Страница 2: Визначення найбільш вірогідного числа мікроорганізмів у воді з використанням тестів діагностичних Quanti-Disc та SimPlate. Методичні рекомендації (45078)

Виробник IDEXX Laboratories, Inc., One IDEXX Drive Westbrook, Maine 04092 USA тел. 1-207-856-0496; 1-800-321-0207, факс 1-207-856-0630.

Фірма постачальник ТОВ "Симедіка УА". Україна, 04655, м. Київ, Кудрявський узвіз, 7, оф. 420, тел/факс (044) 451 88 61.

4.2. Процедура проведення дослідження за допомогою QUANTI-DISC

4.2.1. До дослідження проб в лабораторії необхідно приступити щонайшвидше з моменту відбору.

4.2.2. Підчас дослідження треба дотримуватись асептичної техніки і користуватись стерильними матеріалами. Стерильною піпеткою відібрати 4 куб.см досліджуваної проби води з ємкості із зразком.

Проби забрудненої води попередньо розбавляють 10-кратними розведеннями.

4.2.3. Зняти кришку Quanti-Disc, вертикально піпеткою нанести 4 куб.см досліджуваної проби (або її розведення) в центр Quanti-Disc. Впевніться, що вода зразку заповнила усі розкриті канали. Капілярна дія розповсюдить воду зразка в лунки, заповнені реактивами. Зачекати приблизно 3 хвилини, щоб вода зразка розтеклась.

4.2.4. Накрити кришкою Quanti-Disc для того, щоб залишки води всмокталися. Кришка Quanti-Disc придатна для маркування та запису результатів.

4.2.5. Помістити Quanti-Disc кришкою верх в інкубатор з температурою (36 +- 1) град. С на (44 +- 4) години. За необхідності можлива інкубація при температурі (22 +- 1) град. С протягом 48 годин.

4.2.6. Після інкубації розмістити Quanti-Disc під ультрафіолетовою лампою потужністю 6 ват, 365 нм, та провести підрахунок кількості лунок, що флуоресціюють. Підрахунок проводять у темному приміщенні, тримаючи лампу зворотною стороною до очей, а лицьовою до зразка на відстані 13 см над Quanti-Disc. Можливий автоматичний облік результатів за допомогою приладу "Quanti-Disc Rider".

4.2.7. Відповідно до таблиці 1 "Визначення найбільш вірогідного числа мікроорганізмів при дослідженні методом Quanti-Disc" визначають Найбільш Вірогідне Число гетеротрофних бактерій у досліджуваному зразку Результати в таблиці НВЧ виражені із розрахунку на 1 куб.см.

У випадку якщо проба води була попередньо розведена, необхідно провести корегування НВЧ. Наприклад, в разі дослідження 1 куб.см проби та 9 куб.см стерильного розчину (10-кратне розведення), необхідно помножити результат з таблиці НВЧ на 10, для того щоб знайти правильне Найбільш Вірогідне Число в розрахунку на 1 куб.см для первинної проби.

4.3. Внутрішньолабораторний контроль якості при роботі з діагностичними тестами Quanti-Disc

Внутрішньолабораторний контроль якості рекомендується проводити для кожної партії діагностичних тестів Quanti-Disc чи частіше за показами (сумнівні результати досліджень, сумніви щодо дотримання термінів та умов зберігання тощо). Процедура контролю складається з визначення стерильності діагностичних тестів та постановки позитивного контролю.

4.3.1. Визначення стерильності. Використовуючи 4 куб.см стерильного розчину (наприклад: дехлорована вода, деіонізована вода, буферизована чи 1% розчин пептона), виконати етапи описані в підпунктах 4.2.2-4.2.6 пункту 4.2 цих методичних рекомендацій.

Облік результатів контролю стерильності: після інкубації не повинно бути лунок, що флуоресціюють під дією ультрафіолетового світла.

Позитивний контроль. Провести заходи зазначені в підпунктах 4.2.2-4.2.6 пункту 4.2 цих методичних рекомендацій використовуючи тест-штам Escherichia coli ATCC 25922.

