- возбудителей бруцеллеза и туляремии обеззараживают кипячением в течение 20 минут с последующим добавлением формалина до 2% концентрации и экспозицией в течение 2 часов при комнатной температуре;
- возбудителя сапа обеззараживают добавлением формалина до 4% концентрации с последующей экспозицией в течение 12 часов;
- возбудителей холеры обеззараживают кипячением в течение 30 минут;
- возбудителя сибирской язвы обеззараживают кипячением в течение 60 минут с последующим добавлением формалина до 4% концентрации и экспозицией до 1 часа.
2.8.17. Качество мертиолята натрия и формалина подлежит обязательному контролю.
2.8.18. Эффективность обработки контролируют пробой на отсутствие возбудителя ("специфическую стерильность"). Контроль эффективности регламентируется нормативными документами по проверке на специфическую стерильность, разрабатываемыми и утверждаемыми в установленном порядке.
2.8.19. При необходимости проведения срочного анализа на наличие антигенов возбудителей I-II групп и отсутствии времени для обработки материала или постановки пробы на отсутствие возбудителя инфекции серологические реакции проводят в "заразной" зоне с соблюдением требований биологической безопасности, обусловленных видовыми особенностями ПБА.
2.8.20. В случае необходимости срочного транспортирования обезвреженного материала без контроля на отсутствие возбудителя инфекции его перевозят как заразный материал.
2.8.21. Серологические исследования на обнаружение антигена или определение антител к вирусам II группы патогенности в связи с отсутствием регламентированных методов инактивации вирусов проводят только в боксированном помещении или боксе биологической безопасности.
2.8.22. При пипетировании пользуются только резиновыми грушами или автоматическими устройствами. При этом кончик пипетки всегда должен быть ниже уровня жидкости в сосуде, или жидкость из пипетки должна стекать по внутренней стенке сосуда. Не допускается переливание жидких культур через край, продувание через них воздуха из пипеток. Сбор культур с поверхности агара следует проводить петлей, металлическим, стеклянным или пластиковым шпателем.
2.8.23. При заражении развивающихся куриных эмбрионов применяют только затупленные иглы.
3.8.24.# Перед использованием посуда, пипетки, оборудование, шприцы и т.д. должны быть проверены на целостность и исправность.
2.8.25. Бактериологическая петля должна быть замкнута в непрерывное кольцо, иметь плечо длиной не более 6 см. Допускается использование одноразовых, промышленно изготовленных петель с большей длиной плеча.
2.8.26. Не допускается фиксировать мазки нагреванием. Мазки, обработанные фиксаторами или красителями, в дальнейшем подлежат обеззараживанию в режиме согласно приложению N 1.
Для фиксации используют 96° этиловый спирт, смесь Никифорова (равное количество спирта и эфира), ацетон, а при исследовании материала, содержащего возбудителя сибирской язвы или неизвестной этиологии - 96° этиловый спирт с добавлением перекиси водорода до конечной концентрации 3%. Время фиксации - 30 мин.
2.8.27. Работу с высокими концентрациями (более 10(10) КОЕ/мл**), большими объемами (более 500 мл в емкости) проводят в боксах ББ II- III класса или противочумном костюме соответствующего типа.
2.8.28. Работу по лиофилизации культур возбудителей I-II групп патогенности проводят в соответствии с нормативными документами.
2.8.29. Ампулы с высушенными культурами вскрывают в помещении музея (коллекции) живых культур в боксе биологической безопасности. При этом оттянутый конец ампулы нагревают над пламенем горелки, затем влажным концом стерильного ватного тампона прикасаются к нагретой части, в результате чего появляются трещины. Конец ампулы накрывают трехслойной марлевой салфеткой, смоченной дезинфицирующим раствором и хорошо отжатой, и обламывают пинцетом.
После вскрытия ампула остается накрытой той же салфеткой в течение одной-двух минут. Затем салфетку осторожно снимают и вместе с остатками стекла погружают в дезинфицирующий раствор. Вскрытую ампулу накрывают стерильным марлевым тампоном на 1-2 мин., затем в ампулу вносят раствор для приготовления взвеси, которую далее высевают на твердые и жидкие питательные среды. Посевы культур на питательных средах выдают в лаборатории.
2.8.30. Не допускается оставлять после окончания работы на открытых местах или в не опечатанных хранилищах нефиксированные мазки, объекты с посевами и другие материалы, содержащие ПБА.
Разрешается оставлять на столах и в боксах биологической безопасности посуду надписанную, но не засеянную, сделав соответствующую надпись.
