процессы, технологические операции или условия окружающей среды не соответствуют заданным требованиям;

f) определение порядка проверки эффективности принятой документированной системы контроля биозагрязнений; этот порядок может включать в себя дополнительные методы контроля;

g) организацию системы обучения;

h) принятие и ведение соответствующей системы документации.

5. Документированная система контроля биозагрязнений.

5.1. Общие требования

Пользователь несет ответственность за разработку, внедрение и ведение документированной системы контроля биозагрязнений с соответствующим оформлением результатов. Это позволяет обнаруживать негативные факторы в реальном масштабе времени. Такая система должна быть разработана с обязательным учетом конкретной сферы применения, помещения или специфических условий. Она должна входить составной частью в систему обеспечения качеством. Система обеспечения качеством должна включать в себя соответствующую программу обучения работе по принятой документированной системе контроля биозагрязнений.

Выполнение текущего контроля биозагрязнений (5.3) должно быть организовано так, чтобы возможность загрязнения продукта и/или зоны риска при отборе проб была сведена к минимуму.

Следует выполнить классификацию зон риска согласно принятым правилам (стандартам) и документированной системе контроля биозагрязнений. Классификация зон риска может быть выполнена также с использованием качественных критериев биозагрязнения воздуха и поверхностей (например, низкий, средний, высокий или очень высокий риск).

Примечание: В настоящем стандарте не рассматриваются детально первые две части документированной системы контроля биозагрязнений, приведенные в 4.2, перечисления а), Ь). Информация по обнаружению, оценке и контролю опасности приведена в других источниках [5].

5.2. Уровни предупреждения, действия и цели

Пользователь чистого помещения или окружающей среды должен установить уровни предупреждения и действия по микробному загрязнению. Эти уровни должны соответствовать области применения, классификации зон риска и возможностям используемой технологии. В некоторых областях целевой уровень микробного загрязнения может использоваться в качестве альтернативы уровням предупреждения и действия.

Анализ данных по биозагрязнениям следует выполнять при вводе в эксплуатацию чистых помещений и связанных с ними контролируемых сред с периодичностью, установленной документированной системой контроля биозагрязнений, чтобы получить обоснование значений уровней предупреждения и действия. Уровни предупреждения и действия могут быть связаны с целевыми уровнями в случаях, когда они используются. Следует периодически рассматривать значения уровней предупреждения и действия и, при необходимости, корректировать их.

5.3. Текущий контроль биозагрязнений

5.3.1. Общие положения

Следует проводить текущий контроль биозагрязнений в зонах риска путем отбора проб и подсчета колониеобразующих единиц соответствующими методами по плану отбора проб.

Воздух, поверхности, ткани и жидкости являются примерами источников биозагрязнений, которые могут представлять опасность (приложения А, С, F).

По окончании монтажа новых чистых помещений и их приемки, в т.ч. в построенном состоянии, микробиологический отбор проб может стать основой базы данных.

В критических зонах чистых помещений в построенном и оснащенном состояниях следует выполнять текущий микробиологический контроль. При эксплуатации чистых помещений его следует выполнять в соответствии с принятой документированной системой контроля биозагрязнений.

5.3.2. Отбор проб

5.3.2.1. Общие положения

Принятый метод отбора проб должен учитывать специфику конкретной ситуации. Отбор проб должен выполняться средствами и методами, регламентированными инструкцией и документацией изготовителя.

5.3.2.2 Устройство для отбора проб.

Устройство должно быть выбрано исходя из особенностей зоны, где оно будет применяться, с учетом следующих факторов:

a) вида жизнеспособных частиц;

b) чувствительности жизнеспособных частиц к методу отбора проб;

c) ожидаемой концентрации жизнеспособных частиц;

d) естественной микрофлоры, свойственной данному объекту;

e) возможности доступа в зону риска;

f) возможности определения биозагрязнений в низких концентрациях;

g) внешних условий зоны риска, в которой будет проводиться отбор проб;

h) времени отбора проб и его продолжительности;

i) метода отбора проб, материала и свойств среды, в которой отбираются пробы;

j) влияния устройства на контролируемый процесс или окружающую среду;

к) точности и эффективности отбора проб;

l) инкубации и выявления жизнеспособных частиц и метода оценки биозагрязнений;

m) вида получаемой информации (например, количественной или качественной);

n) эффективности жидкостей для экстракции или промывания, где это необходимо.

5.3.2.3. План отбора проб

План должен разрабатываться и оформляться в соответствии с принятой документированной системой контроля биозагрязнений. Это играет важную роль для правильной оценки данных по биозагрязнениям.

Отбор проб должен выполняться в чистом помещении в эксплуатируемом состоянии и в наиболее неблагоприятные периоды, например, перед окончанием смены или при наиболее высокой активности. Отбор проб в чистом помещении в оснащенном состоянии также может дать полезную информацию в отношении конструкции и эксплуатационных свойств оборудования и помещений.

План должен включать в себя:

a) первоначальный план отбора проб, дающий точку отсчета в рамках принятой документированной системы контроля биозагрязнений;

b) план текущего отбора проб согласно принятой документированной системе контроля биозагрязнений.

