ГОСТ 23454-79* Молоко. Методы определения ингибирующих веществ Стр. 1 из 9.
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
СОЮЗА ССР
МОЛОКО
МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИНГИБИРУЮЩИХ ВЕЩЕСТВ
Издание официальное
ИПК ИЗДАТЕЛЬСТВО СТАНДАРТОВ
Москва
УДК 637.127.6 : 006.354 Группа Ш9
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ СОЮЗА ССР
МОЛОКО
М
ГОСТ
23454—79* *
Milk.
Methods for determination of the inhibitors
ОКСТУ 9209
Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 30 января 1979 г. № 334 срок введения установлен
с 01.01.80
Ограничение срока действия снято по Протоколу № 3—93 Межгосударственного Совета по стандартизации, метрологии и сертификации
Настоящий стандарт распространяется на молоко и устанавливает методы определения ингибирующих веществ, к которым относятся: антибиотики, формалин, перекись водорода и другие моющие, дезинфицирующие и консервирующие вещества.
МЕТОД ОТБОРА ПРОБ
Методы отбора проб молока и подготовки их к анализу — по ГОСТ 9225—84.
До проведения анализа пробы хранят в холодильнике при температуре (6±2) °С не более суток.
(Измененная редакция, Изм. Xs 2).
МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИНГИБИРУЮЩИХ ВЕЩЕСТВ
С ИНДИКАТОРОМ РЕЗАЗУРИНОМ
Сущность метода
Метод основан на восстановлении резазурина при развитии в молоке чувствительных к ингибирующим веществам микроорганизма вида Streptococcus thermophilus.
С. 2 ГОСТ 23454-79
Чувствительность метода позволяет обнаружить в молоке содержание пенициллина 0,01 МЕ/см3; массовую долю формалина 0,005%; массовую долю перекиси водорода 0,01 %; стрептомицина 10 мкг/см3; тетрациклина 1 мкг/см3.
(Измененная редакция, Изм. Ns 2, 3).
Аппаратура, материалы и реактивы
Стерилизатор паровой медицинский по ГОСТ 19569—89 или стерилизаторы аналогичного типа.
Редуктазник по ТУ 46—22—736—82 или баня водяная, обеспечивающая регулирование температуры от 30 до 50 °С, или баня водяная без терморегуляции, помещаемая в термостат.
Термостат, позволяющий поддерживать температуру от 30 до 50 °С с отклонением от заданной ±1 °С.
Холодильник бытовой по ГОСТ 16217—83.
Термометры стеклянные жидкостные (нертутные) типа Б, диапазон измерения температуры от 0 до 100 °С по ГОСТ 28498—90.
Весы лабораторные общего назначения 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г по ГОСТ 24104—88.
Пробирки стеклянные типов Ш и П2, высотой (150±5) мм и диаметром (16±1) мм по ГОСТ 25336—82.
Пипетки 1-1-1; 4-1-1; 2-1-10 по ГОСТ 29169-91.
Колбы мерные вместимостью 200 см3 по ГОСТ 25336—82.
Штатив для пробирок.
Петля бактериологическая.
Тара стеклянная типа IV, вместимостью 200 см3 по ГОСТ 15844-92.
Пробки резиновые конусные по ТУ 38.1051835—88.
Резазурино-натриевая соль по ТУ 6—09—15—276—76, основной раствор.
Препарат сухой для контроля определения ингибирующих веществ в молоке (СКИВ) по ТУ 49 913-83.
Тест-культура для определения ингибирующих веществ (Streptococcus thermophilus штамм 2 КС) по ТУ 10—02—02—789—65—91.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709—72.
Молоко обезжиренное кислотностью не более 19 ’Т, получаемое из коровьего молока не ниже 2-го сорта по ГОСТ 13264—88 или молоко сухое обезжиренное по ГОСТ 10970—87, предварительно восстановленное и проверенное на отсутствие ингибирующих веществ
.ГОСТ 23454-79 С. 3
Препарат бактериальный термофильного молочно-кислого стрептококка (S. thermophilus штамм В19) для определения ингибирующих веществ по ТУ 10—02—02—789—30—90.
(Измененная редакция, Изм. № 1, 2, 3).
Подготовка к анализу
. Приготовление стерильного обезжиренного молока
Обезжиренное молоко разливают по 100 см3 в бутылочки или по 10 см3 в пробирки и стерилизуют при температуре (121 ±1) °С в течение (10+1) мин.
(Введен дополнительно, Изм. № 3).
Основной раствор резазурина массовой концентрации 0,0005 г/см3 готовят по ГОСТ 9225—84.
(Измененная редакция, Изм. № 2).