Облік результатів позитивного контролю. Після інкубації лунки флуоресціюють під дією ультрафіолетових променів.

Результати контролю записують в Журнал приготування та контролю якості поживних середовищ (форма N 256/о, затверджена наказом МОЗ України від 04.01.2001 N 1 "Про затвердження форм медичної облікової документації, що використовується в лабораторіях лікувально-профілактичних закладів").

Схема визначення ЗМЧ води за допомогою діагностичних тестів QUANTI-DISC

Схема

визначення ЗМЧ води за допомогою діагностичних тестів

QUANTI-DISC

5. Порядок визначення найбільш вірогідного числа мікроорганізмів (загального мікробного числа) у воді за допомогою діагностичних тестів SIMPLATE

5.1. Обладнання та витратні матеріали

Термостат електричний сухоповітряний з автоматичним терморегулятором температур до 55 град. С, що дозволяє підтримувати в камері температуру, що задана, з точністю +-1 град. С.

Стерилізатор паровий (автоклав електричний).

УФ лампа потужністю 6 Ват, 365 нм.

Діагностичні тести SimPlate (номер за каталогом WHPC-25) або

Діагностичні тести SimPlate (номер за каталогом WHPC-100).

Маркери по склу

Флакони для відбору проб води.

Контейнери (сумки) для транспортування проб в лабораторію.

Тести діагностичні SimPlate - являють собою набір, який складається з ліофілізованого поживного середовища у пробірках (разова доза) або флаконах (мультидоза) та стерильних дисків з лунками, по яких розподіляється досліджуваний зразок.

Комплектація тестів діагностичних SimPlate: 10 упакованих у фольгу стерильних флаконів з середовищем для розведення, ємністю 100 куб.см та 100 стерильних SimPlate дисків з кришками (номер за каталогом WHPC-100) або 25 упакованих у фольгу пробірок з середовищем для розведення та 25 стерильних SimPlate дисків з кришками (номер за каталогом WHPC-25).

До кожного набору додається таблиця НВЧ та інструкція.

Термін та умови зберігання. Зберігати при температурі 2-30 град. С в темному місці. Термін зберігання зазначений на упаковках з середовищем для розведення.

Виробник IDEXX Laboratories, Inc.,One IDEXX Drive Westbrook, Maine 04092 USA тел. 1-207-856-0496; 1-800-321-0207, факс 1-207-856-0630.

Фірма постачальник ТОВ "Симедіка УА". Україна, 04655, м. Київ, Кудрявський узвіз, 7, оф. 420, тел/факс (044) 451 88 61

5.2. Процедура проведення дослідження з використанням SimPlate WHPC-100 (мультидоза)

Під час дослідження треба дотримуватись асептичної техніки і користуватись стерильними матеріалами.

5.2.1. Розчинити середовище, додавши у флакон з середовищем до 100 куб.см стерильного розчину, закрити флакон і струсити до розчинення.

В розчиненому стані середовище може зберігатися в холодильнику протягом 5 діб. Невикористані залишки середовища утилізувати як зазначено в підпункті 2.1.6 пункту 2.1 цих методичних рекомендацій.

5.2.2. В стерильну пробірку внести 1 куб.см проби та 9 куб.см розчиненого поживного середовища, перемішати і вилити в центр диску.

Для забруднених вод проводять попередні 10-кратні розведення проби.

5.2.3. Взяти диск за краї і провернути круговими рухами по поверхні столу, добитись розподілу проби у всі лунки (наявність повітряних бульбашок в лунках на результат тесту не впливає).

5.2.4. Розмістити диск під кутом 90-120 град. для видалення залишків проби, за допомогою адсорбенту.

5.2.5. Перевернути диск догори дном і інкубувати протягом 48 годин при температурі (36 +- 1) град. С. Результат може бути прочитаний в період з 45 до 72 годин після початку інкубації. За необхідності можлива інкубація при температурі (22 +- 1) град. С протягом 48 годин.

5.2.6. Підрахувати кількість флуоресцентних лунок за допомогою опромінювання ультрафіолетовою лампою (6 Ват, 365 nm) на відстані 15 см.