2.8.31. По окончании работы с ПБА объекты с посевами переносят в хранилища (сейфы, холодильники, термостаты и т.п.).
Остатки ПБА, использованную посуду, твердые и жидкие отходы из "заразной" зоны лаборатории собирают в закрывающиеся емкости и передают в автоклавную или дезинфицируют на месте. Слив необеззараженных жидкостей в канализационную сеть не допускается.
2.8.32. Емкости со сгустками крови (пробирки, флаконы) обеззараживают только с использованием дезинфицирующего раствора. При погружении необходимо соблюдать осторожность. Емкость берут анатомическим пинцетом так, чтобы одна его бранша вошла немного внутрь, и погружают ее в наклонном положении до полного заполнения раствором. При правильном погружении воздушные пузыри не образуются, и емкость опускается на дно. После погружения всех емкостей пинцет обеззараживают.
2.8.33. Использованные пипетки полностью погружают в дезинфицирующий раствор, избегая образования в каналах пузырьков воздуха. В дальнейшем проводят обеззараживание в автоклаве.
2.8.34. Перенос заразного материала в автоклавную в емкостях для автоклавирования, поставленных в металлические поддоны с высокими (20 см) бортиками, производит младший и средний персонал в сопровождении ответственного лица, допущенного к работе с ПБА, в защитной одежде. Движение осуществляют по определенным маршрутам. На время переноса материала в автоклавную другое движение на пути его следования прекращают.
2.8.35. В контейнерах для автоклавирования по верхнему краю боковых стенок должны быть отверстия, обеспечивающие свободную циркуляцию пара. Целостность контейнеров и поддонов проверяют перед каждым использованием.
2.8.36. Перенос культур возбудителей в контейнерах (биксах) из одного подразделения в другое производят лица, допущенные к работе с ПБА, в присутствии сопровождающего (врача, научного сотрудника, лаборанта).
2.8.37. Контейнеры для транспортирования ПБА изготавливают из прочного, антикоррозийного материала. Дно должно быть выстлано мягким, адсорбирующим материалом в количестве, достаточном для поглощения всей жидкости в случае утечки. Крышка должна плотно закрываться. Контейнеры оборудуют удобной ручкой (ручками).
2.8.38. Хранение пищевых продуктов и прием пищи разрешается только вне лаборатории - в специально отведенных местах "чистой" зоны организации.
2.8.39. Не допускается вызов сотрудников во время выполнения ими любого вида работ с ПБА.
Доступ в помещение во время проведения работ лицам, не имеющим прямого отношения к работе, не допускается.
2.8.40. Вынос из "заразной" зоны лаборатории оборудования, лабораторной или хозяйственной посуды, реактивов, инструментов и др. производят после их дезинфекции и с разрешения руководителя лаборатории. Вынос перечисленных материалов за пределы организации осуществляют по письменному разрешению руководителя организации.
2.8.41. Для индивидуальной защиты персонала используют средства индивидуальной защиты (СИЗ). После использования СИЗ обеззараживают (приложение N 1).
2.8.42. Не допускается одновременная работа в одном помещении с диагностическим материалом, культурами микроорганизмов и вакцинами.
2.8.43. Не допускается проведение экспериментальных работ с антибиотикоустойчивыми вирулентными штаммами, если в организации отсутствуют лекарственные препараты, к которым используемые штаммы чувствительны (не менее двух препаратов).
2.8.44. При необходимости в одном помещении допускается проведение работ:
- одновременно с разными видами (штаммами) возбудителей, при этом биологическая безопасность обеспечивается в соответствии с наиболее жесткими требованиями, определяемыми видовыми, штаммовыми и другими особенностями используемых ПБА;
- диагностических и экспериментальных исследований, при условии разделения этих работ во времени и проведения заключительной дезинфекции после каждого цикла работ.
2.8.45. Перед уходом из помещения сотрудники проверяют отключение газа, воды, ненужных приборов и пр. Помещения "заразной" зоны лаборатории опечатывают и запирают на замок. Открывание и снятие печатей, запирание и опечатывание всей лаборатории производят сотрудники (научные сотрудники, врачи, лаборанты), имеющие соответствующее разрешение руководителя организации (лаборатории).
2.8.46. Все записи в помещениях, где проводят работу с ПБА, ведут на отдельных листах, которые перед выносом из "заразной" зоны обеззараживают погружением в дезинфицирующий раствор или автоклавируют.
2.8.47. Юридические лица, независимо от организационно-правовых форм и форм собственности, физические лица, в том числе индивидуальные предприниматели, работающие с ПБА, регулярно проводят контроль эффективности фильтров тонкой очистки вытяжной вентиляции, сточных вод на патогенную микрофлору, а при работе с вирулентными культурами сибирской язвы - 1 раз в месяц контроль обсемененности помещения.