Приготовление коллекционной тест-культуры
Для восстановления активности, культуры бутылочку со 100 см3 обезжиренного стерилизованного молока подогревают до температуры (43+1) °С. Во флакон с сухой тест-культурой добавляют от 5 до 7 см3 стерилизованного молока и тщательно перемешивают. Содержимое флакона вносят в бутылочку с молоком, подготовленным как указано выше, и перемешивают.
Термостатируют при температуре (41 ± 1) °С в течение 12—18 ч до образования плотного сгустка, затем охлаждают до температуры (6+2) °С и используют для приготовления коллекционной тест-культуры.
Для приготовления коллекционной тест-культуры в пробирку с 10 см3 стерильного обезжиренного молока вносят 1 петлю культуры, приготовленной по п. 2.3.2.1, и выдерживают в термостате при температуре (41 ±1) °С в течение 16—18 ч.
Коллекционную культуру хранят при температуре (6±2) “С и перевивают через 10—14 сут.
Через 3—4 пересадки ее снова готовят из сухой.
Допускается использовать культуру дольше, если она не утратила своей активности и по микроскопическому препарату соответствует предъявленным требованиям (продолжительность сквашивания при перевивке 16—18 ч,'сгусток плотный; консистенция однородная, допускается мягкая крупитчатость или вязкая; в поле зрения микроскопа в препарате тест-культуры — диплококки одиночные или собранные в цепочки).
Приготовление рабочей тест-кулътуры
Рабочую тест-культуру готовят из коллекционной в пробирках или бутылочках в зависимости от необходимого количества
Система NormaCS® www.normacs.ru 05.03.2007 22:00:09
С. 4 ГОСТ 23454-79
или из сухого бактериального препарата термофильного молочнокислого стрептококка для определения ингибирующих веществ.
При приготовлении рабочей тест-культуры из коллекционной в пробирку с 10 см3 стерильного обезжиренного молока вносят 1 петлю коллекционной тест-культуры, а в бутылочку со 100 см3 стерильного обезжиренного молока вносят 1 каплю коллекционной тест-культуры и выдерживают в термостате при температуре (41 ±1) °С 16—18 ч до образования плотного сгустка.
Полученную рабочую тест-культуру используют для проведения анализа.
В случае необходимости культуру помещают в холодильник при температуре (6±2) °С и используют в течение суток.
Непосредственно перед применением рабочую культуру перемешивают путем интенсивного встряхивания.
При приготовлении рабочей культуры из сухого бактериального препарата во флакон с препаратом добавляют стерильной пипеткой 10 см3 стерильной или кипяченой дистиллированной воды. Флакон закрывают пробкой и его содержимое тщательно перемешивают до получения однородной взвеси.
Культуру используют для проведения анализа.
Одна порция (флакон) культуры, приготовленной из препарата, предназначена для анализа 30 проб исследуемого молока. При необходимости культуру хранят при температуре (6±2) °С и используют в течение не более 8 ч.
2.3.3. (Измененная редакция, Изм. № 1, 2, 3).
Подготовка посуды и резиновых пробок
Новую посуду кипятят в подкисленной воде (раствор соляной кислоты с массовой долей соляной кислоты от 1 до 2%) в течение 15 мин.
В один конец пипетки, предназначенной для внесения тест-культуры, вкладывают кусочек ваты.
Посуду, предназначенную для приготовления и внесения тест- культуры, стерилизуют по ГОСТ 9225—84.
Резиновые пробки помещают в стеклянную посуду с дистиллированной водой и стерилизуют в автоклаве при 0,1 МПа в течение 20 мин. При отсутствии автоклава резиновые пробки кипятят непосредственно перед испытанием в дистиллированной воде или конденсате в течение 30 мин.
(Измененная редакция, Изм. № 2).
Проведение анализа
ГОСТ 23454-79 С. 5
В чистые пробирки наливают по 10 см3 исследуемого молока и закрывают стерильными резиновыми пробками. Оставшуюся часть пробы сохраняют до конца анализа в холодильнике при температуре (6±2) °С.
При наличии большого количества проб исследуемого молока анализ проводят сериями. Количество пробирок с исследуемым молоком в каждой серии не более 20.
(Измененная редакция, Изм. №2).
Одновременно проводят контрольный анализ. Для этого в пробирку наливают 10 см3 восстановленного препарата СКИВ. Для получения восстановленного препарата вскрывают колпачок и пробку флакона с сухим препаратом. Во флакон вносят пипеткой 10 см3 дистиллированной воды, подогретой до температуры (50+10) °С, закрывают пробкой и встряхивают до полного растворения.
Пробирки с исследуемым молоком и контрольной пробой нагревают в водяной бане до (87±2) °С с выдержкой 10 мин, затем охлаждают до (47+1) °С. Затем в пробирки стерильной пипеткой вносят рабочую тест-культуру: 0,5 см3 приготовленной из коллекционной тест-культуры и 0,3 см3 — из бактериального препарата.