5.2.7. Згідно таблиці 2 "Визначення найбільш вірогідного числа мікроорганізмів при дослідженні методом SIMPLATE WHPC-100 (мультидоза)" зробити підрахунок НВЧ загального мікробного числа гетеротрофів в пробі.

Встановити НВЧ відповідно до об'єму проби. Наприклад: у випадку, якщо використовується 0,1 куб.см проби і 9,9 куб.см розведеного для тестування середовища, НВЧ по таблиці 2 буде встановлене для 0,1 куб.см. Для приведення отриманого НВЧ до НВЧ на 1 куб.см необхідно отриманий результат помножити на 10.

Схема дослідження води за допомогою діагностичних тестів SIMPLATE WHPC-100

Схема

дослідження води за допомогою діагностичних тестів

SIMPLATE WНРС-100

5.3. Процедура проведення дослідження з використанням SimPlate WHPC-25 (разова доза)

5.3.1. Додати 10 +- 0,2 куб.см проби води в пробірку з середовищем. Закрити пробкою і струсити до розчинення.

5.3.2. Помістити вміст пробірки в центр диска.

5.3.3. Подальший хід досліджень за підпунктами 5.2.3-5.2.6 пункту 5.2 цих методичних рекомендацій.

5.3.4. Згідно таблиці 3 "Визначення найбільш вірогідного числа мікроорганізмів при дослідженні методом SIMPLATE WHPC-25 (разова доза)" зробити підрахунок НВЧ загального мікробного числа гетеротрофних мікроорганізмів в пробі.

Встановити НВЧ відповідно до об'єму проби. Наприклад: у випадку, якщо використовується 0,1 куб.см проби і 9,9 куб.см розведеного для тестування середовища, НВЧ по таблиці 3 буде встановлене для 0,1 куб.см. Для приведення отриманого НВЧ до НВЧ на 1 куб.см необхідно отриманий результат помножити на 10.

Схема дослідження води за допомогою діагностичних тестів SIMPLATE WHPC-25

Схема

дослідження води за допомогою діагностичних тестів

SIMPLATE WНРС-25

Подальший хід досліджень за процедурою дослідження води з використанням тестів діагностичних SIMPLATE WHPC-100, підпункти 5.2.3-5.2.7 пункту 5.2 цих методичних рекомендацій.

6.3. Внутрішньолабораторний контроль якості при роботі з діагностичними тестами SimPlate

Внутрішньолабораторний контроль якості рекомендується проводити для кожної партії діагностичних тестів SimPlate або частіше за показами (сумнівні результати досліджень, сумніви щодо дотримання термінів та умов зберігання тощо).

Процедура контролю складається з визначення стерильності діагностичних тестів та постановки позитивного контролю.

6.3.1. Визначення стерильності. Провести заходи, зазначені в підпунктах 5.2.3-5.2.6 пункту 5.2 цих методичних рекомендацій, використовуючи 10 куб.см регідратованого середовища.

Облік результатів контролю стерильності: після інкубації не повинно бути лунок, що флуоресціюють під дією ультрафіолетового світла.

6.3.2. Позитивний контроль. Провести заходи, зазначені в підпунктах 5.2.3-5.2.6 пункту 5.2 цих методичних рекомендацій, використовуючи тест-штам Escherichia coli ATCC 25922.

Облік результатів позитивного контролю. Після інкубації лунки флуоресціюють під дією ультрафіолетових променів.

Результати контролю записують в Журнал приготування та контролю якості поживних середовищ (форма N 256/о, затверджена наказом МОЗ України від 04.01.2001 N 1).

7. Вимоги безпеки

Вимоги безпеки, загальне розташування лабораторії, а також її інфраструктура повинні відповідати державних санітарних правил ДСП 9.9.5.-080-2002 "Правила влаштування і безпеки роботи в лабораторіях (відділах, відділеннях) мікробіологічного профілю".

Таблиця 1. Визначення найбільш вірогідного числа

мікроорганізмів при дослідженні методом Quanti-Disc