---

ГОСТ 20235.2-74 Мясо кроликов. Методы бактериологического анализа Стр. 1 из 34.

У

Группа Н19

ДК 637.517.92 : 576.8.07: 006.354

Г

ССР

ОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ СОЮЗА

М

ГОСТ

2023 5«2’^m“74

ЯСО КРОЛИКОВ

Методы бактериологического анализа

Meat of rabbits.

Methods of bacteriological analysis

Постановлением Государственного комитета стандартов Совета Министров СССР от 2 октября 1974 г. Н9 2284 срок введения установлен

с 01.07.75

Проверен в 1979 г, Срок действия продлен

до 01.07.90

Несоблюдение стандарта преследуется по закону

Настоящий стандарт распространяется на мясо кроликов и устанавливает методы бактериологического анализа, предусмат­ривающие определение аэробов (сальмонелл, бактерий рода Эше- риши, стафилококков, стрептококков, листерий, пастерелл) и ана­эробов (ботулизм, перфрингренс).

1. МЕТОДЫ ОТБОРА ОБРАЗЦОВ

   1. Отбор образцов проводят по ГОСТ 20235.0—74.

2. АППАРАТУРА, МАТЕРИАЛЫ, РЕАКТИВЫ И ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ

   1. « Для проведения анализа применяют:

автоклав электрический по ГОСТ 9586—75;

котлы с паровой рубашкой;

аппарат Коха;

петлю для бактериологического анализа;

баню водяную;

весы лабораторные по ГОСТ 24104—80;

воронки стеклянные по ГОСТ 8613—75;

дистиллятор;

дуршлаг;

колбы стеклянные лабораторные по ГОСТ 10394—72;

Издание официальное Перепечатка воспрещена

* Переиздание. Май, 1981 г.

1 о

ГОСТ 20235Д—74 Стр, 2

кристаллизаторы по ГОСТ 10973—75;

лоток;

лупу по ГОСТ 8309—75;

рН-метр;

микроскоп по ГОСТ 8284—78;

мясорубку бытовую;

ножницы прямые, изогнутые длиной 14 см;

нож;

осветитель ОИ-19;

пинцеты;

•прибор для счета колоний;

пластинку с сеткой для счета колоний;

пеналы металлические для пипеток;

поплавки для пробирок и колб длиной 20, 45 и 75 мм и диа­метром соответственно 5, 9 и 10 мм;

петледержатели;

проволоку из никелевых сплавов диаметром 0,3—0,5 мм по ГОСТ 492—73;

плитку электрическую;

пробирки стеклянные бактериологические по ГОСТ 10515—75;

пипетки вместимостью 1, 2, 5 и 10 см³;

пипетки пастеровские;

скальпель;

стекла предметные по ГОСТ 9284—75;

стекло покровное по ГОСТ 6672—75;

спиртовки стеклянные по РОСТ 10090—74;

колбы стеклянные по ГОСТ 10394—72;

стаканы стеклянные по ГОСТ 10394—72;

ступки фарфоровые с пестиками;

термостат электрический для выращивания бактерий с автома­тическим терморегулятором до температуры 50°С и с ценой деле­ния 0,2°С;

флаконы стеклянные вместимостью 100—250 см³;

холодильник бытовой электрический с температурой в камере

*

холодильники походные (сумки);

цилиндры измерительные вместимостью 10, 100, 500 и 1000 см³ по ГОСТ 1770—74;

часы песочные на 1, 2 и 3 мин по ГОСТ 10576—74;

чашки Петри по ГОСТ 10973—75;

шкаф сушильный лабораторный;

штативы для пробирок;

бумагу фильтровальную по ГОСТ 12026—76;

вату медицинскую гигроскопическую по ГОСТ 5556—75;

нитки по ГОСТ 6309—80

;Стр. 3 ГОСТ 2023S.2—74

марлю медицинскую по ГОСТ 9412—77;

ткань для фильтрования;

масло вазелиновое медицинское по ГОСТ 3164—78;

масло иммерсионное для микроскопии по ГОСТ 13739—78;

мел химический осажденный по ГОСТ 8253—79;

песок кварцевый для тонкой керамики по ГОСТ 7031—75;

экстракт дрожжевой;

диализат дрожжевой;

дрожжи прессованные хлебопекарные;

желчь крупного рогатого скота свежую или сухую обезво­женную;

кровь кролика свежую;

молоко обезжиренное;

мясо говяжье по ГОСТ 779—55;

печень говяжью по ГОСТ 19342—73;

аммоний хлористый по ГОСТ 3773—72;

арабинозу;

глюкозу х. ч. по ГОСТ 6038—79;

галактозу;

глицерин по ГОСТ 6259—75;

дульцит;

железо хлористое;

йод кристаллический по ГОСТ 4159—79;

калия гидрат окиси;

калий йодистый по ГОСТ 4232—74;

калий фосфорнокислый однозамещенный по ГОСТ 4198—75;

калий хлористый по ГОСТ 4234—77;

калий двухромовокислый по ГОСТ 4220—75;