5.3.2.4. Разработка плана отбора проб

План должен учитывать уровень чистоты в зоне риска и уровень контроля биозагрязнений, необходимый для выполнения данной работы, защиты персонала, окружающей среды, технологического процесса и продукта. При этом необходимо учитывать следующее:

a) выбор точек отбора проб с учетом расположения и назначения зоны риска;

b) число проб (пробы с ограниченным или малым объемом могут не обеспечить представительности результатов, но в некоторых случаях отбор большого числа проб может компенсировать недостаточность объема проб);

c) периодичность отбора проб;

d) методы отбора проб, в т. ч. количественные или качественные тесты;

е) объем пробы или зону, в которой отбирается проба;

f) растворы, жидкости для смыва, нейтрализаторы и др.;

g) факторы, относящиеся к конкретной ситуации, которые могут повлиять на результаты культивирования;

h) воздействие технологических операций, персонала и оборудования в зонах риска, которые могут привнести биозагрязнения, например:

1) сжатые газы,

2) воздух в помещении,

3) технологическое оборудование,

4) средства текущего контроля;

5) контейнеры для хранения,

6) количество людей, находящихся в зоне,

7) незащищенные поверхности персонала,

8) личная одежда персонала,

9) защитная одежда,

10) стены, потолки,

11) полы

12) двери,

13) скамьи;

14) стулья;

15) воздух, поступающий из других источников.

5.3.2.5. Периодичность отбора проб

Периодичность устанавливается в принятой документальной системе контроля биозагрязнений и подтверждается или корректируется в следующих случаях:

a) когда уровни предупреждения или действия многократно превышаются;

b) после длительного перерыва в работе;

c) при обнаружении патогенных микроорганизмов в зонах риска;

d) после любых существенных работ по ремонту или техническому обслуживанию системы вентиляции;

e) после изменений в технологическом процессе, которые влияют на среду чистого помещения;

f) после получения необычных результатов;

g) после изменений в методах очистки или дезинфекции;

h) после незапланированных событий, которые могут повысить уровень биозагрязнений.

5.3.2.6. Точки отбора проб

Точки должны быть определены в соответствии с принятой документированной системой контроля биозагрязнений и включены в план отбора проб.

Может быть предусмотрен отбор более чем одной пробы в одной точке. В различных точках может быть предусмотрен отбор различного числа проб.

Отбор проб должен проводиться в точках, указанных в документации.

5.3.2.7. Маркировка образцов

Маркировка каждого образца должна содержать следующую информацию (может применяться система кодирования, позволяющая получить эту информацию):

a) точку отбора проб;

b) дату и время отбора проб;

c) данные о лице, проводившем отбор проб;

d) работу, выполняемую во время отбора проб;

е) тип питательной среды;

f) любые отклонения от плана отбора проб.

5.3.3. Аттестация (валидация)

Принятая система текущего контроля должна использоваться при аттестации (валидации) чистых помещений и связанных с ними контролируемых сред согласно ИСО 14698-2 и ИСО 14644-4 (приложение С).

Примечание: Сведения о некоторых методах микробиологического контроля приведены в ИСО 14698-2.

5.4. Обработка проб

Отбор, транспортирование и обработка проб не должны влиять на жизнеспособность и число отобранных микроорганизмов. При этом нужно учитывать следующие факторы:

a) условия транспортирования и хранения, их длительность;

b) использование нейтрализующих агентов;

c) использование осмотических растворов.

Пробы следует отбирать и помещать в контейнеры таким образом, чтобы не привносить биозагрязнения и не ингибировать рост микроорганизмов.

5.5. Культивирование образцов

5.5.1. Общие положения

Питательную среду и условия инкубации (температуру, длительность, парциальное давление кислорода, относительную влажность) следует выбирать в соответствии с видами микроорганизмов, которые предполагается выделить. Этот выбор зависит также от окружающей среды, в которой ведется отбор проб, используемых методов и оборудования.

5.5.2. Питательная среда

Питательная среда должна быть неселективной, если не предусмотрено иное. В случае если в точке обора проб ожидается остаточная антибактериальная активность, для устранения или снижения этого эффекта в среду следует вводить дополнительные ингредиенты.

Если питательные среды используются в чистых помещениях или окружающей их среде, внешняя поверхность контейнеров должна поддерживаться в чистом состоянии, соответствующем их назначению.

Примечание: Для сохранения уровня чистоты может потребоваться применение двух- или трехслойной упаковки.

Качество питательных сред должно контролироваться соответствующими методами [6], [7].

5.5.3. Инкубация

При выборе температуры и времени инкубации инокулированной среды следует, по мере возможности, учитывать условия, которые благоприятствуют росту видов микроорганизмов, наличие которых ожидается в чистой среде.

Общепринятый период инкубации составляет от 2 до 5сут. для роста бактерий и от 5 до 7сут. для роста грибов, особенно в случаях, когда количество жизнеспособных единиц (микроорганизмов) невелико. В случае анаэробных, термофильных, микроаэрофильных, растущих на обедненных или минимальных средах бактерий и грибов могут потребоваться специфические условия аэрации и времени инкубации. В течение инкубационного периода чашки следует осматривать через определенные интервалы времени.