---

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ УКРАИНЫ

ПРИКАЗ

26.10.2004 N 521

Об утверждении методических указаний

"Медико-биологические исследования производственных

штаммов микроорганизмов и токсиколого-гигиеническая

оценка микробных препаратов, определение

их безопасности и обоснование гигиенических

нормативов и регламентов"

Согласно статье 40 Закона Украины "Об обеспечении санитарного

и эпидемического благополучия населения" ПРИКАЗЫВАЮ:

1. Утвердить методические указания "Медико-биологические

исследования производственных штаммов микроорганизмов и

токсиколого-гигиеническая оценка микробных препаратов, определение

их безопасности и обоснование гигиенических нормативов и

регламентов" (прилагаются).

2. Департаменту государственного

санитарно-эпидемиологического надзора Министерства здравоохранения

Украины методические указания довести до учреждений и заведений

государственной санитарно-эпидемиологической службы, министерств,

других центральных органов исполнительной власти в установленном

порядке.

3. Контроль за выполнением приказа возложить на директора

Департамента государственного санитарно-эпидемиологического

надзора Министерства здравоохранения Украины Бережнова С.П.

Первый заместитель Министра,

Главный государственный

санитарный врач Украины О.В. Лапушенко

УТВЕРЖДЕНО

Приказ МОЗ Украины

26.10.2004 N 521

Методические указания

"Медико-биологические исследования производственных

штаммов микроорганизмов и токсиколого-гигиеническая

оценка микробных препаратов, определение

их безопасности и обоснование гигиенических

нормативов и регламентов"

1. ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ

1.1. Методические указания предназначены для специалистов,

которые занимаются обоснованием гигиенических нормативов

производственных штаммов микроорганизмов-продуцентив и готовых

форм препаратов, которые их содержат, в объектах производственной

и окружающей сред. Штамм микроорганизмов - это генетически

однородная популяция микроорганизмов с определенными стабильными

специфическими морфологическими, культуральными и биохимическими

свойствами.

1.2. Методические указания составлены с учетом особенностей

токсиколого-гигиенической оценки биологических препаратов на

основе производственных штаммов микроорганизмов. Производственный

штамм - штамм микроорганизмов, который используется в

промышленности при производстве того или другого продукта

(биопрепарата). Патогенные микроорганизмы не допускаются к

использованию как производственные. Штам-продуцент - штамм

микроорганизмов, который продуцирует то или иное вещество

(антибиотик, фермент и др.) и используется для получение конечного

продукта (т.е. продукта биотехнологии). Биотехнология - технология

производства продуктов при использовании живых клеток организмов

(микроорганизмов, растений, животных).

1.3. К производственным штаммам микроорганизмов относятся

микроорганизмы различных категорий (грибы, бактерии), являющиеся

действенными факторами биопрепаратов или продуцентами биологически

активных веществ, которые используются для создания препаратов для

различных отраслей народного хозяйства и здравоохранения

(микробиологические средства защиты растений от вредителей и

болезней, стимуляторы роста растений и микробиологические

удобрения, антибиотики, ферменты, витамины, аминокислоты,

субстанции для лекарственных препаратов, кормовые белки, пищевые

добавки, деструкторы химических загрязнителей и др.).

1.4. Микробный препарат - это препарат, который содержит в

своем составе как действующий ингредиент жизнеспособные

микроорганизмы в нативном или высушенном состоянии. Микробные

препараты могут в своем составе иметь как монокультуры, так и

ассоциации микроорганизмов различных групп, они могут содержать

или только микроорганизмы (например, препараты для пищевой

промышленности) или, кроме микроорганизмов, продукты их

жизнедеятельности, разные минеральные и органические наполнители,

стабилизаторы, эмульгаторы, консерванты, привлекательные продукты

(например, микробные пестициды, стимуляторы роста растений,

микробиологические удобрения).

В отличие от химических веществ, микроорганизмы являются

живыми объектами, способными сохранять жизнеспособность и

размножаться при наличии определенных условий в окружающей среде

или в макроорганизме. Продукты биотехнологии, которые содержат в

своем составе производственные штаммы микроорганизмов, как

правило, не токсичны для теплокровных организмов, но могут

вызывать дисбиотическое, сенсибилизирующее, имуномодулирующе или

другое специфическое действие.

Использование производственных штаммов микроорганизмов и

производство препаратов на основании микробного синтеза

осуществляется предприятиями микробиологической промышленности и

территориальными биотехнологическими предприятиями различной

мощности, биофабриками и биолабораториями. Штаммы,

зарегистрированные как возбудители инфекционных заболеваний у

людей и полезных животных, к применению как производственные не

разрешаются.

1.5. Цель предложенных методических указаний - содействовать

получению однородных данных, которые можно сопоставить, а также

выбору и проведению оптимального объема исследований, необходимых

для обоснования гигиенических регламентов производственных штаммов

микроорганизмов и готовых форм препаратов, которые их содержат.

Предусмотренный этими методическими указаниями объем исследования

- обязательный минимум для исследователей, однако он не является

препятствием для использования других методов при условии их

обоснования.

Исследования предусматривают оценку опасности

производственного штамма микроорганизмов и продуктов биотехнологии

на их основе при поступлении в организм лабораторных животных

путями, адекватными реальным условиям трудовой деятельности и

проживания человека, с целью выбора лимитирующего критерия

вредности и установления ПДК (предельно допустимой концентрации).

1.6. Проведение токсиколого-гигиенических исследований и

определение патогенных свойств новых производственных штаммов

микроорганизмов, разработка ГДК штаммов и продуктов биотехнологии

на основе микроорганизмов, определение опасности для здоровья этих

продуктов осуществляется лабораториями научно-исследовательских

учреждений различных ведомств, которые аккредитованы в

установленном порядке Комитетом по вопросам гигиенического

регламентирования МОЗ Украины.