калий фосфорнокислый двузамещенный по ГОСТ 3204—76;

ксилозу;

кислоту серную по ГОСТ 4204—77;

кислоту соляную по ГОСТ 3118—77;

кислоту уксусную по ГОСТ 61—75;

кислоту карболовую;

креатин;

кислоту розоловую;

кальций хлористый кристаллический;

лактозу х. ч.;

малонат;

магний сернокислый;

маннит по ГОСТ 8321—74;

магний хлористый кристаллический по ГОСТ 4209—77;

мяльтозуі

мочевину по ГОСТ 6691—77;

1

4. масло вазелиновое по ГОСТ 3164—78;

натрий-аммоний фосфорнокислый;

натрий серноватистокислый СТ СЭВ 223—75;

натрий фосфорнокислый двузамещенный безводный по ГОСТ 11773—76;

. натрия гидрат окиси по ГОСТ 4328—77;

натрий фосфорнокислый однозамещейный по ГОСТ 245—76;

натрий кислый селенистокислый;

натрий лимоннокислый;

натрий двууглекислый по ГОСТ 4201—79;

натрий хлористый по ГОСТ 4233—77;

парадиметиламидобензолальдегид;

рамнозу;

сахарозу по ГОСТ 5833—75;

салицин;

соль закиси железа и аммония двойную сернокислую по ГОСТ /LOfiQ М*от VW 9 ОТ I

соль натриевую дезоксирибонуклеиновой кислоты;

углерод по ГОСТ 4—75;

свинец уксуснокислый по ГОСТ 1027—67 (СТ СЭВ 263—76);

спирт амиловый чистый;

спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 6962—67;

хинозол;

фенилаланин;

эфир серный;

индикатор Андреде;

-бромтимоловый синий;

брйллиантовый зеленый;

генциан фиолетовый;

кристаллвиолет;

метиловый красный по ГОСТ 5853—51;

метиловый синий;

феноловый красный по ГОСТ 4599——73;

фенолфталеин по ГОСТ 5850—72;

фуксин основной; -

воду дистиллированную по ГОСТ 6709—72;

воду питьевую по ГОСТ 2874—73;

азур-эозин по Романовскому;

эозин;

агар висмут-сульфитный;

агар микробиологический по ГОСТ 17206—71;

бактоагар Плоскирева сухой;

синьку Леффлера;

пептон сухой для бактериологических целей по ГОСТ 13805—76;

пептон импортный чешской фирмы «Спофа» или венгерской фирмы «Рихтер»;

кровь кролика свежую;

плазму цитратную кроличью сухую;

среду Гисса сухую с индикатором ВР;

среду Левина сухую;

сыворотки поливалентные и монорецепторные О и Н — агглю­тинирующие;

сыворотки антиботулинические;

среду Эндо сухую.

3. ПОДГОТОВКА К АНАЛИЗУ

   1. Подготовка и стерилизация посуды и материалов.

      1. Вся посуда для бактериологического анализа перед сте­рилизацией должна быть тщательно вымыта и высушена.

      2. Пробирки должны быть закрыты ватными пробками и завернуты в бумагу; горлышки колб и флаконов закрывают ват­ной пробкой, а сверху — бумажным колпачком, который обвязы­вают ниткой.

      3. Пробки для пробирок и колб готовят из ваты, обверты­вают слоем марли и завязывают ниткой на свободном конце.

      4. Чашки Петри укладывают в металлические пеналы или завертывают в бумагу. Между крышками и дном чашек, предназ­наченных для разливки среды Эндо, можно положить кружки фильтровальной бумаги диаметром на 1—2 см больше диаметра чашки.

      5. В конце пипетки, который берется в рот, вкладывают ку­сочек ваты. Пипетки помещают в металлические пеналы по 6—10 шт. в каждый или завертывают в бумагу.

      6. Подготовленную посуду стерилизуют сухим паром в те­чение 1 ч в сушильном шкафу при температуре 160±5°С.

При отсутствии сушильного шкафа посуду стерилизуют в тече­ние 30 мин в автоклаве при температуре 126±2°С.

Говяжье или конское мясо освобождают от костей, жира и су­хожилий, измельчают на мясорубке и заливают холодной водой из расчета 1000 см³ воды на 500 г мяса. Смесь воды с измельчен­ным мясом медленно нагревают до кипения и кипятят в течение 1,5 ч. Небольшое количество смеси (до 5 л) можно кипятить на 16открытом огне при частом помешивании во избежание пригора­ния частичек мяса. Большое количество смеси лучше кипятить в котлах с паровой рубашкой. Для определения готовности мяс­ной воды сначала фильтруют небольшое количество смеси в про­бирку через бумажный фильтр. Если жидкость прозрачная — вода готова.

Затем жидкость и весь сок из вареного мяса отжимают через ткань, доливают кипяченой водой до первоначального объема, раз­ливают в чистую посуду (колбы, бутыли) и стерилизуют 20 мин в автоклаве при температуре 120°С.