Содержимое пробирок тщательно перемешивают трехкратным перевертыванием. Затем пробирки выдерживают в течение 1 ч 15 мин при температуре (46+1) ’С в редуктазнике или водяной бане.
(Измененная редакция, Изм. № 3).
В пробирки с исследуемым молоком и контрольной пробой вносят по 1 см3 основного раствора резазурина с температурой (20±2) °С. Содержимое пробирок перемешивают путем двукратного перевертывания.
(Измененная редакция, Изм. № 2).
Пробирки с исследуемым молоком и контрольной пробой выдерживают в редуктазнике или водяной бане с терморегулятором или водяной бане, помещенной в термостат при (46± 1) °С в течение 10 мин.
(Измененная редакция, Изм. № 1, 2, 3).
Обработка результатов
При отсутствии в исследуемом молоке ингибирующих веществ (и в контрольной пробе) содержимое пробирок будет иметь розовый или белый цвет.
При наличии в молоке ингибирующих веществ Содержимое пробирок будет иметь окраску, характерную для молока 1 класса по
С. 6 ГОСТ 23454-79
цветовой шкале для определения класса по редуктазной пробе с реза- зурином по ГОСТ 9225—84.
(Измененная редакция, Изм. № 3).
МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИНГИБИРУЮЩИХ ВЕЩЕСТВ
С ИНДИКАТОРОМ МЕТИЛЕНОВЫМ ГОЛУБЫМ
Сущность метода
Метод основан на восстановлении метиленового голубого при развитии в молоке чувствительных к ингибирующим веществам микроорганизмов вида Streptococcus thermophilus.
Чувствительность метода позволяет обнаружить пенициллин от 0,01 до 0,1 МЕ/см3; стрептомицин от 30 до 50 мкг/см3; тетрациклин; окситетрациклин — 1 МЕ/см3; олеандомицин — 10 МЕ/см3; массовую долю формалина более 0,003%; массовую долю перекиси водорода более 0,01 %,
Аппаратура, материалы и реактивы Аппаратура — по п. 2.2.1.
Пептон сухой ферментативный для бактериологических целей по ГОСТ 13805—76, раствор массовой концентрацией 0,03 г/см3.
Метиленовый голубой по ТУ 6—09—29—76, раствор массовой концентрацией 0,005 г/см3.
Пенициллин (бензилпенициллина калиевая или натриевая соль) по ГФ СССР-Х.
Молоко обезжиренное стерильное, приготовленное по ГОСТ 9225— 84.
Тест-культура коллекционная (штамм Streptococcus thermophilus).
Вода питьевая по ГОСТ 2874—82.
Электроплитка бытовая по ГОСТ 14919—83.
Весы лабораторные общего назначения 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г по Г ОСТ 24104—88.
3.2. (Измененная редакция, Изм. № 2).
Подготовка к а и а л и з у
Приготовление коллекционной и рабочей тест-культуры проводят в соответствии с пц. 2.3.2 и 2.3.3.
Приготовление водного раствора пептона
3 г пептона помещают в колбу и доливают до 100 см3 водопроводной водой, стерилизуют при (121 ±2) °С в течение 10 мин и хранят в холодильнике при (6±2) °С в течение 30 сут. В случае отсутствия стерилизатора допускается кипячение раствора пептона от 1 до 2 мин на слабом огне; данный раствор должен быть использован в течение 7—8 ч.
ГОСТ 23454-79 С. 7
Приготовление водного раствора метиленового голубого
500 г метиленового голубого помещают в колбу, доливают 100 см3 дистиллированной кипяченой воды, перемешивают до полного растворения, плотно укупоривают и хранят в холодильнике при (6+2) °С не более 30 сут.
Приготовление смеси для анализа
К 20 см3 водного раствора пептона добавляют 3,5 см3 односуточной культуры термофильного стрептококка (пипетку предварительно следует хорошо ополоснуть этой смесью) и 0,1 см3 водного раствора метиленового голубого. Смесь хорошо перемешивают. Смесь готовят перед анализом. Объем смеси зависит от числа исследуемых проб.
3.3.3, 3.3.4 (Измененная редакция, Изм. № 2).
Проведениеанализа
В чистые пробирки наливают по 10 см3 исследуемого молока и закрывают (неплотно) резиновыми пробками. Оставшуюся часть пробы хранят в холодильнике при (6+2) °С в течение суток.
Пробирки с исследуемым молоком нагревают в водяной бане до (87±2) °С с выдержкой 10 мин, затем охлаждают до (43+2) °С. После этого в пробирки вносят стерильной пипеткой по 2 см3 приготовленной смеси, перемешивают (пробирки трехкратно перевертывают) и выдерживают в водяной бане при температуре 41—42 °С в течение 2 ч.