2.9. Дополнительные требования при работе с возбудителями глубоких микозов
2.9.1. Все манипуляции с культурами мицелиальной фазы, а также изучение выживаемости грибов во всех фазах проводят в боксе биологической безопасности III класса.
2.9.2. Просмотр посевов с мицелиальными фазами грибов проводят в боксовых комнатах в костюме IV типа с ватно-марлевой маской.
2.9.3. Во избежание заражения аэрогенным путем, при работе с мицелиальными фазами грибов агаровые пластинки с посевами выдерживают в термостате не более 5 суток (до начала спороношения). Не допускается открывать матрацы и пробирки с посевами мицелиальной фазы грибов вне бокса ББ (укрытия).
2.9.4. Работу с дрожжевыми фазами грибов проводят в боксовой комнате в костюме III типа с маской, серологические исследования - в костюме IV типа.
2.9.5. Для проведения подсчета клеточных элементов в камере Горяева суспензии грибов обеззараживают.
2.9.6. При заражении лабораторных животных место введения материала обрабатывают 1% настойкой йода.
2.10. Требования к обеззараживанию материала и уборке помещений
2.10.1. Обеззараживание различных объектов при работе с ПБА проводят в соответствии с санитарными правилами (приложение N 1) и нормативными документами.
2.10.2. Методы и средства обеззараживания определяют в каждом конкретном случае в зависимости от вида ПБА, характера и объема обеззараживаемого материала.
2.10.3. Дезинфекцию, дезинсекцию и дератизацию осуществляют только препаратами, разрешенными в установленном порядке для применения на территории Российской Федерации.
2.10.4. Вновь поступающие на склад организации серии дезинфицирующих средств проверяют на процентное содержание активного вещества. Контроль дезинфицирующих средств проводят согласно установленному порядку.
2.10.5. В лаборатории хранят не менее чем недельный запас дезинфицирующих средств.
2.10.6. Дезинфицирующие растворы в специально оборудованном помещении готовит лаборант или дезинфектор под наблюдением врача (научного сотрудника). Сроки использования рабочих растворов регламентированы нормативными документами по использованию дезинфицирующих средств.
2.10.7. Емкости с дезинфицирующими растворами маркируют в соответствии с нормативными документами.
2.10.8. К дезинсектантам предъявляют те же требования, что и к дезинфицирующим средствам (п.п. 2.10.3-2.10.6.).
2.10.9. Обеззараживание материала обеспечивает руководитель структурного подразделения или выделенный врач (научный сотрудник). При наличии подразделения для централизованного обеззараживания материала его обеспечивает руководитель данного подразделения.
2.10.10. Автоклавирование производит персонал, окончивший специальные курсы.
2.10.11. Контроль работы автоклавов осуществляют в соответствии с нормативными документами.
2.10.12. В лабораторных помещениях поддерживают чистоту, в них не должно находиться материалов, не имеющих отношения к работе.
2.10.13. После текущей дезинфекции рабочих поверхностей с соответствующей виду ПБА экспозицией и облучения бактерицидными лампами младший персонал ежедневно проводит влажную уборку боксов (микробиологических комнат). Уборку проводят в защитной одежде под наблюдением лаборанта. После влажной уборки проводят обеззараживание воздуха и поверхностей бактерицидными лампами в соответствии с нормативными документами.
2.10.14. Лабораторные столы и боксы безопасности готовят к работе лаборанты.
2.10.15. Рабочие поверхности в помещениях "заразной" зоны дезинфицируют после окончания каждого этапа работы.
2.10.16. В помещениях "заразной" зоны проводят еженедельную генеральную уборку с применением дезинфицирующих средств путем протирания поверхностей мебели, приборов, аппаратов, а также стен (на высоту до 2 метров). После влажной уборки проводят обеззараживание воздуха и поверхностей бактерицидными лампами в соответствии с нормативными документами.
2.10.17. Стеклянные поверхности бактерицидных ламп протирают ветошью, смоченной 70% этиловым спиртом, не реже 1 раза в неделю.
2.10.18. Уборочный инвентарь должен быть промаркирован отдельно для "чистой" и "заразной" зон. Перенос его из зоны в зону не допускается.
2.10.19. Мусор из "заразной" зоны лаборатории обеззараживают (приложение N 1).
2.10.20. Холодильники периодически (1 раз в месяц) очищают от наледи с одновременным проведением их дезинфекции. Термостаты один раз в месяц подвергают дезинфекционной обработке.
