4.7. Биохимическое подтверждение принадлежности выделенных микроорганизмов к бактериям родов Proteus и (или) Morganella, и (или) Providencia.
4.7.1. Для определения наличия дезаминазы фенилаланина из 24-часовой культуры по п.4.6 делают высев штрихами на поверхность скошенного в пробирке агара, приготовленного по п.3.2.6, и культивируют при (36±1) °С в течение 48 ч, после этого на поверхность агара пипеткой наносят 3-5 капель раствора хлорного железа, приготовленного по п.3.1.4. При этом появление интенсивной зеленой окраски среды свидетельствует о положительной реакции. При отрицательной реакции цвет среды не меняется.
Бактерии родов Proteus, Morganella, Providencia дают положительную реакцию.
4.7.2. Для определения способности образовывать сероводород культуры по п. 4.6 высевают методом укола в столбик и штрихами по поверхности агаризованной среды, приготовленной по п.3.2.5.
Посевы инкубируют при (36±1) °С в течение 48 ч. При образовании сероводорода столбик среды чернеет. Бактерии рода Proteus образуют сероводород, при этом в столбике среды появляется газ, что указывает на ферментацию глюкозы с образованием кислоты и газа.
Допускается инкубирование посевов при отсутствии сероводорода через 48 ч продолжать до 4 сут, так как Р.myxofaciens может образовывать сероводород на 3-и - 4-е сутки. Бактерии рода Morganella и Providencia сероводорода не образуют.
4.7.3. Для определения способности утилизировать цитрат культуры, не образующие сероводород по п.4.7.2, пересевают на поверхность скошенного агара, приготовленного по п.3.2.7. Посевы инкубируют при (36±1) °С в течение 48 ч. Окрашивание среды в синий цвет - положительная реакция, отсутствие изменения - отрицательная реакция.
Бактерии рода Providencia утилизируют цитрат, бактерии рода Morganella не утилизируют цитрат.
4.8. Для дифференциации видов P.vulgaris и Р.mirabilis у культур, образующих сероводород по п.4.7.2, проводят определение наличия декарбоксилазы орнитина и способности образовывать индол.
4.8.1. Для определения способности образовывать индол выделенные культуры высевают в триптон-триптофановую среду, приготовленную по п.3.2.9. Посевы инкубируют при (36±1) °С в течение 48 ч. После инкубирования добавляют 1 см реактива Ковача или Эрлиха, приготовленных по п.3.1.10. Темно-красное кольцо свидетельствует о положительной реакции.
P.vulgaris образует индол, Р.mirabilis и Р.myxofaciens индола не образуют.
4.8.2. Для определения наличия декарбоксилазы орнитина выделенные культуры высевают в среду, приготовленную по п.3.2.10. Посевы инкубируют при (36±1) °С в течение 48 ч. Положительной реакцией считают помутнение среды и изменение ее цвета в фиолетовый.
Р.mirabilis дает положительную реакцию, P.vulgaris P.myxofaciens - отрицательную.
5. ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ
5.1. Результаты оценивают по каждой пробе отдельно.
5.2. Если при изучении культуральных и биохимических свойств обнаружены микроорганизмы, дезаминирующие фенилаланин, то их относят к бактериям родов Proteus, Morganella, Providencia.
5.2.1. Результаты испытания записывают следующим образом: фенилдезаминирующие бактерии родов Proteus, Morganella, Providencia - обнаружены или не обнаружены.
5.3. Если при изучении культуральных и биохимических свойств обнаружены микроорганизмы, дезаминирующие фенилаланин и образующие сероводород, то их относят к бактериям рода Proteus.
Микроорганизмы, дезаминирующие фенилаланин, не образующие сероводород, утилизирующие цитрат, относят к бактериям рода Providencia.
Микроорганизмы, дезаминирующие фенилаланин, не образующие сероводород, не утилизирующие цитрат, относят к бактериям рода Morganella.
5.3.1. Результаты испытания записывают следующим образом: бактерии родов Proteus и (или) Morganella и (или) Providencia обнаружены или не обнаружены.
5.4. Если при изучении культуральных и биохимических свойств обнаружены микроорганизмы, дезаминирующие фенилаланин, образующие сероводород и индол, не декарбоксилизирующие орнитин, то их относят к бактериям вида P.vulgaris.
Если при изучении культуральных и биохимических свойств обнаружены микроорганизмы, дезаминирующие фенилалалин, образующие сероводород, не образующие индол, декарбоксилирующие орнитин, то их относят к бактериям вида Р. mirabilis.
5.4.1. Результаты испытания записывают следующим образом:
бактерии видов Р.vulgaris и (или) Р.mirabilis обнаружены или не обнаружены.
5.5. При записи результатов испытания указывают навеску продукта, в котором обнаружены или не обнаружены выявляемые микроорганизмы.
Текст документа сверен по:
официальное издание
М.: Издательство стандартов, 1990