К ЮОО мл мясной воды, приготовленной по п. 3.2.1, добавляют 10 г сухого пептона и 0,5 г хлористого натрия, кипятят в течение 30 мин, после чего доводят уровень воды до первоначального-объ­ема. Затем фильтруют через бумажный фильтр, устанавливают pH 7,0—7,2 насыщенным раствором двууглекислого натрия или 10%-ным раствором гидрата окиси натрия, 15—20 мин стерили­зуют при температуре 120°С. Если после стерилизации в мясо-пеп- тонном бульоне выпадает осадок, его фильтруют вторично и снова стерилизуют. Вторичную стерилизацию для предотвращения вы­падения осадка проводят при более низкой температуре.

В 1000 мл дистиллированной воды растворяют 8,5 г химически⁷ чистого хлористого натрия. Раствор доводят до кипения, охлаж­дают, фильтруют через бумажный фильтр, разливают в колбы или пробирки и стерилизуют 20 мин в автоклаве при температуре 120°С.

К 1000 мл мясо-пептонного бульона, приготовленного по п. 3.2.2, перед стерилизацией добавляют 20 г агара и кипятят на слабом огне при постоянном помешивании до полного растворения.

Мясо-пептонный агар, охлажденный до температуры 50—55°С, осветляют яйчным белком (из расчета один белок на 1000 см³ мясо-пептонного агара), помещают в автоклав, не завинчивая крышку автоклава, или в аппарат Коха на 1 ч, чтобы белок свер­нулся и, оседая, увлек за собой взвешенные частицы. Горячий мясо-пептонный агар фильтруют через ватно-марлевый фильтр и устанавливают pH 7,0—7,4. Разливают во флаконы и пробирки и 20 иин стерилизуют в автоклаве при температуре 120°С.

К 100 см³ дистиллированной воды добавляют 5 г порошка ага­ра, тщательно размешивают и кипятят на слабом огне до полного расплавления агара в закрытой посуде при периодическом поме­шивании во избежание пригорания, фильтруют, разливают в про-

Стр. 7 ГОСТ 2023S.2—74

бирки или флаконы и 20 мин стерилизуют при температуре 120°С или по 30 мин текучим паром трое суток подряд.

К 100 мл расплавленного мясо-пептоннбго агара с pH 7,0—7,4, приготовленного по п. 3.2.4, добавляют 2 см³ 0,5 %-ного водного раствора предварительно подогретой на водяной бане метилено­вой сини, 1,5 см³ 2%-ного раствора эозина, 2 г лактозы и 0,2 г дву­замещенного фосфорнокислого калия. Растворы красок готовят на дистиллированной воде и стерилизуют 1 ч при температуре 100°С. После добавления всех компонентов в указанном порядке среду тщательно перемешивают, разливают в чашки и подсушивают. Среда должна быть красно-фиолетового цвета.

Для приготовления среды Мюллера вначале готовят растворы серноватистокислого натрия и Люголя.

В мерный цилиндр с 50 г серноватистокислого натрия добавля­ют до 100 см³ дистиллированной воды-. Полученный раствор стери­лизуют текучим паром.

Для приготовления раствора Люголя в 100 см³ дистиллирован­ной воды растворяют 25 г кристаллического йода, 20 г йодистого калия.

Для приготовления среды Мюллера в стерильную колбу поме­щают 4,5 г х. ч. мела и стерилизуют сухим жаром, наливают 90 см^э мясо-пептонного бульона, приготовленного по п. 3.2.2, стери­лизуют 30 мин при температуре 120°С, после чего стерильно до­бавляют 2 см³ раствора Люголя и 10 см³ раствора серноватисто­кислого натрия. Среду взбалтывают и разливают в колбы.

К 100 мл стерильной среды Мюллера, приготовленной по п. 3.2.7, добавляют 1 см³ 0,1 %-ного водного раствора бриллианто­вой зелени и 5 см⁸ стерильной желчи крупного рогатого скота. Смесь хорошо взбалтывают, но не стерилизуют.

Среду готовят из двух основных растворов — А и Б.

Раствор А состоит из 5 г пептона чешской фирмы «Спофа» или венгерской фирмы «Рихтер», 7 г безводного двузамещенного фос­форнокислого натрия, 3 г однозамещенного фосфорнокислого нат­рия, 4 г х. ч. лактозы, 100 см³ дистиллированной воды pH 6,9—7,1, Раствор стерилизуют 30 мин при температуре 112°С.

Раствор Б состоит из 10 %-ного раствора кислого селенисто­кислого натрия, приготовленного на стерильной воде. Раствор готовят непосредственно перед употреблением.

При изменении серии любого из входящих в среду компонентов (пептона, кислого селенистокислого натрия, фосфатов) производят предварительную подтитровку, для чего экспериментально опреде-ляют точную пропорцию фосфорнокислого двузамещенного безвод­ного натрия и фосфорнокислого однозамещенного натрия, которая с используемыми образцами пептона и селенистокислого натрия дает pH не выше 6,9—7,1, что регулируется изменением соотноше­ния фосфатов.