Гигиеническому регламентированию подлежат штаммы

микроорганизмов, которые прошли в указанных учреждениях первичную

токсиколого-гигиеническую оценку как действующие факторы

биопрепаратов или как продуценты для микробиологического синтеза и

получили в установленном порядке разрешение МОЗ Украины на их

использование в технологических процессах, а также готовые формы

препаратов, изготовленные на основании этих микроорганизмов или

продуктов их метаболизма.

1.7. В случае направления на токсиколого-гигиенические

исследования производственного штамма (или группы штаммов)

микроорганизмов разработчику (владельцу штамма) необходимо

предоставить паспорт штамма со сведениями о его таксономическом

положении, источнике выделения, культурально-морфологические и

биохимические свойства, тесты и критерии идентификации, условия

культивации, способ применения.

В случае направления на исследование готового биопрепарата

необходимо предоставить сведения о составе препарата (содержании

действующего ингредиента и посторонней микрофлоры, наполнютелей,

эмульгаторов и других вспомогательных веществ, агрегатное

состояние, назначение, способ производства).

1.8. В последние годы в связи с развитием биотехнологии

предлагается промышленное использование генетически

модифицированных микроорганизмов. Степень их опасности зависит не

только от патогенных свойств штамма-хозяина и рекомбинантной ДНК,

способности к выживанию в объектах производственной и окружающей

среды, но, особенно, от способности к передаче генетической

информации другим организмам. В связи с отсутствием методических

подходов к гигиеническому регламентированию таких штаммов и

недостаточностью научных данных для разработки критериев оценки их

потенциальной опасности, выброс генетически-модифицированных

микроорганизмов в процессе производства в воздух рабочей зоны и в

окружающую среду запрещается. При получении необходимых данных это

положение может быть пересмотрено.

1.10. При проведении исследований с микроорганизмами следует

обязательно соблюдать правила техники безопасности при работе с

микроорганизмами с целью предотвращения заражения

экспериментаторов и лабораторных животных в соответствии с ГСП

9.9.5-080-02 "Правила устраивания и безопасности работы в

лабораториях (отделах, отделениях) микробиологического профиля".

2. ПРИНЦИПИАЛЬНАЯ СХЕМА ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1. Исследования по токсиколого-гигиенической оценке

микробных препаратов включают несколько этапов:

1) исследование опасного действия производственного штамма

микроорганизма-продуцента,

2) токсикологические исследования готовой формы микробного

препарата,

3) гигиенические исследования.

2.2. Изучение действия на организм теплокровных животных

новых производственных штаммов микроорганизмов является первым

этапом исследований при проведении гигиенического

регламентирования микробных препаратов в объектах производственной

и окружающей сред, направленное на выяснение патогенности

микроорганизма, под которой понимается потенциальная способность

последнего вызывать специфическое (инфекционное) заболевание у

макроорганизма определенного вида. Патогенность является видовым

генетическим признаком микроорганизма и определяется многими

факторами, так называемыми "факторами патогенности", основными из

которых являются инфекционность, инвазивность и токсичность.

Инфекционность - способность вызывать инфекционный процесс в

естественных условиях, тесно связанная с инвазивностью -

способностью преодолевать защитные барьеры организма, проникать и

размножаться в его тканях. Инвазивность осуществляется при помощи

определенного набора средств, в число которых, в частности, входит

капсюльное вещество микроорганизмов, которое защищает их от

фагоцитоза, гемолизины, лейкоцидины, коагулаза, фибринолизин и ряд

других.

Токсичность - способность при помощи токсических продуктов

бактериальной клетки (экзо- и эндотоксинов) вмешиваться в

метаболические функции хозяина, нарушая стабильность его

внутренней среды.

2.3. Многолетний опыт изучения производственных штаммов

микроорганизмов-продуцентив и влияния их на состояние здоровья

лиц, постоянно контактирующих с ними при производстве

биотехнологических продуктов, свидетельствует о возможной

способности этих объектов вызывать также аллергенное или

дисбиотическое действие.

Следовательно, принципиальная схема исследований опасности

производственных микроорганизмов включает в дальнейшем изучение

следующих типов действия: патогенности, имунотоксичности и

дисбиотического действия.

2.4. На втором этапе токсиколого-гигиенических исследований

проводят изучение готовой формы микробного препарата, который

содержит живые вегетативные клетки микроорганизмов или споры).

При токсиколого-гигиенической оценке микробного препарата

прежде всего следует учитывать численность микроорганизмов и

состояние, в котором они находятся в препарате (высушенные или

нативные клетки) и от которого зависит их патогенность. На

последнюю могут влиять также и другие компоненты, которые входят в

микробный препарат: продукты жизнедеятельности, остатки

питательной среды, различные минеральные и органические

наполнители, стабилизаторы, эмульгаторы и т.д. Каждое из этих

веществ может воздействовать на организм как самостоятельно, так и

в комплексе с микроорганизмом, усиливая действие последнего.

Поэтому в дополнение к исследованиям, которые проводятся для

определения безопасности производственного штамма микроорганизмов

- основного действующего фактора препарата, определяют также

общетоксическое действие препарата в острых и субхронических

экспериментах, выявляют сенсибилизирующее и дисбиотическое

действие, раздражающее действие на кожу.

2.5. При наличии производства (опытного или промышленного)

проводится гигиеническое исследование условий производства,

микробиологическое исследование воздуха рабочей зоны и

атмосферного воздуха.

При изучении микробных препаратов, которые при применении